本发明属于医药技术领域；涉及一种多索茶碱药物制剂，尤其是一种多索茶碱注射液的制备方法。
背景技术：
多索茶碱是嘌呤类生物碱物质，首先由意大利abc公司首先研发上市。它是在茶碱n-7位置上引入二氧戊环结构而得到；1998年在我国上市。
多索茶碱的化学名称为：7-(1,3-二氧戊环-2-基甲基)茶碱，其分子量为266.26。多索茶碱是白色针状结晶或结晶性粉末，微溶于水、乙醇和丙酮，在0.1mol/l盐酸溶液中略溶。注射用多索茶碱、多索茶碱片、多索茶碱胶囊及多索茶碱原料均已收载于中国药典2015年版第二部中。
与氨茶碱一样，多索茶碱通过抑制平滑肌细胞内的磷酸二酯酶，使支气管平滑肌松弛，并能通过多种途径达到降低呼吸道高反应性、解除呼吸道痉挛的临床疗效。多索茶碱的作用机理是抑制细胞因子和多种炎症介质的释放。多索茶碱的药理作用包括扩张支气管、抗炎、免疫调节、改善气道粘膜纤毛输送能力、增加膈肌收缩力和镇咳作用，能够安全有效地治疗慢性阻塞性肺炎和支气管哮喘以及多种慢性呼吸系统疾病，是一种具有良好临床应用前景的药物。多索茶碱具有半衰期长、平喘作用强、耐受性好的特点。在扩张支气管方面，多索茶碱的治疗效果优于氨茶碱10-15倍，副作用显著低于茶碱和氨茶碱。
多索茶碱在注射用水中溶解度不高，在室温下溶解度为1-2%；并且受温度变化容易析出结晶。为了改善这一技术问题，中国专利申请cn1676133a公开了一种多索茶碱冻干粉针剂，该粉针剂由多索茶碱和甘露醇等赋形剂采用冷冻干燥法制备。然而，该粉针剂每克主药消耗50-100倍的水，浪费较为严重；同时该粉针剂复溶效果差，容易出现沉淀。
中国专利cn101569603b公开了一种含有多索茶碱的水针剂，该水针剂含有一种ph调节剂，ph为3.93-3.96。该水针剂在0-10℃下放置析出晶体，虽然高温加热后仍然可以使用，但显然临床使用时极为不便，并且会导致有关物质含量增高。
因此，针对现有技术的上述缺陷，需要进一步寻找一种具有优异低温分散稳定性和化学稳定性的多索茶碱注射液的制备方法。
技术实现要素：
本发明的发明目的是克服现有技术的不足，提供一种具有优异低温分散稳定性和化学稳定性的多索茶碱注射液的制备方法。
为实现上述目的，一方面，本发明提供了一种多索茶碱注射液的制备方法，所述方法包括：(1)将羟丙基-β-环糊精溶于注射用水中，用酸调节ph值；(2)加入氨基酸，搅拌使其溶解，得到含有氨基酸的羟丙基-β-环糊精水溶液；(3)加入多索茶碱，搅拌，用碱调节ph值；(4)0.45μm微孔滤膜过滤，分装于西林瓶中，热压灭菌。
根据本发明所述的制备方法，其中，在所述步骤(1)中，羟丙基-β-环糊精与注射用水的重量体积比为(8-15)：100g/ml。
优选地，羟丙基-β-环糊精与注射用水的重量体积比为(9-14)：100g/ml；更优选地，羟丙基-β-环糊精与注射用水的重量体积比为(9.5-13.5)：100g/ml；以及，最优选地，羟丙基-β-环糊精与注射用水的重量体积比为(10-13)：100g/ml。
在一个具体的实施方式中，羟丙基-β-环糊精与注射用水的重量体积比为11.6：100g/ml。
根据本发明所述的制备方法，其中，羟丙基-β-环糊精的分子量为1541。
根据本发明所述的制备方法，其中，在所述步骤(1)中，所述ph值为2-3。
优选地，在所述步骤(1)中，所述ph值为2-2.8；更优选地，在所述步骤(1)中，所述ph值为2-2.6；以及，最优选地，在所述步骤(1)中，所述ph值为2-2.4。
在一个具体的实施方式中，在所述步骤(1)中，所述ph值为2.3。
根据本发明所述的制备方法，其中，羟丙基-β-环糊精与多索茶碱的重量比为(4.2-7.3)：1。
优选地，羟丙基-β-环糊精与多索茶碱的重量比为(4.5-7.0)：1；更优选地，羟丙基-β-环糊精与多索茶碱的重量比为(4.8-6.7)：1；以及，最优选地，羟丙基-β-环糊精与多索茶碱的重量比为(5.1-6.4)：1。
在一个具体的实施方式中，羟丙基-β-环糊精与多索茶碱的重量比为5.8：1。
根据本发明所述的制备方法，其中，在所述步骤(2)中，所述氨基酸选自带羟基的氨基酸。
根据本发明所述的制备方法，其中，在所述步骤(2)中，所述带羟基的氨基酸选自丝氨酸或苏氨酸；优选丝氨酸。
在一个具体的实施方式中，在所述步骤(2)中，所述带羟基的氨基酸选自l-丝氨酸。
根据本发明所述的制备方法，其中，所述氨基酸与多索茶碱的重量比为(0.03-0.28)：1。
优选地，所述氨基酸与多索茶碱的重量比为(0.04-0.25)：1；更优选地，所述氨基酸与多索茶碱的重量比为(0.05-0.22)：1，以及，最优选地，所述氨基酸与多索茶碱的重量比为(0.06-0.19)：1。
在一个具体的实施方式中，所述氨基酸与多索茶碱的重量比为0.12：1。
根据本发明所述的制备方法，其中，在所述步骤(3)中，搅拌温度为30-40℃；搅拌速度为200-400rpm。
在一个具体的实施方式中，在所述步骤(3)中，搅拌温度为35℃；搅拌速度为300rpm。
根据本发明所述的制备方法，其中，在所述步骤(3)中，搅拌时间为0.5-6h。
优选地，在所述步骤(3)中，搅拌时间为0.5-4h；更优选地，在所述步骤(3)中，搅拌时间为0.5-3h；以及，最优选地，在所述步骤(3)中，搅拌时间为1-3h。
在一个具体的实施方式中，在所述步骤(3)中，在所述步骤(3)中，搅拌时间为1-3h。
根据本发明所述的制备方法，其中，在所述步骤(3)中，所述ph值为5.0-6.0。
优选地，在所述步骤(1)中，所述ph值为5.0-5.8；更优选地，在所述步骤(1)中，所述ph值为5.1-5.7；以及，最优选地，在所述步骤(1)中，所述ph值为5.2-5.6。
在一个具体的实施方式中，在所述步骤(1)中，所述ph值为5.4。
不希望局限于任何理论，由于加入带羟基的氨基酸和羟丙基-β-环糊精，导致本发明的多索茶碱注射液在低温下具有优异的分散稳定性和溶解性，同时具有优异的化学稳定性。其中，带羟基的氨基酸的作用更多是促使羟丙基-β-环糊精包合物的包合率增加；从而导致多索茶碱注射液在低温下的溶解性能和分散稳定性更好。另一方面，带羟基的氨基酸和羟丙基-β-环糊精对于化学稳定性均具有一定的贡献，二者与多索茶碱协同形成环糊精包合物有利于改善化学稳定性。
与现有技术相比，本发明具有下列有益技术效果：
i)本发明的多索茶碱注射液浓度大于上市的注射液；具有优异低温分散稳定性（低温下不析出晶体）和化学稳定性（降低有关物质含量）。
ii)本发明制备方法简单易行，重复性好，同时无需其它辅料；设备成本低且无污染；可产生巨大的社会效益和经济效益，适合普遍推广使用。
具体实施方式
下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
通过下述实施例将有助于理解本发明，但不能限制本发明的范围。
实施例1：
将11.6g羟丙基-β-环糊精（分子量为1541）溶于100ml注射用水中；使用磷酸调节ph=2后，然后加入0.25gl-丝氨酸，搅拌使其溶解，得到含有丝氨酸的羟丙基-β-环糊精水溶液；然后加入2g多索茶碱，在35℃和300prm转速下搅拌1.5h，然后用氢氧化钠溶液调节ph至5.2，0.45μm微孔滤膜过滤，以5ml/支分装于西林瓶中，热压灭菌30min得到实施例1的多索茶碱注射液。
实施例2：
将10.2g羟丙基-β-环糊精溶于100ml注射用水中；使用磷酸调节ph=2.5后，然后加入0.38gl-丝氨酸，搅拌使其溶解，得到含有丝氨酸的羟丙基-β-环糊精水溶液；然后加入2g多索茶碱，在30℃和200prm转速下搅拌1h，然后用氢氧化钠溶液调节ph至5.6，0.45μm微孔滤膜过滤，以5ml/支分装于西林瓶中，热压灭菌30min得到实施例2的多索茶碱注射液。
实施例3：
将12.9g羟丙基-β-环糊精溶于100ml注射用水中；使用磷酸调节ph=2.3后，然后加入0.12gl-丝氨酸，搅拌使其溶解，得到含有丝氨酸的羟丙基-β-环糊精水溶液；然后加入2g多索茶碱，在40℃和400prm转速下搅拌1.5h，然后用氢氧化钠溶液调节ph至5.2，0.45μm微孔滤膜过滤，以5ml/支分装于西林瓶中，热压灭菌30min得到实施例3的多索茶碱注射液。
实施例4：
将12.9g羟丙基-β-环糊精溶于100ml注射用水中；使用磷酸调节ph=2.3后，然后加入0.28gl-苏氨酸，搅拌使其溶解，得到含有苏氨酸的羟丙基-β-环糊精水溶液；然后加入2g多索茶碱，在35℃和350prm转速下搅拌2h，然后用氢氧化钠溶液调节ph至5.4，0.45μm微孔滤膜过滤，以5ml/支分装于西林瓶中，热压灭菌30min得到实施例4的多索茶碱注射液。
比较例1：
同实施例1，但不加入丝氨酸。
比较例2：
同实施例1，将l-丝氨酸替换为相同重量的丙氨酸。
比较例3：
同实施例1，但不加入羟丙基-β-环糊精。
比较例4：
同实施例1，但不加入丝氨酸和羟丙基-β-环糊精。
将本发明实施例1-4和比较例1-4的多索茶碱注射液在4℃冰箱中放置1天、5天和30天，使用0.45μm微孔滤膜过滤，测定过滤前后多索茶碱含量变化率以及滤液中有关物质含量。
测试方法采用hplc方法，条件为：c18色谱柱，规格为4.6mm×250mm×5μm；检测波长为273nm；流速为1.5ml/min；流动相为水与乙腈按照体积比60:40组成的混合溶液；柱温30℃；进样量10μl。在测试时，将多索茶碱对照品使用上述流动相配制成100μg/ml的对照品溶液，将本发明实施例1-4和比较例1-4的多索茶碱注射液同样使用流动相稀释成溶液作为供试品溶液。对照品溶液和供试品溶液各取10μl记录色谱峰，根据色谱峰面积计算过滤前后的多索茶碱含量，进而确定含量变化率。有关物质含量采用类似方法测定，根据各杂质峰的面积之和与主峰面积的比值计算得到。
本发明实施例1-4和比较例1-4的多索茶碱注射液过滤前后的含量变化率（%）的结果具体参见表1。
表1
本发明实施例1-4和比较例1-4的多索茶碱注射液的滤液有关物质含量的结果具体参见表2。
表2
结果表明，由于加入丝氨酸（或苏氨酸）和羟丙基-β-环糊精，导致本发明实施例1-4的多索茶碱注射液在低温下具有优异的分散稳定性和溶解性，同时具有优异的化学稳定性。不希望局限于任何理论，从比较例1-2来看，丝氨酸和苏氨酸的作用更多是促使羟丙基-β-环糊精包合物的包合率增加；从而导致多索茶碱注射液在低温下的溶解性能和分散稳定性更好。从比较例3-4来看，在不加入羟丙基-β-环糊精的情况下，多索茶碱注射液在低温下的溶解性能和分散稳定性显然不佳。另一方面，从表2可以看出，丝氨酸（或苏氨酸）和羟丙基-β-环糊精对于化学稳定性均具有一定的贡献，不希望局限于任何理论，二者与多索茶碱协同形成环糊精包合物有利于改善化学稳定性，降低有关物质含量。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均包含在本发明的保护范围之内。