专利名称：蛇毒替代戒毒及蛇毒抗老年痴呆药物及制备方法
技术领域：
本发明属将蛇毒用于生产替代戒毒及治疗老年痴呆的药物。
目前，吸毒对社会治安及人们的身体健康都危害很大，由于毒品吸食后的成瘾性，使吸食者很难戒断，现主要采用戒毒方法是依靠一些有成瘾性的戒毒药物美沙酮、阿片酊等及辅以强制手段，虽取到了一些戒毒效果，但由于毒品使用者的精神依赖性高，而替代药物本身也存在有一定的成瘾性，吸毒者戒断后复吸率也较高，就现阶段，还没有看到蛇毒戒毒药物的报导，只在国外有一些蛇毒在戒毒方面的实验报导。当前，寻找一种确有戒毒实效而无成瘾趋势的药物和方法，已是现代医学研究的一个迫切的问题。
就老年性痴呆而言，一般认为是由于大脑器质性或代谢性病变造成的进行性智能衰退。近期有的学者认为，由于各种疾患引起脑代谢紊乱，多巴胺减少，乙酰胆碱(Ach)增多，造成不平衡，引起脑的功能不平衡，出现智力障碍，脑所指挥的动作迟缓，特别是近年来脂类饮食增加，体育锻炼减少，形成脑血管酸化等，导致广泛性脑萎缩，脑叶萎缩，脑血流供应不足，引起老年性痴呆，目前，治疗老年性痴呆尚无特效药物，主要采用活血化瘀药物，现还没有见到有将蛇毒用于此方面研究的各种报导。
本发明的目的就是要发明一种将蛇毒中有效组分作为主要原料，生产具有较好的毒品戒断性，无成瘾性，较低的复吸率，能有比美沙酮、阿片酊等有一定成瘾性的药戒毒药物更好的替代戒毒药物。同时对老年性痴呆有治疗作用的，能促进四肢、躯干的乙酰胆碱(Ach)释放，导致脑内的乙酰胆碱(Ach)及多巴胺平衡，治疗和缓解老年性痴呆的症状及在一定程度上可恢复智能、记忆的治疗老年性痴呆的药物。
本发明的发明内容是由眼镜蛇科蛇毒神经毒和蝮亚科蛇蛇毒神经生长因子组成。其特点是眼镜蛇科蛇毒神经毒为45-80%，蝮亚科蛇蛇毒神经生长因子为20-55%，其中当神经毒和神经生长因子的比例约为3∶1时效果最好，其制备方法为将眼镜蛇科蛇毒经羧甲基纤维柱层析纯化和经蛋白水解酶加工后得神经毒(肽)，将蝮亚科蛇蛇毒经柱层析纯化和基因工程生产后得神经生长因子，其中所述的眼镜蛇科蛇毒神经毒为眼镜蛇蛇毒神经毒、眼镜王蛇蛇毒神经毒、金环蛇蛇毒神经毒、银环蛇蛇毒神经毒等。所述的蝮亚科蛇毒神经生长因子为蝮蛇蛇毒神经生长因子、五步蛇蛇毒神经生长因子，竹叶青蛇毒神经生长因子、烙铁头蛇毒神经生长因子。将眼镜蛇科蛇毒神经生长和蝮亚科蛇蛇毒神经生长因子按比例混合后直接加工成注射剂或与葡萄糖混合制成胶囊，所述药物的使用量按成人每次原料药用量500-800微克，每日使用二到三次，胶囊原料药装入量为300-400微克/粒。
本发明的效果是这样的，本发明将蛇毒用于替代戒毒及治疗老年性痴呆。由于本发明药物是用所述蛇种蛇毒中有效组分神经毒或神经生长因子制剂。经长期基础药理学和毒理学研究证实，神经毒主要作用于突触后部位、即运动神经未端，阻断神经肌肉传导，对乙酰胆碱效应有竟争性抑制作用，对KCL效应无影响，终板电位(EPPS)和微终板电位(MEPPS)研究结果表明对神经末梢传导及肌膜上被动电位无影响，表明其作用与α-筒箭毒相同。通过外周阻断神经传入中枢，有明显的非麻醉性镇痛作用，主要特点是起效慢、维持时间长，不会出现耐受性，不成瘾，当出现治疗效果后可减量，仍能维持疗效，而未见明显毒副反应和依赖潜力。小鸡颈二腹肌标本测定结果表明，在加入纯化神经毒后，平均6+1分内刺激神经引起的肌肉收缩消失，对乙酰胆碱的反应消失，而直接刺激肌肉及10%KCL的刺激反应未消失。表明该神经毒主要是突触后神经传导阻断作用。豚鼠回肠试验;在5个标本上描记正常低频电刺激引起回肠节律收缩后，在浴管内加入盐酸吗啡(终浓度0.1微克/毫升)，豚鼠回肠收缩明显被抑制，达到最大抑制，收缩仅为原来的40+11%，用Krebs液洗脱3次，至回肠收缩恢复正常后，加入终浓度为2微克/毫升的神经毒，2+1.2分后收缩基线轻度上移，比原来升高20+9%，振幅立即出现明显下降，3分钟后乃出现最大抑制，振幅为未加前45+10%，与单加吗啡抑制作用相似(P＞0.5)。离体小鼠输精管试验;实验过程与操作回肠试验相同，描记正常低频电刺激引起小鼠输精管节律收缩反应后，加终浓度为0.5微克/毫升吗啡，振幅明显下降，为给药前的40+13.5%，洗脱3次经30分后描记正常振幅，加入终浓度2微克/毫升神经毒在1分左右同样显示基线上移，比原来升高15.6%，振幅降至75%左右，记录收缩反应后再加入吗啡12微克，小鼠输精管收缩立即明显下降为给药前40%左右，与单独加吗啡的降低幅度相似(P＞0.5)。小鼠跳跃实验;1)不同眼镜蛇科神经毒对小鼠跳跃实验的影响，小鼠吗啡成瘾后，给予不同眼镜蛇科蛇毒神经毒，结果表明无论口服或肌注均有明显治疗作用(＜0.01-0.001)见表1;
2)纯化神经毒对小鼠跳跃实验治疗作用，用眼镜蛇科纯化神经毒，结果表明无论注射或口服，仍有较好治疗作用，P＜0.01-0.001，见表2;
3)小鼠跳跃实验疗效与剂量关系，经进一步测定眼镜蛇神经毒和粗毒量效关系证明在同量吗啡成瘾后，随给毒量增加而增加，到一定剂量后则出现协同导致呼吸麻痹作用。这一在结果进一步显示口服和腹腔注射神经毒有效组分已被吸收。见表3;
纳洛酮对吗啡、神经毒镇痛作用影响大鼠注射神经毒、吗啡3小时后，痛阈均比对照组提高(P＜0.01)，注射纳洛酮3mg/kg后，吗啡组被逆转，痛阈下降，而神经毒组则仅有轻微下降，镇痛作用仍很明显(P＜0.01)，见表4。
镇痛作用1、小鼠试验;采用热板法，给药前后自身对照或与生理盐水组对比P＞0.01-0.001，结果见表5。
2、大鼠电刺激实验;与实验前自身对照和生理盐水对照有显著差异。P＞0.01-0.001，结果见表6。结果表明蛇毒神经毒镇痛持续时间长，比吗啡稳定，吗啡组随时间延长有一定下降。
神经生长因子的理化性质是这样的，分子量为28000、21000、30000、38000道尔顿。等电点6.8-10，由101、117、274个氨基酸组成。主要药效学作用;能显著增加小鸡胚胎神经纤维再生。
本发明药物的药理实验表明，能延长果蝇存活时间和性成熟时间，与对照组相比延长近1/2时间，有显著差异(P＞0.01)能增强果蝇对不良环境的抵抗能力，与对照组相比有显著差异，能恢复老年动物东莨蓿碱造成记忆损伤。动能和临床证明对骨格有显著增生作用。免疫功能显著增强。
对海洛因、吗啡患者经尿检证实后进行治疗，结果表明在治疗15天内可解除身体依赖性。除每日吸食量较大者仍有腹痛、呕吐等症状产生，需较长时间才能戒断。其余患者在替代期间基本不出现戒断症状。与美沙酮相比无成瘾性，与吗啡递减戒断相比，戒断症状显著低于吗啡递减对照组。
本发明按卫生部新药临床研究技术要求，进行了116例眼镜蛇类神经毒素制剂对海洛因依赖性临床脱瘾和康复疗效观察;结果显示对海洛因戒断症状具有一定控制和缓解作用，单独用药组和复合用药组停药后，尿样吗啡定性实验和纳洛酮催瘾实验全部阴性;阿片类药物戒断综合征量化评分(OWS)衰减值＞90%，临床显效率(临床脱瘾率)100%;复合用药组(本发明药物+阿片酊或美沙酮)疗效最佳;生理和心理学指标测定表明，本发明具有明显康复保健作用，特别是对海洛因精神依赖性有降低趋向，四个月追踪观察显示，本发明复瘾率低于40%，试验分组是采用随机数字表法将自愿受试者分为本发明药物组(80例)、美沙酮对照组(16例)和阿片酊合剂对照组(20例)。其中发明药物单用组40人，复合用药Ⅰ组(本发明药物+美沙酮)20人，复合用药Ⅱ组(本发明药物+阿片酊)20人，美沙酮对照组16人，阿片酊对照组20人。给药方法按全部观察病例均在医护人员监督下以单盲法定时定量口服给药，观察期间除特殊情况做一般对症处理外，一律停用其它戒毒药物和方法。临床疗效评定根据阿片类药物戒断(撤药)综合征评定量表(OWS)观察记录，其试验方案及剂量疗程见表7、试验结果见表8、表9、表10。
本发明对治疗老年性痴呆也有较好的疗效，由于神经毒主要作用于突触后部位、即运动神经未端，阻断神经肌肉传导，对乙酰胆碱(Ach)效应有竞争性抑制作用，由于神经毒的作用，使用本发明药物后促进四肢驱干的乙酰胆碱(Ach)不向脑释放，使乙酰胆碱(Ach)不在脑内集聚，让脑内的乙酰胆碱(Ach)和多巴胺平衡，使大脑代谢平衡，受损神经原再生，可以治疗和缓解老年性痴呆的症状，智能有一定的恢复，记忆有部分改进，自身生活有一定的自理能力，思维及判断力有改进，情感有所进步，从而对恢复脑的正常功能有明显的疗效，使用安全，未出现副作用。以下是几例病例的治疗情况。第一例入院时已进入昏迷状态，四肢活动障碍，时有发热，不能语言，不能行动，大小便失禁，进入植物人状态、临床诊断为老年性痴呆，植物状态，入院后开始服用本发明药物(每日二次，每次二粒)，坚持长期服用，约二十天后，神智恢复，可以叫胃痛。服药约两个月后，患者能恢复语言，清楚回忆往事，叫病痛，分辨谁好谁不好，照顾不周时会骂人。第二例入院时右侧肢体偏瘫，运动性失语，表情呆滞，沉闷，问而不答，剌而不理，卧床，大小便不能自理。诊断为左侧脑血栓形成，血管性老年痴呆症。入院后开始服用本发明药物胶囊，每日二次，每次二粒，半月后神智较前活跃，四肢反射时叫痛，情绪明显活跃，有攻击性，常走动，约两月时情绪明显改进，能分辨人，但右侧上肢活动受限，下床活动好，要烟抽，两个半月后可以说话，不再有攻击性，情绪稳定，能行走，玩耍，右上肢活动好。三个月后见面时能招呼人“坐”，给烟时能正确的将过滤嘴端放入嘴中，能自理食物，行动自如，情绪较前更为平静，智力状况及生活自理能力都有明显进步。第三例曾因脑外伤做过手术，入院时神智不清，胡言乱语，无分辨力，无记忆力，无计算力，无辨别力，行走困难，大小便不能自控。诊断为脑血管硬化栓塞，外伤性血管性老年痴呆症。入院后使用本发明药物胶囊进行治疗，每日二次，每次二粒，四周能认清原手术者，小便时能叫，饮食正常，能主动扣钮扣，要烟抽，一个半月后记忆力明显恢复，认清来人，有一定情感，能陈述一些其他人的情况，三个月后，有一定分辨力，回答问题正确，能下床坐、立，要烟抽，给烟时则多说话，病情稳定。根据初步临床观察，认为本发明药物对治疗老年性痴呆有明显的疗效，使用安全，未出现副作用，对老年性痴呆的治疗效果优于目前使用的其它药物。
以下为本发明药物的几个实施例。
实施例1、用眼镜蛇蛇毒经羧甲基纤维素柱层析纯化和蛋白水解酶处理后，得到眼镜蛇蛇毒神经毒(肽)。将蝮蛇蛇毒经柱层析纯化和基因工程后将所得的神经生长因子按神经毒45%，神经生长因子55%的比例混合后，按原料药400微克/每粒与葡萄糖混合制成胶囊。
实施例2、用眼镜蛇王蛇毒经羧甲基纤维素柱层析纯化和蛋白水解酶处理后，得到眼镜王蛇蛇毒神经毒(肽)。将蝮蛇蛇毒经柱层析纯化和基因工程后将所得的神经生长因子按神经毒50%，神经生长因子50%的比例混合后，按原料药300微克/每粒与葡萄糖混合制成胶囊。
实施例3、用金环蛇蛇毒经羧甲基纤维素柱层析纯化和蛋白水解酶处理后，得到金环蛇蛇毒神经毒(肽)。将五步蛇毒经柱层析纯化和基因工程后将所得的神经生长因子按神经毒55%，神经生长因子45%的比例混合后，按原料药800微克/每次制成注射针剂。
实施例4、用银环蛇蛇毒经羧甲基纤维素柱层析纯化和蛋白水解酶处理后，得到银环蛇蛇毒神经毒(肽)。将烙铁头蛇蛇毒经柱层析纯化和基因工程后将所得的神经生长因子按神经毒60%，神经生长因子40%的比例混合后，按原料药400微克/每粒与葡萄糖混合制成胶囊。
实施例5、用眼镜蛇蛇毒经羧甲基纤维素柱层析纯化和蛋白水解酶处理后，得到眼镜蛇蛇毒神经毒(肽)。将竹叶青蛇蛇毒经柱层析纯化和基因工程后将所得的神经生长因子按神经毒70%，神经生长因子30%的比例混合后，按原料药300微克/每粒与葡萄糖混合制成胶囊。
实施例6、用眼镜蛇蛇毒经羧甲基纤维素柱层析纯化和蛋白水解酶处理后，得到眼镜蛇蛇毒神经毒(肽)。将蝮蛇蛇毒经柱层析纯化和基因工程后将所得的神经生长因子按神经毒65%，神经生长因子35%的比例混合后，按原料药400微克/每粒与葡萄糖混合制成胶囊。
实施例7、用眼镜蛇蛇毒经羧甲基纤维素柱层析纯化和蛋白水解酶处理后，得到眼镜蛇蛇毒神经毒(肽)。将蝮蛇蛇毒经柱层析纯化和基因工程后将所得的神经生长因子按神经毒75%，神经生长因子25%的比例混合后，按原料药400微克/每粒与葡萄糖混合制成胶囊。
实施例8、用眼镜蛇蛇毒经羧甲基纤维素柱层析纯化和蛋白水解酶处理后，得到眼镜蛇蛇毒神经毒(肽)。将蝮蛇蛇毒经柱层析纯化和基因工程后将所得的神经生长因子按神经毒80%，神经生长因子20%的比例混合后，按原料药400微克/每粒与葡萄糖混合制成胶囊。
表1不同眼镜蛇科蛇毒粗毒对小鼠跳跃实验治疗作用N＝8<
>表2眼镜蛇神经毒对小鼠跳跃实验疗效N＝8<
>
表9本发明组与对照治疗前后戒断症状分项比较
表10本发明组与对照组临床脱瘾疗效观察结果时间克毒平单用组克毒平复合I组克毒平复合I组美沙酮组阿片酊组(天)例%例%例%例%例%显效37.5178515751275.0945.01有效717.5315420212.5735.0无效3075.00015212.5420.0显效410.02010017851487.51470.02有效820.000315212.5420.0无效2870.0000000210.0显效615.0201001995161001785.03有效1127.5001500210.0无效2357.500000015.0显效1127.52010020100161001995.54有效1947.500000015.0无效1025.000000000显效1435.02010020100161001995.06有效2152.500000015.0无效512.500000000显效3177.5201002010016100201008有效717.500000000无效25.000000000显效401002010020100161002010010有效0000000000无效0000000000显效4010020100201001593.81780.515有效00000016.215.0无效00000000210.0
权利要求
1.一种蛇毒替代戒毒及蛇毒抗老年痴呆药物，其特征在于由下列物质组合而成眼镜蛇科蛇毒神经毒45-80%，蝮亚科蛇蛇毒神经生长因子20-55%。
2.如权利要求1所述的蛇毒替代戒毒及抗老年痴呆药物，其特征在于所述的眼镜蛇科蛇毒神经毒为眼镜蛇蛇毒神经毒。
3.如权利要求1所述的蛇毒替代戒毒及抗老年痴呆药物，其特征在于所述的眼镜蛇科蛇毒神经毒为眼镜王蛇蛇毒神经毒。
4.如权利要求1所述的蛇毒替代戒毒及抗老年痴呆药物，其特征在于所述的眼镜蛇科蛇毒神经毒为金环蛇蛇毒神经毒。
5.如权利要求1所述的蛇毒替代戒毒及抗老年痴呆药物，其特征在于所述的眼镜蛇科蛇毒神经毒为银环蛇蛇毒神经毒。
6.如权利要求1所述的蛇毒替代戒毒及抗老年痴呆药物，其特征在于所述的蝮亚科蛇蛇毒神经生长因子为蝮蛇蛇毒神经生长因子。
7.如权利要求1所述的蛇毒替代戒毒及抗老年痴呆药物，其特征在于所述的蝮亚科蛇蛇毒神经生长因子为五步蛇蛇毒神经生长因子。
8.如权利要求1所述的蛇毒替代戒毒及抗老年痴呆药物，其特征在于所述的蝮亚科蛇蛇毒神经生长因子为烙铁头蛇毒神经生长因子。
9.如权利要求1所述的蛇毒替代戒毒及抗老年痴呆药物，其特征在于所述的蝮亚科蛇蛇毒神经生长因子为竹叶青蛇蛇毒神经生长因子。
10.如权利要求1所述的蛇毒替代戒毒及抗老年痴呆药物的制备方法，其特征在于眼镜蛇科蛇毒经羧甲基纤维素柱层析纯化，和蛋白水解酶处理后制得的神经毒，将蝮亚科蛇蛇毒经柱层析纯化和基因工程后所得的神经生长因子，将所得的神经毒及神经生长因子按规定比例相互混合后制得。
全文摘要
本发明是将眼镜蛇科蛇毒神经毒、蝮亚科蛇蛇毒神经生长因子用于制备替代戒毒和抗老年痴呆方面的药物，主要是将眼镜蛇科蛇毒、蝮亚科蛇蛇毒经纯化、酶和基因工程处理所得的神经毒及神经生长因子按比例混合后制成，本发明药物替代戒毒有戒断效果好，无成瘾性，效果优于现有戒毒药物。另外，还可用于抗老年性痴呆，防止乙酰胆碱向脑内集聚，使脑内乙酰胆碱及多巴胺代谢平衡，可明显的改善老年痴呆症状，为一种有较好疗效的高效、低毒药物。
文档编号A61K35/58GK1104096SQ9312105
公开日1995年6月28日 申请日期1993年12月22日 优先权日1993年12月22日
发明者熊郁良, 王婉瑜, 刘念昆, 宋建新, 张汪, 毛建斌, 马原野 申请人:中国科学院昆明动物所动物毒素蛇资源开发中心