专利名称：紫杉化合物的纯化方法
技术领域：
本发明涉及用离心分配色谱法纯化紫杉化合物(taxoides)的方法。
更具体地，本发明涉及一种塔佐泰勒(Taxotere)和10-脱乙酰浆果赤霉素III的纯化方法。
在例如EP0253738或EP0336891中或在PCT国际申请WO92/09589所描述的条件下，由紫杉叶提取的10-脱乙酰浆果赤霉素可用于制备塔佐泰勒。
由紫杉叶提取得到的10-脱乙酰浆果赤霉素III，因其来源种类而所含杂质主要是紫杉化合物类产物，例如，αα-苯甲酸基-4-乙酸基-5β.20-掺氟基-1β、7β、13α、19-五羟基-4-乙酸基-5β、20-掺氧基-1β、7α、10β、13α-四羟基-11-紫杉烯或紫杉碱。
由10-脱乙酰浆果赤霉素III半合成法得到的塔佐泰勒含有的主要杂质是10-脱乙酰浆果赤霉素III中的打质酯化产物，以及来自于基侧链2′位碳的差向异构作用的其他质杂。
10-脱乙酰浆果赤霉素III和塔佐泰勒本身一般都可采用液相色谱柱法，尤其是高效液相色谱(HPLC)二氧化硅柱法纯化。然而，如果这些方法特别适合纯化几十克，则它们往工业上延伸会遇到诸如消耗溶剂的量、被有毒残留物污染的载体(二氧化硅)的操作与破坏之类的限制，这些限制变得及为重要。
在构成毒性往往很高、脆性很大的产品的紫杉化合物的情况下，特别重要的是提出这样一些纯化方法，它们具有很高的生产率，不需要购买、使用和破坏贵重的固体载体，需要使用少量的溶剂，并且连续生产很容易自动化。
现在已发现，并且正是构成本发明的目的，紫杉化合物的纯化，特别是塔佐泰勒和10-脱乙酰浆果青霉素III的纯化，可采用离心分配色谱法(CPC)或高速逆流色谱法实施，其方法的原理如由A.Foueaul+和D.Rosset，Ana Lusis，16(3)，157-167(1988)作过描述。
离心分配色谱法是通过以逻辑和自动方式相继建立平衡，使待分离的混合物组分在两种不相混溶的液相之间进行分配。
该方法的特点在于高效分配机制、固定相很强的保留性能、移动相的高速度，这些特点导致在几小时内极好分离。
离分配色谱法需要使用提供两种部分混溶相的两种或多种溶剂。尽管具有这种特性的溶剂数量无限但在工业上尤其重要的是使用不含氯、无毒的工业溶剂。在工业上可使用的危险性小的溶剂中，可以列举诸如甲醇之类的醇、甲基异丁基酮之类的酮和正庚烷或异辛烷之类的脂族烃、甲基叔丁基醚之类的醚、乙酸乙酯之类的酯。
为了实现有效纯化，必需选择一种溶剂混合物，其混合物快速完全分离得到两相，它们的分配系数为0.1-10，优选为0.5-5，更优选为1附近。
分配系数(K)例如是10的产品，在上面相的溶解比下面相高10倍。因此，若上面的相是移动相，则很快被洗脱，若下面的相是移动相，则很长时间之后被洗脱，且分辨率底。相反地，当K在1附近时，其溶解度在两相中实际上是相同的，两种洗脱方式都能使用，或许能将这两种洗脱方式结合起来使用，以达到最大的分辨率。
在10-脱乙酰浆果专业户霉素III的特殊情况下，脂族烃、酯、礅和水的混合物是特别适合的，如下庚烷-乙酸乙酰-甲醇-水(以体积计为1-2-1-2)混合物，特别是脂族酮和水的混合物，如甲基异丁基酮-丙酮-水(以体积计为2-3-2)混合物。
此外，流动相的流量固定时，固定相保留(平衡固定相的占该设备总体积的分数)应尽可能高，至少等于50％是必要的。
另外，为了提高生产率，特别关系到能在高流量下工作，而流量受到转子所施加的最大压力的制约。
在塔佐泰勒特定情况下，使用脂族烃、酯、醇和水的混合物是有利的，例如正庚烷-乙酸乙酯-甲醇-水(以体积计为2-4-3-2)系统，它的保留为80％。分配系数为约0.5，这样得到的参很窄，可快速洗脱，于是达到生产率很明显的提高。
离心分配色谱法可采用任何级达到此效果的已生产的设备实施，如Yoichiro Ito[CRC erit.Rev.Anal.ehem，17 65(1986)]指出的设备，或京都Sanki工程有限公司(日本)生产的设备。
当采用本发明方法得到塔佐泰勒和10-脱乙酯浆果专业户霉素时，本发明还涉及纯化的塔佐泰勒和10-脱乙酰浆果赤霉素。
下述实施例表明本发明是如何实施的。
实施例1塔佐泰勒的纯化塔佐泰勒[即(2R，3S)3-叔丁氧基羰基氨基-3-苯基-2-羟基丙酸(4-乙酸基-2α-苯甲酸基-5β、20-掺氧基-1α、7β、10β-三羟基-9-氧代-11-紫杉烯-13α-基)酯，是在EP0336841中描述的条件下，在乙酸存在下用锌处理下述化合物得到的(2R、3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-3-苯基-2-羟基-丙酸-[4-乙酸基-2α-苯甲酸基-5β.20-桥氧基-1β-羟基-7β、10β-双-(2、2、2-三氯-乙氧基羰基氧)-9-氧化-11-紫杉烯-13α-基]酯。
将10克(2R，3S)3-叔丁基羰基氨基-3-苯基-2-羟基-丙酸-[4-乙酸基-2α-苯甲酸基-5β、20-桥氧基-1β-羟基-7β.10β-双-(2.2.2.-三氯-乙氧基羰基氧)-9-氧化-11-紫极烯-13α基]酯溶入到150厘米3甲基波丁基醚中，然后加10克锌。在蒸发至干酸，得到灰色粉末，将基粉末放入反应器中。
然后搅拌，在5分钟加入6厘米3乙酸和50厘米3乙腈的混合物。在反应器外面用45℃水溶加热1小时。在水溶中冷却之后，在剧烈搅拌下加入850厘米3甲基叔丁基醚，然后用孔隙度4的烧结玻璃器皿过滤锌盐和过量的锌。
疚滤液浓缩至干。这样得到蛋糖霜(meringue)(12克)，立刻将它放到20厘米3乙酸乙酯、15厘米3甲醇、10厘米3正庚烷和10厘米3水中。
在Sanki LLI-07设备上进行离心分配色谱。使用各有将压力限制列55巴的节流阀的两台活塞泵给离心机供料。一台泵借助选择阀输送两相中的一相或另一相；另一泵留给注入用。
在低旋转(200转/分)和高流量(110厘米3/分)下固定相填满其设备之后，立刻加物料。
由水相开始注入两相，并且用水相以流量60厘米3/分洗脱正庚烷-乙酸乙酯-甲醇-水(以体积计2-4-3-2)系统。回收1.9外固定相，即保留为71％，然后回收镏分，每个镏分为15厘米3。将第72-110个镏分合并，浓缩到体积140厘米3。过滤分离所生成的沉淀。这样得到塔佐泰勒三水合物，以内归一化测定达99.7％，产率为80.5％。
实施例2塔佐泰勒的纯化如实施例1那样操作，但使用82克(2R，3S)3-叔丁氧基羰基氨基-3-苯基-2-羟基2-2羟基-丙酸-[-4乙酸基-2α-苯甲酸基-5β.20-桥氧基-1β-羟基-7β.10β-双-(2.2.2-三氯-乙氧基羰基氧)-9-氧化-11-紫杉烯-13α基]酯、82克锌和150厘米3由49.2厘米3乙酸和328厘米3乙腈组成的混合物，得到115克粗产物，该产物在理论上含有49.69克塔佐泰勒，即53克塔佐泰勒三水合物。
用450厘米3甲基叔丁基醚再提取上述粗产物，然后用总量450厘米3含15克氯化纳的水洗涤3次。合并的水相用2次200厘米3甲基波丁基醚提取。将三次醚化提取物合并浓缩到干。这样得到干2克蛋糖霜，它再用120厘米3甲醇溶解。
在得到和浅黄色溶液里，依次加入160厘米3乙酸乙酯、80厘米3水和80厘米3正庚烷。
于是得到总体积为460厘米3二个透明液相，其上层只是总本积的约1/4而不是35％无塔佐泰勒。
离心分配色谱设备是以流量110厘米3/分和旋转速度为200转/分用右机相充满的。设备满后，将旋转速度提高到800转/分加入水相，然后在加入有机相之后，用200厘米3有机相洗涤；再用水相以流量60厘米3/分洗脱。
回收2.5升过量固定相，即保留为67.7％。
在通过200厘米3移动水相后，回收36)个馏分，每个馏分为12-13厘米3。第25-110馏分浓缩至体积200厘米3，得到46.5克塔佐泵勒三水合物沉淀，其纯度为99.1％，产率为87.7％。
实施例310-脱乙酰浆果赤霉素III在总体积245厘米3的Sanki HPCPC系列1000色谱仪上进行离心分配色谱分离。
通过甲基异丁基酮-丙酮-水(按体积计为2-3-2)混合物以有机相流量6厘米3/分和水相流量3厘米3/分1小时泵送，以下行方式使转子以100转/分旋转。
然后将旋转速度增加到1200转/分，再加入1.5克已结晶粗10-脱乙酰-浆果赤霉素III，其含有83.3％10-脱乙酰浆果赤霉素III和3.4％10-脱乙酰-19-羟基浆果赤霉素III。
其后以下行方式用水相、流量为3厘米3/分洗脱，每隔2分钟回收馏分，每个馏分为6厘米3。
在第39-52个馏分中含有10-脱乙酰-19-羟基浆果赤霉素。
在第61个馏分，实例洗脱方向，这时以下行方式使用有机相作为流动相，流量为5厘米3/分，并且每隔2分种回收馏分，每个馏分为10厘米3。
第70-84个馏分含有10-脱乙酰浆果赤霉素III，将这些馏分减压浓缩。于15厘米3乙腈中重结晶之后，得到1.25克白色晶体状的、乙腈溶剂化的10-脱乙酰-浆果赤霉素III(1摩尔)采用内归-化由HPLC测定其纯度为98％。
产率(修正)是91.2％。
权利要求
1.采用由水与不含氯和无毒的溶剂组成的在两个部分混溶相之间离心分配色谱法纯化10-脱乙酰浆果赤霉素III和塔佐泰勒的方法，所述溶剂选自于醇、醚、酯、酮和脂族烃，该方法的特征在于为纯化10-脱乙酰将果赤霉素III，使用在两相之间的分配系数为0.1-10的脂族烃、酯、醇和水的混合物，或在两相之间的分配系数为0.1-10的脂族酮与水的混合物，为纯化塔佐泰勒，使用在两相之间的分配系数为0.1-10的脂族烃、酯、醇和水的混合物。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于在两相之间的分配系数为0.5-5。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于在两相之间的分配系数为1附近。
4.根据权利要求1-3之任一权利要求所述的方法，其特征在于为分离10-脱乙酰-将果赤霉素III，使用正庚烷、乙酸乙酯、甲醇和水的混合物。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于使用正庚烷-乙酸乙酯-甲醇-水混合物(以体积计为1-2-1-2)。
6.根据权利要求1-3之任一权利要求所述的方法，其特征在于使用甲基异丁基酮、丙酮和水的混合物。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于使用甲基异丁基酮-丙酮-水混合物(以体积计为2-3-2)。
8.根据权利要求1-3之任一权利要求所述的方法，其特征在于为了纯化塔佐泰勒，使用正庚烷、乙酸乙酯、甲醇和水混合物。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于使用正庚烷-乙酸乙酯-甲醇-水混合物(按体积计为2-4-3-2)。
全文摘要
用离心分配色谱法纯化紫杉化合物(塔佐泰勒、10-脱乙酰—将果赤霉素Ⅲ)的方法。
文档编号A61K36/15GK1119860SQ94191548
公开日1996年4月3日 申请日期1994年3月18日 优先权日1993年3月22日
发明者A·度兰德, A·格鲍德, R·马格拉夫 申请人:罗纳-布朗克·罗莱尔股份有限公司