专利名称：：皮质类甾醇在减少全氟化学药品乳剂之副作用中的应用的制作方法发明的背景发明的领域本发明是针对皮质类甾醇的用途，特别是皮质类甾醇在减少或降低全氟化学药品乳剂对动物止血系统和血清化学参数之副作用中的应用。相关技术描述全氟化学药品(PFC)乳剂已开发出许多不同的用途。因为PFC对包括O2和CO2在内的气体有很高的内在溶解性，它们特别用作O2/CO2的运输剂、人造血及血红细胞的替代物。PFC乳剂也发展用作生物成象的造影剂。然而，PFC乳剂用于动物的一个缺点是这些乳剂会产生某些不良的副作用。在对动物和人的研究中，都已报道由PFC乳剂的静脉注射导致的副作用。在接受全氟辛基溴(PFOB)的人志愿者身上观察到两类副作用。PFOB，也称作Perflubron，是一种PFC，被研制用作称为显像剂BP的血池显像剂(blood-pollimagingagent)的一种成分。显像剂BP是一种含有90％(w/v)的Perflubron和且其整体平均粒径为0.2μ的磷脂乳剂。注射PFC乳剂后的第一个2小时内产生第一类副作用。这些急性副作用基本上有皮肤潮红和背痛。第二类副作用产生于注射2小时后并一般持续大约一天。这些延迟的副作用，描述为一种“流感样综合症”，包括发烧、头晕和偶尔恶心。S.F.Flaim，等，“CharacterizationandMechanismofSideEffectsofImagentBP(HighlyConcentratedFluorocarbonEmulsion)inSwine”(显影剂BP(高浓度的全氟碳乳剂)在猪中产生副作用的特征及机理)，Vol.26，InvestigativeRadiology，NovemberSupplement1991，S122-S124PFC乳剂对猪也会引起副作用。与人志愿者一样，PFOB乳剂对猪静脉给药急性和延迟作用都会产生。急性反应包括平均肺动脉压升高(mPAP)和严重的皮肤潮红，都会在注射后2小时内完全消退。延迟的副作用是一种发热反应，特征是体温升高1-2℃，注射后4小时升到顶点并在随后的2到24小时退烧。mPAP的早期升高据信与肺血管内巨噬细胞的活化有关，而皮肤潮红归因于巨噬细胞活化后的前列腺素的持续释放。S.F.Flaim，等，“CharacterizationandMechanismofSideEffectsofImagentBP(HighlyConcentratedFluorocarbonEmulsion)inSwine”，Vol.26，InvestigativeRadiology，NovemberSupplement1991，S122-S124。对猪的进一步研究表明，地赛米松、布洛芬或吲哚美辛可以有效的预防这些特殊的临床副作用。例如，mPAP的急性和暂时升高以及皮肤潮红都可以被上述三种药物当中的任何一种成功地阻断。另外，地赛米松、布洛芬或吲哚美辛也可以成功地预防延迟的发热作用(同上)。尽管对这些动物和人的研究有了进展，但它们还没有被辨别出那些可能同静脉注射PFC乳剂有关的其它问题或副作用。假如增加这些乳剂的临床应用，将会令人满意的辨别出其它潜在的副作用。而且一旦辨别出这些副作用，将会非常有利于找出可能减轻或甚至预防这些副作用的方法。发明概述本发明是针对改善全氟化学药品乳剂对动物止血系统和血清化学的副作用的一种方法。本方法包括在全氟化学药品乳剂静脉给药之前对动物静脉给以皮质类甾醇。皮质类甾醇给药量足以改善全氟化学药品乳剂对动物止血系统和血清甘油三酯/酶水平的副作用。皮质类甾醇静脉给药后，全氟化碳乳剂静脉给药。皮质类甾醇最好按体重从大约0.2mg/kg至约6mg/kg的剂量给药，更好的剂量大约是1mg/kg。全氟化学药品乳剂中使用的全氟化物最好按体重从大约0.5ml/kg至约10ml/kg的剂量给药。对于止血系统，本方法可用于减少全氟化物引起的对前凝血酶时间和活化的部分凝血激酶时间的副作用，并抑制全氟化物引起的血小板减少症。对于血清化学，本方法可用于减少全氟化碳引起的对天冬氨酸转氨酶活性，乳酸脱氢酶活性和胆红素等副作用。皮质类甾醇最好是地赛米松，而全氟化物最好从下组中包括的选择全氟二氯辛烷、全氟萘烷、全氟甲基萘烷、全氟二甲基萘烷、全氟二甲基金刚烷、全氟辛基溴、全氟-4-甲基-八氢化喹嗪酊(quinolidizine)、全氟-N-甲基-癸氢化喹啉、F-甲基-1-氧-萘烷、全氟-双环(5.3.0)癸烷、全氟八氢化喹嗪酊、全氟-5，6-二氢-5-癸烯和全氟-4，5-二氢-4-辛烯、氯代的全氟化碳及它们的混合物。最优选的是，在本方法中所用的全氟化物是全氟二氯辛烷。全氟乳化学药品剂中的全氟化物含量最好从大约15v/v％到约70v/v％，更好的含量是大约40v/v％。关于本方法步骤的计时，最好在皮质类甾醇给药后几小时内全氟化学药品乳剂开始给药，并且也可以在皮质类甾醇给药后立刻给药。本发明对经PFC乳剂治疗后的动物提供了几方面好处。例如，皮质类甾醇的预处理减轻或预防PFC引起的对凝血系统的副作用。预处理实际上消除了PFC引起的对前凝血酶时间和活化的部分凝血激酶时间等的副作用，并明显抑制PFC引起的血小板减少症。皮质类甾醇预处理也能减轻或消除PFC引起的对血清某些化学参数的副作用。例如，预处理抑制PFC引起的血清甘油三酯和胆红素升高，以及天冬氨酸转氨酶活性和乳酸脱氢酶活性的增加。本发明的详细说明本发明是针对改善全氟化学药品乳剂对动物止血系统和血清化学的副作用的一种方法。本方法包括在全氟化学药品乳剂静脉给药之前对动物静脉给以皮质类甾醇。皮质类甾醇的给药量足以改善全氟化学药品乳剂对动物止血系统和血清甘油三酯/酶水平的副作用。皮质类甾醇静脉给药后，全氟化碳乳剂再静脉给药。皮质类甾醇最好按体重从大约0.2mg/kg到约6mg/kg的剂量给药。大约0.1mg/kg的低剂量时，用地赛米松的预处理对PFC引起的副作用几乎没有影响；而高于目前这样安全的大约6mg/kg剂量时，该剂量可引起下丘脑-垂体-肾上腺轴生理学的令人讨厌的变化。皮质类甾醇的最合适给药剂量大约是1mg/kg。全氟化学药品乳剂中用的全氟化物最好按体重从大约0.5ml/kg至约10ml/kg的剂量给药。对于止血系统，本方法可用于减少全氟化物引起的对前凝血酶时间和活化的部分凝血激酶时间的副作用，并用于抑制全氟化物引起的血小板减少症。对于血清化学，本方法可用于减少全氟化碳引起的对天冬氨酸转氨酶活性、乳酸脱氢酶活性和胆红素等的副作用。皮质类甾醇最好是地赛米松，全氟化物最好从下组中包括的选择全氟二氯辛烷、全氟萘烷、全氟甲基萘烷、全氟二甲基萘烷、全氟二甲基金刚烷、全氟辛基溴、全氟-4-甲基-八氢化喹嗪酊、全氟-N-甲基-癸氢化喹啉、F-甲基-1-氧-萘烷、全氟-双环(5.3.0)癸烷、全氟八氢化喹嗪酊、全氟-5，6-二氢-5-癸烯和全氟-4，5-二氢-4-辛烯、氯代的全氟化碳及它们的混合物。最优选的是，在本方法中所用的全氟化物是全氟二氯辛烷。全氟化学药品乳剂中的全氟化物含量最好从大约15v/v％到约70v/v％，更好的含量为大约40v/v％。对于本法步骤的计时，最好在皮质类甾醇给药后几小时内全氟化学药品乳剂开始给药，并且也可以在皮质类甾醇给药后立刻给药。实施例研究设计和说明以下进行一项研究，来评价成年雄狒狒(狒狒属鼯猴属Papiocynocephalus)在40v/v％全氟二氯辛烷(PFDCO)急性静脉注射前用和不用1ml/kg的地赛米松处理后的相关反应。选用40v/v％PFDCO乳剂的剂量能使狒狒产生最小的可逆转的副作用，就其血管内气体运输而论将是有效的。地赛米松的预处理法是以能引起抗炎作用的剂量水平静脉给药。40v/v％PFDCO乳剂包括PFDCO母体乳剂及添加23.4％的盐溶液。母体乳剂的专门组分、附加的盐溶液及最终配方见表1。表140v/v％PFDCO乳剂的配方</tables>经过兽医的完全健康检查并批准用于研究后，挑选了12只成年的雄狒狒(狒狒属鼦猴属)。动物的年龄为8-20岁，或野生或群生的并且都是临床上很健康的。12只狒狒分为4个治疗组每组3只。一组和二组的每只动物接受1.0mg/kg的PFCDO(2.5mg/kg的母体乳剂附加23.4％氯化钠)，并且二组的动物还先静脉接受1mg/kg的地赛米松，然后立刻注射PFDCO。三组和四组的每只动物接受2.0mg/kg的PFDCO(5.0mg/kg的母体乳剂附加23.4％氯化钠)，而四组的动物还在注射之前先静脉接受1mg/kg的地赛米松。狒狒用氯胺酮盐酸盐(1M)辅以安定镇静后，注射地赛米松和PFDCO，当需要维持镇静时添加氯胺酮盐酸盐的剂量给药。镇静和预处理后采血，一个存在于血管导管内的16-20量器放入并固定于隐静脉中用于各自乳剂的注射。40v/v％PFDCO乳剂的剂量以大约每分钟4-6ml的速度给药。PFDCO乳剂给药后抽取和分析30天期间内的血样。采集所有血样时狒狒用氯胺酮盐酸盐(1M)辅以安定镇静，并且当需要维持镇静时添加氯胺酮盐酸盐的剂量给药。用一种非侵入性的血压装置测量非直接的系统血压、用直肠温度计监测体温。另外呼吸频率通过监测胸或腹部的呼吸直接测定，通过外周脉搏扪诊或胸部触诊测定心率。从外周静脉经皮采集血样。数据分析方法学对于有多重基线的参数和/或注射前测定，计算每只动物的基线平均值。从平均基线得到的作用变化进行了统计学评价，并且对在各个采样时间用和不用地赛米松预处理的每个PFC剂量水平的两组对照进行了评价。变量的单因素分析(ANOVA)用于检验组内和组间超时的显著性。显著性水平限定P＜.05和P＜.01。以下结果与列于以下文献中的成年雄狒狒的正常值进行了比较，BrendaM.Hainsey，等，“ClinicalParametersoftheNormalBaboons(Papiospecies)andChimpanzees(Pantroglodytes)”，Vol.43，No.3，LaboratoryAnimalScience，June，1993。对VIII因子分析，结果与在以下文献中报道的狒狒正常值的范围进行了比较，HollaceM.Feingold，等，“CoagulationAssaysandPlateletAggregationPatternsinHuman，Baboon，andCanineBlood”，Vol.47，No.10，AmericanJournalofVeterinaryResearch，October，1986.。地赛米松预处理对止血系统的影响经过长期研究四个治疗组的前凝血酶时间(PT)见表2。低剂量PFC的动物中，有证据表明注射后6小时PT升高，注射后一天内持续增高。然而经过地赛米松预处理的低剂量动物，在整个研究期间PT没有显著性变化。与基线和经过地赛米松预处理的高剂量动物相比，高剂量的狒狒在注射4、6小时后及一天内PT明显升高。与基线相比时，给药2天内高剂量动物的PT持续明显的延长。对预处理过的高剂量动物来说，PT离开基线的显著性变化只发生在注射后30天；然而，这次升高被看作没有生理上的显著性。活化的部分凝血激酶时间(aPTT)的结果列于表3。注射后一天，与经过预处理的低剂量的动物相比，低剂量的狒狒显示出aPTT的明显升高。与基线和经过地赛米松预处理的高剂量动物相比，高剂量的狒狒在注射4、6小时后及一天内aPTT明显升高。虽然被看作没有生理上的显著性，在第7天高剂量动物的aPTT离开基线明显降低。同时，经过地赛米松预处理的高剂量动物，aPTT没有离开基线的显著性变化并且凝结时间都在狒狒的正常范围之内。因子VIII(FVIII)的结果总结于表4。低剂量组与预处理过的低剂量组的FVIII水平明显地偏离基线而且处理之间呈散布，然而所有值均在狒狒的正常范围之内。给药后的2、4、7和14天，高剂量动物的FVIII水平超出正常值的上限。只是在给药后的6小时、1天和2天，预处理过的高剂量动物的FVIII的水平也超出正常值上限，比未处理过的动物快得多地回到正常范围。不同处理组的血浆血纤蛋白原的值见表5。在第一天和第二天，低剂量狒狒血纤蛋白原的浓度超出正常值的上限(214mg/dl)，并在第二天明显地偏离基线。在第一天和第二天，预处理过的低剂量狒狒血纤蛋白原的浓度也超出正常值的上限，然而这些变化被看作没有生理上的显著性。注射后6小时，与基线相比，高剂量组的血纤蛋白原的浓度明显降低，并且该浓度低于狒狒正常值的下限(118mg/dl)。司时与基线相比，在第一天和第二天，预处理过的高剂量组的血纤蛋白原的水平显著升高，并且在1、2和4天时超出正常值的上限。在未处理过的研究组中，PFDCO的静脉给药也引起血小板减少症。四个研究组的血小板数据见表6。一只狒狒血小板数目的正常范围是164,000-394,000/mm3，数值低于表明血小板减少的该范围。与正常值的下限相比，注射后第四天和第七天，低剂量的狒狒中度到适度地血小板减少。同时，由于在整个研究期间这些动物的血小板值均在正常范围之内，预处理过的低剂量动物没有血小板减少。其间所有高剂量组都显示了血小板减少的信号。然而，在2至14天内未处理过的高剂量动物是血小板减少，而直到第四天处理过的高剂量组未见血小板减少。地赛米松预处理对血清化学参数的影响只分析了两个高剂量研究组的临床化学参数。血清甘油三酯(TG)，全胆红素和直接胆红素的数值见表7和8。关于甘油三酯，高剂量的狒狒在1、2和4天超出正常范围的上限(94mg/ml)；而增加了地赛米松预处理的狒狒组则很好地在狒狒的正常范围之内。TG的增加可能与皮质类甾醇和/或PFC乳剂等所含的外源性甘油三酯的注射、获得血样的化学镇静步骤数以及在注射后头4天重要信号的监测有关。高剂量的动物在4、6小时和1天时，全胆红素的数值超出或位于狒狒正常值的上限(0.40mg/ml)，并且预处理过的动物组在4和6小时位于上限。这些值的升高可能是由于改变了血红蛋白代谢或者是到肝网状内皮细胞(Kupffer)对乳剂颗粒的吞噬。关于直接胆红素，在注射后6小时和1天，高剂量组超出狒狒的正常范围(0.20mg/ml)，而所有预处理组的值均在正常范围之内。天冬氨酸转氨酶(AST)的活性值见表9。在注射后4、6小时以及1、2和4天，预处理和未处理过的两个高剂量组的AST酶活性均超出狒狒正常范围的上限(62U/L)。然而，在注射后6小时和1、2天，高剂量组的AST值明显高于预处理过的高剂量组。血清乳酸脱氢酶(LDH)的活性值也见表9。在注射后的几次测量时，高剂量组动物的LDH显著增高，并且在4小时到4天内所有LDH值均高于狒狒的正常范围的上限(438U/L)。预处理过的高剂量组，只在1和2天时LDH值超出正常值范围的上限。而且在整个研究期间，该组LDH的水平没有离开基线的明显变化。本发明为经PFC乳剂治疗的动物提供几方面好处。例如，皮质类甾醇预处理减轻或防止PFC引起的对凝血系统的副作用。预处理基本上消除了PFC引起的对前凝血酶时间和活化的部分凝血激酶时间等的副作用，并明显抑制PFC引起的血小板减少症。皮质类甾醇预处理也减轻或消除PFC引起的对血清化学参数的副作用。例如，预处理抑制PFC引起的血清甘油三酯和胆红素的升高，以及天冬氨酸转氨酶的活性和乳酸脱氢酶活性增高。表2前凝血酶时间(秒意味着明显偏离基线(P≤0.05)-意味着经过预处理和未处理的一个PFC剂量组内的显著性变化(P≤0.05)+意味着明显偏离基线(P≤0.01)@意味着经过预处理和未处理的一个PFC剂量组内的显著性变化(P≤0.01)表3活化的部分凝血激酶时间(aPTT)(秒)</tables></tables>*意味着明显偏离基线(P≤0.05)-意味着经过预处理和未处理的一个PFC剂量组内的显著性变化(P≤0.05)+意味着明显偏离基线(P≤0.01)@意味着经过预处理和未处理的一个PFC剂量组内的显著性变化(P≤0.01)表4因子VIII(FVIII)(％)</tables></tables>*意味着明显偏离基线(P≤0.05)-意味着经过预处理和未处理的一个PFC剂量组内的显著性变化(P≤0.05)+意味着明显偏离基线(P≤0.01)@意味着经过预处理和未处理的一个PFC剂量组内的显著性变化(P≤0.01)表5血纤维蛋白原(mg/dl)<tablesid="table8"num="008"><tablewidth="159"align="left">基线MeanStdn4HourMeanStdn6HourMeanStdn1DayMeanStdn2DayMeanStdn4DaysMeanStdn7DaysMeanStdn14DaysMeanStdn30DaysMeanStdn</table></tables><tablesid="table9"num="009"><tablewidth="428">1ml/kgPFC1ml/kgPFCDexam2ml/kgPFC2ml/kgPFCDexam207.833.53218.723.63187.519.83190.013.03175.321.93200.027.83159.337.63193.317.63170.34.03187.755.13113.0+@51.13200.018.03247.086.23248.759.03146.7@39.53260.0+17.33276.7*58.43238.342.53187.736.63253.3*30.63201.716.13210.027.83210.034.63230.043.63156.01.73192.721.93183.310.43195.733.93148.517.63173.322.53163.319.33190.720.63150.013.23166.714.43152.35.93169.015.93</table></tables>*意味着明显偏离基线(P≤0.05)-意味着经过预处理和未处理的一个PFC剂量组内的显著性变化(P≤0.05)+意味着明显偏离基线(P≤0.01)@意味着经过预处理和未处理的一个PFC剂量组内的显著性变化(P≤0.01)表6血小板数(#/mm3*意味着明显偏离基线(P≤0.05)-意味着经过预处理和未处理的一个PFC剂量组内的显著性变化(P≤0.05)+意味着明显偏离基线(P≤0.01)@意味着经过预处理和未处理的一个PFC剂量组内的显著性变化(P≤0.01)表7甘油三酯(mgdl)*意味着明显偏离基线(P≤0.05)-意味着经过预处理和未处理的一个PFC剂量组内的显著性变化(P≤0.05)+意味着明显偏离基线(P≤0.01)@意味着经过预处理和未处理的一个PFC剂量组内的显著性变化(P≤0.01)表8全胆红素直接胆红素(mg/dl)(mg/dl)<tablesid="table12"num="012"><tablewidth="158"align="left">基线MeanStdn4HourMeanStdn6HourMeanStdn1DayMeanStdn2DayMeanStdn4DaysMeanStdn7DaysMeanStdn14DaysMeanStdn30DaysMeanStdn</table></tables><tablesid="table13"num="013"><tablewidth="428">2ml/kgPFC2ml/kgPFCDexam2ml/kgPFC2ml/kgPFCDexam0.20.030.20.130.20.030.20.130.6*0.330.4*0.130.5*0.530.20.130.4*0.130.4*0.130.30.130.10.030.4*0.230.20.030.40.430.10.030.30.230.20.130.30.230.10.030.20.130.20.130.20.130.20.130.30.130.10.130.10.030.10.030.30.130.20.130.10.030.10.130.20.130.10.130.10.030.10.03</table></tables>*意味着明显偏离基线(P≤0.05)-意味着经过预处理和未处理的一个PFC剂量组内的显著性变化(P≤0.05)+意味着明显偏离基线(P≤0.01)@意味着经过预处理和未处理的一个PFC剂量组内的显著性变化(P≤0.01)表9SGOT-ASTLDH(U/L)(U/L)</tables>*意味着明显偏离基线(P≤0.05)-意味着经过预处理和未处理的一个PFC剂量组内的显著性变化(P≤0.05)+意味着明显偏离基线(P≤0.01)@意味着经过预处理和未处理的一个PFC剂量组内的显著性变化(P≤0.01)详细说明中的实施方案只是用于说明的目的，并不打算限制本发明的范围。相反，本发明由所附的权利要求和此外任何的等价来限定。权利要求1.一种用于改善全氟化学药品乳剂对动物止血系统和血清化学之副作用的方法，包括以下步骤在含有全氟化物的全氟化学药品乳剂静脉给药之前对静脉给以动物皮质类甾醇，所述皮质类甾醇的给药量足以改善所述全氟化学药品乳剂对所述动物止血系统和血清甘油三酯/酶水平的副作用，并且接着进行所述全氟化学药品乳剂的静脉给药。2.如权利要求1的方法，其中，所述皮质类甾醇按所述动物的体重从大约0.2mg/kg至约6mg/kg的剂量给药。3.如权利要求2的方法，其中，所述皮质类甾醇按大约1mg/kg的剂量给药。4.如权利要求1的方法，其中，所述全氟化物按所述动物的体重从大约0.5至10ml/kg的剂量给药。5.如权利要求1的方法，用于减少全氟化物引起的对胆红素、天冬氨酸转氨酶活性和血清中血清乳酸脱氢酶活性的副作用。6.如权利要求1的方法，用于减少全氟化物引起的对前凝血酶时间和活化的部分凝血激酶时间等的副作用及抑制全氟化物引起的血小板减少。7.如权利要求1的方法，其中，所述皮质类甾醇是地赛米松。8.如权利要求1的方法，其中，所述全氟化物是从下组中包括的选择全氟二氯辛烷、全氟萘烷、全氟甲基萘烷、全氟二甲基萘烷、全氟二甲基金刚烷、全氟辛基溴、全氟-4-甲基-八氢化喹嗪酊、全氟-N-甲基-癸氢化喹啉、F-甲基-1-氧-萘烷、全氟-双环(5.3.0)癸烷、全氟八氢化喹嗪酊、全氟-5，6-二氢-5-癸烯和全氟-4，5-二氢-4-辛烯、氯代的全氟化碳及它们的混合物。9.如权利要求8的方法，其中，所述全氟化物是全氟二氯辛烷。10.如权利要求1的方法，其中，所述全氟化学药品乳剂中的所述全氟化物含量从大约15v/v％到约70v/v％。11.如权利要求10的方法，其中，所述全氟化学药品乳剂中的所述全氟化物含量为大约40v/v％。12.如权利要求1的方法，其中，在所述皮质类甾醇的所述给药步骤的大约几小时后开始所述全氟化学药品乳剂的所述给药步骤。13.如权利要求12的方法，其中，在所述皮质类甾醇的所述给药步骤后立刻开始所述全氟化学药品乳剂的所述给药步骤。全文摘要本发明是针对减少或降低全氟化学药品(PFC)乳剂对动物止血系统和血清化学参数的副作用的方法。该方法包括在含有全氟化物的全氟化学药品乳剂静脉给药之前对动物静脉给以皮质类甾醇，所述皮质类甾醇的给药量足以改善所述全氟化学药品乳剂对所述动物止血系统和血清甘油三酯/酶水平的副作用。在皮质类甾醇给药之后，所述PFC乳剂静脉给药。优选的是，皮质类甾醇是地赛米松，而PFC是全氟二氯辛烷。文档编号A61K31/57GK1162264SQ95195919公开日1997年10月15日申请日期1995年10月24日优先权日1995年10月24日发明者托马斯·H·古丁,罗伯特·J·考夫曼申请人:海马金/全氟碳公司