专利名称：乳酸的丁酸酯前药的制作方法
技术领域：
本发明涉及衍生自乳酸的丁酸酯前药、其药物组合物以及单独或与其它药物一起联合使用它们用来增加患者体内γ-珠蛋白及胎儿血红蛋白的方法。这些化合物、药物组合物及方法在治疗β-血红蛋白病，包括镰形红细胞综合症以及β-地中海贫血综合症方面特别有效。另外，本发明还涉及单独或与其它药物一起联合使用这些前药，刺激细胞分化，其结果可防止噁性细胞的增殖。这些方法在治疗癌症，特别是噁性血液失调方面非常有用。
β-血红蛋白病是β-珠蛋白生物合成的遗传失调中的一组病变。尽管人们进行了许多努力寻找各种各样的治疗方案，但是用于这些衰弱性疾病的可行的临床治疗方法仍然很少。
各种治疗方法被应用于β-血红蛋白病的治疗，但每种方法均以失败告终。见G.P.Rogers等人所著“Current and Future Strategies for theManagement of Hemoglobinopathies and Thalassemia＂，Hematology1994，Education Program American Society of Hematology，pp.9-20(1994)。尽管化疗制剂羟基脲可刺激胎儿血红蛋白的生成并可降低镰形细胞贫血患者体内的镰形危象，但由于具有骨髓中毒性和致癌的危险性，使得它在单一治疗方面的用途被严重地限制了。潜在的长期致癌性亦是以5-氮胞苷为基础的治疗方法的一个缺点。红细胞输血将病人暴露于大范围的感染病毒制剂和同种免疫的潜在危险中。对于大多数病人来说，骨髓移植并不是一个轻易能办得到的选择。以红细胞生成素为基础的治疗已被证明不适用于大多数患者。诸如此类的缺点和不足限制了这类制剂或方法的长期应用。
从包括许多患有镰形细胞疾病的病人的多中心研究中已经清楚地看到，胎儿血红蛋白水平的提高与镰形细胞危象的低发和较长的存活时间有关[O.S.Platt等人，＂Pain in Sickle Cell Disease＂，New Eng.J.Med.，325，pp.11-16(1991)；O.S.Platt等人，＂Mortality ion Sickle Cell Disease＂，New Eng.J.Med.，330，pp.1639-44(1994)]。因此，在为了避免β-血红蛋白病常规治疗不足的努力中，治疗方法集中于提高胎儿血红蛋白的生成。作为一种治疗方法，最近的临床实验采用了丁酸酯同类物，包括精氨酸丁酸酯和异丁酰胺，用来刺激胎儿血红蛋白的生成[S.Perrine等人，＂A Short Term Trial of Butyrate to Stimulate Fetal-Globin-GeneExpression in the β-globin Disorders＂，N.Eng.J.Med.，328，pp.81-86(1993)；S.P.Perrine等人，＂Isobutyramide，an Orally BioavailableButyrate Analogue，Simulates Fetal Globin Gene Expression In Vitro andIn Vivo＂，British J.Hasematology，88，pp.555-61(1994)；A.F.Collins等人，＂Oral Sodium Phenylbutyrate Therapy in HomozygousThalassemiaA Clinical Trail＂，Blood，85，pp.43-49(1995)。
通过对体外丁酸诱导细胞分化的观察[ A.Leder and P.Leder，＂Butyric Acid，a Potent Inducer of Erythroid Differentiation in CulturedErythroleukemic Cells＂，Cell，5，pp.319-22(1975)]，证明该化合物通过诱导细胞分化，从而对白血病患者具有可靠的治疗作用[A.Novogrodsky etal.，＂Effect of Polar Organic Compound on Leukemic Cells＂，Cancer，51，pp.9-14(1983)]。除了治疗β-血红蛋白病方面的用途外，丁酸酯衍生物如精氨酸丁酸酯、丁酸的精氨酸盐在小鼠体内已显示出抗肿瘤和抗白血病作用[C.Chany and I.Cerutti，＂Antitumor Effect of ArginineButyrate in Conjunction with Corynebacterium Parvum and Interferon＂，Int.J.Cancer，30，pp.489-93(1982)；M.Otaka et al.，＂Antibody-MediatedTargeting of Differentiation Inducers To Tumor CellsInhibition ofColonic Cancer Cell Growth in vitro and in vivo＂，Biochem. Biophys.Res.Commun.，158，pp.202-08(1989)]。
尽管丁酸酯盐与常规的化疗制剂相比具有较低的毒性，但由于它们的体内半衰期较短，因此在临床应用时具有潜在的障碍[A.Miller et al.，＂Clinical Pharmacology of Sodium Butyrate in Patients with AcuteLeukemia＂，Eur.J.Clin.Oncol.，23，pp.1283-87(1987)；Novogrodsky et al.，supra]。这些制剂的迅速清除使得输送和保持较高的血浆丁酸酯水平变为不可能，上述丁酸酯需要通过静脉注射给药。使用丁酸酯盐的另一个潜在障碍是盐的过量和其生理学后遗症。
鉴于这些观察，各种丁酸前药被用于β-血红蛋白病和白血病分化治疗。这类前药包括三丁酸甘油酯和衍生自单糖化物的正丁酸单-和聚酯[Z.Chen and T.Breitman，＂TributyrinA Prodrug of Butyric Acid forPotential Clinical Application in Differentiation Therapy＂，cancer res.，54，pp.3494-99(1994)；H.Newmark etal.，＂Butyrate as a DifferentiatingAgentPharmacokinetics，Analogues and Current Status＂，cancer Letts.，78.，pp.1-5(1994)；P.Pouillart et al.，＂Pharmacokinetic Studies of N-Butyric Acid Mono-and Polyesters Derived From Monosaccharides＂J.Pharm.Sci.，81，pp.241-44(1992)]。由于诸如半衰期短、生物利用度低、Cmax低或缺乏有效的口服运送能力等因素，已证明这些前药在用于治疗时是无用的。另外一些前药，如AN-9和AN-10[A.Nudelman et al.，＂Novel Anticancer Prodrug of Butyric Acid＂J.Med.Chem.，35，pp.687-94(1992)]将引起代谢，在患者体内产生甲醛，导致毒性作用。
迄今为止，在β-血红蛋白病的治疗中，没有证明常规方法和治疗制剂对所有患者是安全和有效的。对于以肿瘤，肿瘤发生或噁性细胞生长，或者噁性血液失调为特征的其它疾病来说，情况也是一样的。因此有必要去开发比上述常规方法和制剂更具优势并克服了它们缺点的新药物，从而为这些靶疾病提供有效的治疗。
本发明通过提供乳酸的丁酸酯前药和包含它们的药物组合物解决了上述问题。这些丁酸酯前药具有好的生物利用度、有效的口服运送能力、好的半衰期及出人意料高的Cmax。
当给予患者这些组合物时，其中的丁酸酯前药比原来的丁酸酯前药更有效地释放丁酸酯。因此与原来的丁酸酯前药相比，相对于所给的前药量而言，其可产生较高的血浆丁酸酯水平。
从这些前药释放出的丁酸酯增加了γ-珠蛋白的合成以及红细胞的水合作用，并刺激了细胞分化。增加的γ-珠蛋白的合成引起了胎儿血红蛋白的形成，后者反过来增加了红细胞的携氧能力，并可预防镰形疾病。增加的红细胞的水合作用亦可预防镰形疾病。这一系列过程的最终结果是增加了红细胞的存活。
这使得本发明药物组合物就治疗方法而言，在治疗β-血红蛋白病，包括镰形红细胞综合症以及β-地中海贫血综合症方面特别有效。
另外，本发明化合物丁酸酯前药刺激细胞分化的能力对于噁性细胞而言，尤其是噁性造血细胞具有抗增殖的作用。因此本发明化合物和药物组合物可用于治疗癌症，尤其是噁性血液失调。
由于可用较低剂量的所提供的前药对患者进行治疗，以取得所需的血清丁酸酯浓度，前药中与非丁酸酯部分有关的毒性可以忽略不计。
所有这些特征为患有β-血红蛋白病和癌症的病人所经常采用的慢性治疗方案提供了方便。同时，也为按照这些治疗方案进行治疗的患者提供了给药剂量方案上的方便。因此，本发明的方法和组合物未被各种副作用所困扰，而这些副作用通常是常规治疗方案的典型特征。
图1描绘了在给予个体猴子各种剂量的化合物IIIc后，血浆丁酸浓度随时间的变化过程。
下列定义在申请中通篇使用。
这里所用的术语“烷基”单独或与任何其它术语合用代表含有指定数目碳原子的直链或支链脂肪烃基团，或不指定数目，较好的是含有1-10个碳原子的直链或支链脂肪烃基团，其可含有一或多个不饱和键。烷基基团的实例包括(但不限于)甲基、乙基、异丙基、丁基、戊基等。这里所用的术语“烷基”也包括如下定义的术语“链烯基”和“链炔基”。
术语“链烯基”单独或与其它术语合用代表含有2-10个，较好的是含有2-6个碳原子的直链或支链链烯基基团。链烯基基团的实例包括(但不限于)乙烯基、烯丙基、E-丙烯基、Z-丙烯基、E，E-己二烯基、E，Z-己二烯基、Z，Z-己二烯基等。
术语“链炔基”单独或与其它术语合用代表含有2-10个，较好的是含有2-6个碳原子的直链或支链链炔基基团。链炔基基团的实例包括(但不限于)乙炔基、2-丙炔基、丙炔基、丁炔基、1，4-己二炔基、癸炔基等。这里所用的术语“链炔基”也代表含有碳-碳双键及碳-碳三键的基团，如Z-戊-2-烯-4炔。
术语“碳环基”单独或与其它术语合用代表碳环基基团，它可以是饱和的，部分未饱和的或芳香的，含有特定数目的碳原子，较好的是含有3-14个碳原子，更好的是含有5-10个碳原子。所定义的术语“碳环基”包括“环烷基”基团，“环烯基”基团和碳环“芳基”基团。碳环基还包括含有数个碳环的基团，它们是稠合的或螺旋稠合的并含有4-14个碳原子。
术语“环烷基”单独或与其它术语合用代表含有3-8个，较好的是含有3-6个碳原子的环烷基基团。环烷基基团的实例包括(但不限于)环丙基、环丁基、环戊基、环己基等。
术语“环烯基”单独或与其它术语合用代表含有4-8个，较好的是含有5-6个碳原子的环烯基基团。环烯基基团的实例包括(但不限于)环戊烯基，环己烯基和环戊二烯基等。
术语“杂环基”代表优选含有5-7个碳原子，含有1-4个独立选自氧，氮和硫的取代相等数目碳原子的杂原子的碳环基团。该术语还包括取代的或未取代的，8-11元双环系统，该双环可以是芳香的或不是芳香的，一个或两个环上含有1-4个独立选自氧，氮和硫的杂原子，其中术语氮和硫包括任意的氮和硫的氧化形式以及任意的碱性氮的季离子形式。一个杂环基团可以通过基团上的任意的能产生稳定化学键的原子与一个结构相连。
非芳香杂环基团的实例包括(但不限于)2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、1，3-间二氧杂环戊烯基、2H-吡喃基、4H-吡喃基、哌啶基、1，3-二噁烷基、1，4-二噁烷基、吗啉基、1，4-二噻烷基、硫代吗啉基、硫代吗啉基砜、四氢呋喃基、哌嗪基和奎宁环基(quinuelidinyl)。
芳香杂环基团的实例包括(但不限于)2-呋喃基、3-呋喃基、2-噻吩基、3-噻吩基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、2-吡唑啉基、吡唑烷基、异噁唑基、异噻唑基、1，2，3-噁二唑基、1，2，3-三唑基、1，3，4-噻二唑基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、1，3，5-三嗪基、1，3，5-三噻烷基、中氮茚基、吲哚基、异吲哚基、3H-吲哚基、二氢吲哚基、苯并(b)呋喃基、苯并(b)噻吩基、1H-吲唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、嘌呤基、4H-喹嗪基、喹啉基、异喹啉基、噌啉基、2，3-二氮杂萘基、喹唑啉基、喹喔啉基、1，8-二氮杂萘基、蝶啶基、咔唑基、吖啶基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁嗪基等。
述语“芳基”代表芳香碳环基团，较好的是具有6个原子，或8-14元芳香多环芳香环系统。
“芳基”基团实例包括(但不限于)苯基、1-萘基、2-萘基、茚基、薁基、芴基和蒽基。
当有取代时，每一个“碳环基”和“杂环基”各自独立地含有1-3个取代基，它们独立地选自羟基；卤素；C(1-6)-直链或支链烷基，烷氨基或烷氧基；C(2-6)直链或支链链烯基，链烯氨基，链炔氨基，炔基，链烯氧基或链炔氧基；硝基，氨基；硫羟基；烷硫基；碳环基；碳环烷基；碳环链烯基；碳环链炔基；杂环基；杂环烷基；杂环链烯基；杂环链炔基；亚甲二氧基；羧酰胺基；烷基羰基氨基；碳环羰基氨基；杂环羰基氨基；碳环烷基羰基氨基；杂环烷基羰基氨基；磺酰胺基；烷基磺酰胺基；链烯基磺酰胺基；链炔基磺酰胺基；和芳基磺酰胺基。上述所列取代基既可与环上碳原子相连，也可与环上杂原子相连。
术语“烷氧基”代表O-C(1-6)-直链或支链烷基基团。烷氧基团的实例包括(但不限于)甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基和叔丁氧基。
术语“链烯氧基”代表O-C(2-6)-直链或支链链烯基团。链烯氧基的实例包括(但不限于)烯丙氧基，E和Z-3-甲基-2-丙氧基。
术语“链炔氧基”代表O-C(2-6)-直链或支链链炔基团。链炔氧基的实例包括(但不限于)丙炔氧基和2-丁炔氧基。
术语“烷氨基”代表C(1-6)-直链或支链烷基-NH或C(1-6)-直链或支链烷基-N-C(1-6)-直链或支链烷基基团，其中的烷基基团可以是相同的也可是不同的。合适的烷氨基团的实例包括(但不限于)甲氨基、乙氨基、丙氨基、异丙氨基、叔丁氨基、N，N-二乙基氨基及N，N-甲基乙基氨基。
术语“链烯氨基”代表C(2-6)-直链或支链链烯基-NH基团，C(2-6)-直链或支链链烯基-N-C(1-6)-直链或支链烷基基团，或C(2-6)-直链或支链链烯基-N-C(2-6)-直链或支链链烯基团，其中的链烯基基团可以是相同的也可是不同的。合适的链烯氨基团的实例包括(但不限于)烯丙氨基。链烯氨基还代表术语“链炔氨基”代表C(3-6)-直链或支链链炔基-NH基团，C(3-6)-直链或支链链炔基-NH-C(1-6)-直链或支链烷基基团，C(3-6)-直链或支链链炔基-N-C(2-6)-直链或支链链烯基团，或C(3-6)-直链或支链链炔基-N-C(3-6)-直链或支链链炔基团，其中的链炔基基团可以是相同的也可是不同的。合适的链炔氨基团的实例包括(但不限于)丙炔氨基等。
术语“酰胺基”代表-C(O)NH2基团。
术语“烷酰胺基”代表-C(O)NH-C(1-6)-直链或支链烷基或-C(O)N-[C(1-6)]2-直链或支链烷基基团，其中的两个C(1-6)-直链或支链烷基链可以是相同的也可是不同的。
术语“烷基磺酰胺基”代表C(1-6)-直链或支链烷基-S(O)2NH-基团。烷基磺酰胺基的实例包括乙磺酰胺基。
为了便于更好地理解本发明，特提供下列详细描述。
本发明化合物为衍生自乳酸的丁酸酯前药，其由下列式I表示
其中A和D独立选自氢、烷氧基烷基、碳环烷氧基烷基或C(1-4)直链或支链烷基，C(2-4)直链或支链链烯基或链炔基，其可独立地被羟基、烷氧基、羧基烷基、烷酰氨基、芳酰氨基、杂环酰氨基、芳烷基酰氨基、杂环烷基酰氨基、烷氧基羰氨基、链烯氧羰氨基、碳环氧羰氨基、杂环氧羰氨基、碳环烷氧羰氨基、杂环烷氧羰氨基、烷氧基烷氧基羰氨基、氨基、酰氨基、羧基、硫羟基、硫烷基、硫苯基、芳基、和杂环基取代；条件是A和D不能同时为氢；R为O，NH，NC(1-5)直链或支链烷基或NC(2-5)直链或支链链烯基，任何一个可任意地被碳环或杂环基团取代；
Z为氢，C(1-4)直链或支链烷基，C(2-4)直链或支链链烯基或链炔基，碳环或杂环，任何一个可任意地被1或2个独立选自C(1-3)烷基，C(2-3)链烯基或链炔基，烷氧基，链烯氧基，链炔氧基，酰胺基，硫烷基，碳环或杂环基团取代；并且每一个立体碳可以R或S构型存在；条件是所述的化合物不是
根据优选的实例，在式I中D为甲基且A为氢时，得到了式II化合物
在式II中，优选R是O，NH，NC(1-3)-烷基，NC(2-4)-直链或支链的链烯基或N-苄基，且Z是C(1-4)-直链或支链的烷基，该烷基可任意地被选自5-10元碳环或杂环的取代基所取代。更优选R是O，Z是未取代的C(1-4)-直链或支链的烷基，且与甲基相连接的碳的立体化学是S。
根据另一个优选的实例，在式I中R为氧，得到了式III化合物
在式III中，优选A和D各自独立地为选自下面的基团氢，甲基，乙基或烯丙基；前提条件是A和D不同是氢。且Z是C(1-3)-烷基，该烷基可任意地被选自5-10元碳环或杂环的取代基所取代。
更优选D为氢或甲基，A是未取代的C(1-3)-烷基，且Z是未取代的C(1-3)-烷基。
本发明中更可取的药物组合物包括选自下列的化合物
最可取的前药是化合物IIIc化合物。
式I前药含有一或多个不对称碳原子，因而存在外消旋体和外消旋混合物，单一的对映异构体，非对映体混合物和单一的非对映体。这些化合物的所有这些异构体，以及其混合物均包括在本发明的药物组合物中。
本发明还包括在任意碱性含氮基团上季离子化的式I前药。碱性氮可被任意一种本行业人士所熟知的试剂所季离子化，例如低级烷基卤化物，例如甲基，乙基，丙基和丁基的氯化物，溴化物和碘化物；二烷基硫酸酯(盐)，包括二甲基，二乙基，二丁基和二戊基硫酸酯(盐)；长链卤化物，例如癸基，月桂基，十四烷基和硬脂基氯化物，溴化物和碘化物；芳烷基卤化物，包括苄基和苯乙基溴化物。可用该季离子化可得到水或油溶或分散性产物。
前药在体内水解释放出活性成分。在本发明中所公开的前药释放出丁酸。不受理论的束缚，我们认为为了能诱导产生γ珠蛋白链合成和胎儿血红蛋白的形成，或诱导肿瘤细胞的分化，产生抗癌效应，需要使血浆中的丁酸临界浓度保持一定的时间，一天中至少要几小时，并持续几天。构成本发明组合物特性的化合物在体内的代谢方式是在口服后产生高的最大浓度(Cmax)的丁酸。这些化合物还有一个特点是，具有足够长的半衰期(t1/2)，从而使病人能充分接受丁酸治疗。由于它们具有出人意料高的Cmax，与常规的药物相比，在血浆中达到有效的丁酸浓度时，所要服用的这些前药的量是很低的。其结果是，降低了前药中的载体部分的毒性，并且容易服用。
可以用标准的有机合成路线来合成本发明的丁酸酯前药。许多α-羟基酸，α-羟基酯和α-羟基酰胺是商品化的(例如，精细化学的Aldrich目录手册1994-1995)。在使用α-羟基酯和α-羟基酰胺的情况时，可以用丁酸的活性的形式来制备羟基的衍生物，例如酰氯，对称酸酐；混合的碳酸、磷酸或硫酸酸酐；和活性酯例如苯基，4-硝基苯基，五氟苯基，羟基苯并三唑基或N-羟基琥珀酰亚氨基酯。
衍生化优选使用碱，例如三乙胺，二异丙基乙胺，1，8-二氮杂双环[54.0]十一-7-烯，吡啶或四甲基胍；或水性缓冲液或碱例如碳酸钠或碳酸氢钠(见例如，E.Haslam，＂Recent Development in Methods forthe Esterification and Protection of the Carboxyl Group＂.Tetrahedron，36，pp.2409-2433(1980))进行。也可以采用脱水剂，例如1，3-二环己基碳化二亚胺或1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐。加入过酰化(hyperacylation)催化剂，例如4-二甲基氨基吡啶，可以改善反应的效率(A.Hassner et al.，＂Direct Room Temperature Esterification ofCarboxylic Acids＂，Tetrahedron Lett，46，pp 4475-4478(1978))。其它的方法本身是已知的并且可以容易地代替上述所列出的方法。
如使用α-羟基酸时，羧酸基团的衍生化可先将羟基转化为丁酰基，随后将羧基酯化或酰胺化，或换用下列连续步骤1)将羟基用可除去的保护基暂时阻断；2)将羧酸衍生为酯或酰胺；3)除去羟基保护基；并且4)将羟基转化为上述丁酰基。
然后，可将丁酰化或羟基保护的α-羟基酸转化为其相应的式I酯(其中R＝O)，即通过羧基的活化，同上述丁酸的描述类似，随后在合适的碱存在下与醇反应。将活化丁酰化或羟基保护的α-羟基酸与伯或仲胺反应生成式I胺(其中R＝NH，N-C(1-5)-直链或支链烷基，或N-C(2-5)-直链或支链链烯基，它可被碳环或杂环所取代)。大量的伯，仲和叔醇和伯和仲胺是可以买到的或是可用已知的方法制备的。因而，该方法提供的式I化合物中的R-Z可有很多变化。
一些特别有用的合成式I化合物的方法见下列路线I中所示。
在这些方法中，所选择的α-羟基酸同时在羟基和羧基上起反应。与合适的甲硅烷化剂(例如叔丁基二甲基甲硅烷氯化物)在咪唑存在下，于二甲基甲酰胺中进行的反应，得到双甲硅烷化的式XIa化合物或类似的甲硅烷基衍生物。该化合物可经下列步骤转化为羧基活化的衍生物1)部分水解羧基甲硅烷基团，例如通过用大约1摩尔当量的氢氧化锂，在-20℃至室温下，在含水二噁烷中进行水解；2)真空浓缩；3)小心地酸化，例如用柠檬酸；4)用合适的有机溶剂提取，例如用二氯甲烷；且5)同上所述活化羧基。
为除去保护羟基的甲硅烷基，可在大约0℃至室温下，于四氢呋喃中，采用氟化四丁基铵，或用在乙腈中的HF-吡啶复合物，得到XIV羟基衍生物。然后可采用上述方法将其转化为式I化合物。
另外，式X的α-羟基酸与烷基取代物，例如路线I中的苄基衍生物，在羟基和羧基上同时起反应。也可在本步骤中使用其它的烷基衍生物，例如烯丙基，4-甲氧基苄基，2，2，2-三氯乙基或2-三甲基甲硅烷基乙基。
该衍生步骤可如下完成将式X化合物与过量的溴苄在2.2-3等当量的强碱存在下，例如氢化钠，氢化钾，或叔丁醇钾，于合适的惰性溶剂中反应，例如THF或二甲基甲酰胺，反应在大约-30℃至大约100℃下进行，反应温度取决于具体的α-羟基酸和亲电子试剂。任意地，在惰性溶剂如甲苯或乙腈中采用碱如K2CO3或NaOH的相转移催化法可用于该烷基化。合适的催化剂包括季铵盐，例如溴化四正丁基铵和冠醚，例如二苯并-18-冠醚-6。
可采用皂化反应来完成从合适的式XIb双烷基化化合物向式XIIb化合物的转化，例如在含水甲醇或二噁烷中，采用等量的或过量的碱金属碱，例如钠，钾或锂的氢氧化物，在大约-40℃至80℃的温度范围内进行反应。另外，与硫醇阴离子(例如乙硫醇钠)、碘代三甲基甲硅烷或与其它的酯去保护剂反应，得到保护的式XIIb羧酸(见例如，R.C.Larock，＂Comprehensive Organic Transformation＂.pp 981-985，1989 VCHPublishers，Inc.，New York，NY)。
按类似对XIIa化合物所述进行活化和衍生生成式XIIIb化合物。然后，按常规方法将苄基除去，例如用催化氢化方法，用分散在碳中的钯或铑金属，氢源可用氢气或甲酸铵，或采用环己二烯的转移氢化方法等。一些方法是有机化学中已知的方法(见例如，P.N.Rylander，＂CatalyticHydrogenation in Organic Synthesis＂1979 Academic Press，Inc.，Orlando，FL)。还原金属方法在本领域也是已知的，即包括将底物溶解于液氨中，加入碱金属，例如金属钠。
如果用烯丙基代替苄基，可采用四(三苯基膦)Pd0和烯丙基的受体(例如吗啉或PdII乙酸盐和Bu3SnH)通过钯转移反应来将其除去。所用的这些方法和其它的醇保护基的内容见有关文献所述(见，例如T.W.Greene and P.G.M.Wuts＂Protective Groups in Organic Synthesis＂Second Edition 1991 Academic Press，Inc.，Orlando FL.pp14-120)。然后，可将所得的式XII化合物按上述方法进行反应，生成式I化合物。
无法买到的α-羟基酸、α-羟基酯和α-羟基酰胺可用本领域技术人员显然易见各种方法方便地来合成。例如使乙醛酸酯或酰胺与合适的碳-碱性亲核剂(例如格氏试剂，有机铜或有机锂试剂)在合适的惰性溶剂(例如乙醚或四氢呋喃)中，于大约-80℃至大约0℃下进行反应，将得到具式XIV的α-羟基酯或酰胺(其中A是亲核基且D是氢)。在α-酮酯或酰胺上进行类似的反应，得到α，α-二取代的，α-羟基酯或酰胺(B.M.TrostandI.Fleming，＂Comprehensive Organic Syntheses，Vol.I＂pp 49-2821989，Pergamon Press，Oxford，England)。
许多α-羟基酸可按常规的方法通过相应的α-氨基酸与偶氮试剂在非亲核溶媒中反应制得，例如可将NaNO2加至氨基酸的硫酸水溶液中(R.V.Hoffman et al.，＂从2-(对-硝基苯)磺酰氧酯制备(r)-2-叠氮酯及它们作为保护的氨基酸等价物用于合成含D-氨基酸成份的二和三肽，四面体通讯，48，pp 3007-3020(1992))。由于许多α-氨基酸可以买到，许多其它的氨基酸也可用已知的方法来制备，且通常是以光学活性形式，(H.K.Chenault et al.，＂非天然和稀有氨基酸的动力学拆分酰基酶I催化的N-酰基氨基酸的对映选择水解＂，美国化学会志，111，pp，6354-6364(1989))，该方法提供了式I起始物的备用源。
经过下列步骤可将烷基化的羧酸和其酯及酰胺衍生物转化为α-羟基衍生物在羧酸衍生物的α碳上形成阴离子，随后与氧化剂例如N-磺酰基氧氮丙啶)反应，得到式X或XIV化合物(R.C.Larock，＂高级有机转化＂，p489，1989 VCH Publishers，Inc.，New York，NY)。
上述公开的各种方法及合成有机化学文献中已知的其它合成方法对于本领域技术人员来说是显而易见的，反应基团的临时性保护和去保护以及它们进一步的转化形成其它的式I化合物对于本领域技术人员来说也是显而易见的。
根据一个实例，本发明提供了包含具式I前药(包括特别排除于本发明化合物之外的正丁基酯)及药学上可接受的载体或辅助剂的药物组合物，其中前药的量应为可有效地增加胎儿血红蛋白生成或可有效地刺激患者细胞分化的量。更具体地，这些组合物是设计用来治疗患有β-血红蛋白病或恶性疾病的病人的。这里所用的述语“恶性疾病”代表以肿瘤，肿瘤发生或恶性细胞生长，或者恶性血液失调为特征的一系列疾病。当然，可有效增加胎儿血红蛋白生成或可刺激患者细胞分化的量依赖于所治疗的具体疾病，疾病的严重程度，患者身体状况以及主治医生的判断。式I前药的量优选是在给药8小时内，可使血浆丁酸浓度介于0.03mM--3.0mM之间。式I前药的量更优选是在给药6小时内，可使血浆丁酸浓度介于0.1mM--1.0mM之间。组合物中的前药的量最优选是在给药2小时内，可使血浆丁酸浓度介于0.1mM--1.0mM之间，并且使浓度在该范围里保持至少2小时。每日可分一或多次给予剂量为25mg前药/kg体重至3g前药/kg体重，可产生所需的血浆丁酸浓度。优选每日1-4次给予患者前药。
在优选的实例中，这些药物组合物还可包含用于治疗β-血红蛋白病的其它常规药物，该常规药物可与单一治疗β-血红蛋白病时正常所需的剂量相同或也可少于该剂量。这些常规药物的常规剂量在本领域是已知的。这类药物包括羟基脲，克霉唑，异丁酰胺，促红细胞生成素和短链脂肪酸盐，例如苯乙酸、苯丁酸和valproic酸的盐。优选的常规药物是羟基脲。
在其它优选的实例中，药物组合物包含本发明的丁酸酯前药及在治疗以肿瘤，肿瘤发生或恶性细胞生长，或者恶性血液失调为特征的一系列疾病时所采用的常规药物。该药物可与单一治疗这类疾病时正常所需的剂量相等或少于该剂量。这些常规药物的常规剂量对于本领域人员来说是已知的。这类药物包括促红细胞生成素或癌症放疗药物，例如羟基脲或5-氮杂胞苷。较好的常规药物是羟基脲。
式I前药的药学上可接受的盐类(包括特别排除于本发明化合物之外的正丁基酯)可以上述任何组合物的形式被采用。这些盐类可衍生自药学上可接受的无机和有机酸和碱。
合适的酸的实例包括盐酸，氢溴酸，硫酸，硝酸，高氯酸，富马酸，马来酸，磷酸，羟基乙酸，乳酸，水杨酸，琥珀酸，对甲苯磺酸，酒石酸，乙酸，柠檬酸，甲磺酸，乙磺酸，甲酸，苯甲酸，丙二酸，萘-2-磺酸和苯磺酸。
从合适的碱衍生来的盐包括碱金属(如，钠)盐，碱土金属(如，镁)盐，铵盐和N-(C1-4烷基)4+盐。
本发明药物组合物中的载体和辅助剂包括，例如离子交换剂，氧化铝，硬脂酸铝，卵磷脂，血清蛋白，例如人血清白蛋白，缓冲物质，例如磷酸盐，甘氨酸，山梨酸，山梨酸钾，饱和植物脂肪酸的部分甘油三酯混合物，水，盐或电解质，例如鱼精蛋白硫酸盐，磷酸氢二钠，氯化钠，锌盐，胶体二氧化硅，镁，三硅酸盐，聚乙烯吡咯烷酮，纤维素基质的物质和聚乙二醇。局部用药和凝胶基质的辅助剂可以选自下列物质羧甲基纤维素钠，聚丙烯酸酯，聚氧乙烯-聚氧丙烯-嵌段聚合物，聚乙二醇和羊毛蜡醇。
通常，本发明的药物组合物可以按照与其它药物重要制剂所采用的相似方法和组成来配制和给患者服用。可采用任意药学上可接受的给药途径，包括口服，局部，鼻内，或非肠道(包括静脉，肌内，皮下，皮内，骨膜内，关节内，滑膜内，膜内，胸骨内，颅内或创伤内)。
本发明的药物组合物可以提供各种常规的剂型。它们包括，例如，固体，半固体和液体剂型，例如片剂，丸剂，粉剂液体溶液，稀释剂，悬浮剂，乳剂，脂质体，胶囊，栓剂，注射剂和输液剂。可取的剂型取决于所需的给药途径和治疗目的。
例如，本发明的药物组合物可以任意可接受的剂型经过口服途径给药，包括但不仅限于，胶囊，片剂，和水或非水悬浮液，乳剂，油状稀释剂和溶液。在口服用的片剂中，常用的载体包括乳糖和玉米淀粉。也常加入润滑剂，例如硬脂酸镁。在口服用的硬胶囊中，使用的稀释剂包括乳糖和干燥的玉米淀粉。软胶囊含有油和/或聚乙二醇赋形剂。在口服水性悬浮液或乳剂时，该前药与乳化剂和悬浮剂结合。需要时也可加入调味剂，甜味剂或着色剂。
优选将本发明的药物组合物配制为口服给药剂型。更优选口服乳剂，该乳剂含有大约5-40％(W/W)的式I前药(包括特别排除于本发明化合物之外的正丁基酯)和离子或非离子表面活性剂，使所得的组合物具有0-40的HLB值。优选的表面活性剂包括吐温-20，吐温-80，Spam-20，Spam-40和泊洛沙姆，例如S-108。
根据另一个实例，本发明提供了治疗β-血红蛋白病患者的方法。该方法包括用上述任意的组合物对病人进行治疗。这里所用的术语“治疗”包括降低β-血红蛋白病的严重程度、症状或作用。该方法优选提供的血浆丁酸浓度是在给药8小时内，介于0.03mM--3.0mM之间。更优选在给药6小时内，使血浆丁酸浓度介于0.1mM--1.0mM之间。最优选组合物中的前药的剂量是在给药2小时内，可使血浆丁酸浓度介于0.1mM--1.0mM之间，并且使浓度在该范围里保持至少2小时。通过每天一或多次给患者以25-3000mg/kg体重的剂量服用式I前药可以达到该血浆水平。优选的是每天给患者服用1-4次该前药。
用本方法治疗的β-血红蛋白病包括镰形细胞综合症，例如镰形红细胞贫血，血红蛋白SC病，血红蛋白SS病和镰形β-地中海贫血；β-地中海贫血综合症，如β-地中海贫血；β-珠蛋白基因位点的其它遗传学突变，它导致血红蛋白不稳定，例如先天性海因茨体贫血，伴随有氧亲合力异常的β-珠蛋白突变和β-珠蛋白的结构突变，它们导致地中海表现型。这些疾病见The Molecular Basis of Blood Disease，Vol.II，G.Stamatoyannopoulos et al.，eds.，pp157-244(1994)中所述。
根据优选实例，上述方法包括给患者服用另一种常用的治疗β-血红蛋白病的药物(例如羟基脲)这一附加步骤。可以在服用含有丁酸酯前药的组合物之前、同时和之后服用该药物。当然，治疗所用的组合物中已经含有该药物时，可省略该步骤。
在本方法中常规药物的服用剂量优选比其单独治疗这些疾病时的常规用量要少。这些常规药物的正常剂量是已知的。这些药物包括羟基脲，克霉唑，异丁酰胺，促红细胞生成素和短链脂肪酸盐，例如苯乙酸，苯丁酸和valproic酸。较可取的常规药物是羟基脲。
根据另一个实例，本发明提供了治疗具有下列特征的疾病的方法肿瘤，肿瘤发生性或噁性细胞生长以及噁性血液病。治疗包括防止病情的发展或复发。这类疾病包括癌，骨髓瘤，黑素瘤，淋巴瘤和白血病。优选本方法提供了与上述治疗β-血红蛋白病所需的同样的血清丁酸浓度。
根据优选实例，上述方法包括给患者服用另一种常用的治疗噁性疾病的药物这一附加步骤，较可取的药物是羟基脲，。可以在服用含有丁酸酯前药的组合物之前，同时和之后服用该药物。当然，治疗所用的组合物中已经含有该药物时，可省略该步骤。
在本方法中常规药物的服用剂量优选比其单独治疗这些疾病时的常规用量要少。这些常规药物的正常剂量是已知的。这些药物包括促红细胞生成素，或肿瘤化疗药物，例如羟基脲或5-氮杂胞苷。羟基脲是优选的常规药物。
本发明与常规药物的合并治疗(包括单一的组合物和与本发明的前药分别服用)也显示出加合或协同效应，特别是当其中的组分通过不同的机理来治疗或防止目标疾病时。
为使所述发明内容更容易理解，给出下列实例。需要理解的是所述的这些实例仅用于说明本发明，而不是以任何方式对本发明加以限制。
实例1合成化合物IIIa和IIIb按如下步骤合成化合物IIIa将6.25ml(S)乳酸甲酯与13.75ml三乙胺混合，然后将其加入至50ml二氯甲烷中。在冰浴中将混合物冷却至0℃，缓慢加入8.2ml丁酰氯。将该混合物搅拌过夜，然后用布氏漏斗过滤。用乙醚洗涤沉淀滤饼，并将洗涤液与滤液合并。从滤液中分离出有机相，将其用水洗涤2次，盐水洗涤1次，然后用无水硫酸镁干燥。粗品收率为12.48g。
然后将其溶解于90％己烷/乙酸乙酯中，在MPLC柱上进行层析。收集含有所需产物的馏分并干燥，得到9.46g纯品。NMR分析确认该纯品为化合物IIIa。
用(R)乳酸代替(S)乳酸，按同样方式来合成和纯化化合物IIIb。
实例2合成化合物IIIc按如下步骤合成化合物IIIc将7.4ml(S)乳酸乙酯与13.75ml三乙胺合并，然后将其加入至50ml二氯甲烷中。在冰浴中将混合物冷却至0℃，缓慢加入8.2ml丁酰氯。将该混合物搅拌过夜，用TCL分析表明混合物反应完全，再加入0.25mole(2.5ml)丁酰氯，并使反应继续进行24小时。
然后用布氏漏斗过滤混合物。用乙醚洗涤沉淀滤饼，并将洗涤液与滤液合并。从滤液中分离出有机相，将其用水洗涤2次，盐水洗涤1次，然后用无水硫酸镁干燥。粗品收率为15.98g。
然后将其溶解于90％己烷/乙酸乙酯中，在MPLC柱上进行层析。收集含有所需产物的馏分并干燥，得到9.97g纯品。NMR分析确认该纯品为化合物IIIc。
实例3乳酸的丁酸酯前药在大鼠体内的的口服利用度按大约3g/kg体重的剂量，经口服给大鼠服用化合物IIIa，IIIb和IIIc，从而评价口服的丁酸生物利用度和血浆浓度的维持。用玉米油简单稀释来配制丁酸酯前药。
按照下列文献中所述方法来进行测定Daniel et al.，Clinica Chimica Acta，181，pp 255-64(1989)；Planchon et al.，J.Pharm.Sci.，82，pp 1046-48(1993)；Pouillart et al.，J.Pharm.Sci.，81，pp 241-44(1992)；每个化合物在5至6只体重大约为300g/只的大鼠(Sprague Dawley；Harlan Labs，Inc。)体内测定。这些化合物相应的Cmax值列于下列表1中。表1.在大鼠体内乳酸的丁酸酯前药的药代动力学化合物剂量动物个数丁酸酯 丁酸酯 AUCg/kg (个) Cmax(μM) tmax(小时) (mM/小时)IIIa 2.7 4 1335±593.2 0.56±0.31 2.10±0.42IIIb 2.5 6 147.0±119.1 0.54±0.49 0.26±0.14IIIc 3.0 6 456.3±80.7 1.71±1.3 1.68±0.16这些结果表明本发明化合物能以合适的速度释放丁酸酯并且能提供足够的丁酸酯的血浆浓度，在该血浆浓度可以用于治疗β-血红蛋白病和癌症。
实例4乳酸丁酸酯前药在猴子体内的口服利用度在贫血的猕猴体内进一步测试化合物IIIc。将单一口服剂量(0.3，1.0或3.0g/kg体重)的化合物IIIc用玉米油稀释后给猴子服用。在每一个剂量下获得的Cmax列于下列表II中。表2.在贫血的猕猴体内化合物IIIc的药代动力学参数剂量动物个数 丁酸酯 丁酸酯 AUCg/kg (个)Cmax(μM) tmax(小时)(mM/小时)0.3 2 214.4±88.80.75 0.30±0.031.0 2 509.9±90.93.0 1.33±0.093.0 2 836.1±88.44.0 3.41±0.03在个体猴子内给予不同剂量的化合物IIIc后所得到的血浆丁酸浓度与时间的关系见图1中所示。
实例5在贫血的猕猴体内联合使用化合物IIIc/羟基脲的药效研究在分为三组每组2只共6只贫血的猕猴体内测定化合物IIIc与羟基脲联合使用时的药效。每组均在两期中进行研究，见下列所示。在两期之前和之后监测总血红蛋白中胎儿血红蛋白细胞(F细胞)，血红蛋白F的水平(％Hb F)和％γ珠蛋白链的水平。％F细胞是根据Betke et al，Blut.，4，pp 241-9(1958)中所述的方法来测定的。％Hb F和％γ珠蛋白链合成是采用Huisman.J.Chromagtogr.，418，pp 277(1987)中所述的高效液相色谱法来测定的。表1，I期的药效研究研究组动物数 药物 剂量 治疗时间I 2 羟基脲 50mg/kg/天 5周II 2 化合物IIIc 1g/kg/天 5周III2 化合物IIIc 3g/kg/天 6周表2，II期的药效研究研究组动物数 药物 剂量 治疗时间I 2 羟基脲+化合物IIIc50mg/kg/天 5周II 2 化合物IIIc 1g/kg/TID 5周III2 化合物IIIc 清洗掉 4周在I期前，组I中的动物1具有8-10％的％F细胞读数。在I期结尾时，动物1的％F细胞读数增至25％。在II期结尾时，动物1的％F细胞读数增至35％。在I期前，组II中的动物2具有8-10％的％F细胞读数。在I期结尾时，动物2的％F细胞读数增至15％。在II期结尾时，动物2的％F细胞读数增至22％。在组I中增加％F细胞读数伴随有可测量到的％Hb F和％γ珠蛋白链水平的增加。
在所有三组中的两期药效研究的之前和当中未测到甘油三酯和ALT的水平发生变化。
结果表明，在诱导β-血红蛋白病的胎儿珠蛋白时，将本发明的丁酸酯与常规的药物，例如羟基脲合用是有用的。
在前文中已经描述了本发明的许多实例，很明显的是我们的基本结构可以替换，从而可以提供其他的使用本发明的合成，方法和组合物的实例。因而，应意识到本发明的范围是以所附的权利要求来定义的，而不是以前面所出现的作为例子的特定的实例来定义本发明的范围。
权利要求
1.式I的丁酸酯前药
其中A和D独立选自氢、碳环烷氧基烷基或C(1-4)直链或支链烷基，C(2-4)直链或支链链烯基或链炔基，其可独立地被羟基、烷氧基、羧基烷基、烷酰胺基、芳酰胺基、杂环酰胺基、芳烷基酰胺基、杂环烷基酰氨基、烷氧基羰氨基、链烯氧羰氨基、碳环氧羰氨基、杂环氧羰氨基、碳环烷氧羰氨基、杂环烷氧羰氨基、烷氧基烷氧基羰氨基、氨基、酰胺基、羧基、硫羟基、硫烷基、硫苯基、芳基、和杂环基取代；条件是A和D不能同时为氢；R为O，NH，NC(1-5)直链或支链烷基或NC(2-5)直链或支链链烯基，任何一个可任意地被碳环或杂环基团取代；Z为氢，C(1-4)直链或支链烷基，C(2-4)直链或支链链烯基或链炔基，碳环或杂环，任何一个可任意地被1或2个独立选自C(1-3)烷基，C(2-3)链烯基或链炔基，烷氧基，链烯氧基，链炔氧基，酰胺基，硫烷基，碳环或杂环基团取代；并且每一个立体碳可以R或S构型存在；条件是所述的化合物不是
2.权利要求1中的丁酸酯前药，其中A是氢；且D是甲基。
3.权利要求2中的丁酸酯前药，其中R为O，NH，N-C(1-3)烷基，NC(2-4)直链或支链链烯基或N-苄基；且Z为C(1-4)直链或支链烷基，其可任意地被1个选自5-10元碳环和5-10元杂环基团取代。
4.权利要求3中的丁酸酯前药，其中R是氧；Z是未取代的C(1-3)直链或C(1-4)支链烷基；且在甲基所连接的碳原子上的立体化学是S。
5.权利要求1中的丁酸酯前药，其中R是氧。
6.权利要求5中的丁酸酯前药，其中A和D独立地选自氢，甲基，乙基或烯丙基；且Z为C(1-3)烷基，其可任意地被1个选自5-10元碳环和5-10元杂环基团取代。
7.权利要求6中的丁酸酯前药，其中D为氢或甲基；A为未取代的C(1-3)-烷基；且Z为未取代的C(1-3)-烷基。
8.权利要求1中的丁酸酯前药，其选自下列基团
9.权利要求8中的丁酸酯前药，其中所述的前药是
10.药物组合物，它含有a.一定量的能有效地增加病人体内胎儿血红蛋白或促进细胞分化的式I丁酸酯前药
其中A和D独立选自氢、碳环烷氧基烷基或C(1-4)直链或支链烷基，C(2-4)直链或支链链烯基或链炔基，其可独立地被羟基、烷氧基、羧基烷基、烷酰胺基、芳酰胺基、杂环酰胺基、芳烷基酰胺基、杂环烷基酰胺基、烷氧基羰氨基、链烯氧羰氨基、碳环氧羰氨基、杂环氧羰氨基、碳环烷氧羰氨基、杂环烷氧羰氨基、烷氧基烷氧基羰氨基、氨基、酰氨基、羧基、硫羟基、硫烷基、硫苯基、芳基、和杂环基取代；条件是A和D不能同时为氢；R为O，NH，NC(1-5)直链或支链烷基或NC(2-5)直链或支链链烯基，任何一个可任意地被碳环或杂环基团取代；Z为氢，C(1-4)直链或支链烷基，C(2-4)直链或支链链烯基或链炔基，碳环或杂环，且每一个可任意地被1或2个独立选自C(1-3)烷基，C(2-3)链烯基或链炔基，烷氧基，链烯氧基，链炔氧基，酰胺基，硫代烷基，碳环或杂环基团取代；并且每一个立体碳可以R或S构型存在；且b.药学上可接受的辅助剂或载体。
11.权利要求10中的药物组合物，其中在式I中A为氢；且D为甲基。
12.权利要求11中的药物组合物，其中在式I中R为O，NH，N-C(1-3)烷基，NC(2-4)直链或支链链烯基或N-苄基；且Z为C(1-4)直链或支链烷基，其可任意地被1个选自5-10元碳环和5-10元杂环基团取代。
13.权利要求12中的药物组合物，其中在式I中R是氧；Z是未取代的C(1-3)直链或C(1-4)支链烷基；且在甲基所连接的碳原子上的立体化学是S。
14.权利要求10中的药物组合物，其中在式I中R是氧。
15.权利要求14中的药物组合物，其中在式I中A和D独立地选自氢，甲基，乙基或烯丙基；且Z为C(1-3)烷基，其可任意地被1个选自5-10元碳环和5-10元杂环基团取代。
16.权利要求15中的药物组合物，其中在式I中D为氢或甲基；A为未取代的C(1-3)-烷基；且Z为未取代的C(1-3)-烷基。
17.权利要求10中的药物组合物，其中的丁酸酯前药选自下列基团
18.权利要求17中的药物组合物，其中所述的前药是
19.增加病人体内胎儿血红蛋白生成的方法，该方法包括给所述的病人服用权利要求10-18或27-28中任意一种药物组合物的步骤。
20.权利要求19中的方法，其中所述的方法是用于治疗β-血红蛋白病患者。
21.权利要求20中的方法，包括给所述病人服用常规的用于治疗β-血红蛋白病的药物这一附加步骤。
22.权利要求20中的方法，包括给所述病人服用用于治疗β-血红蛋白病的羟基脲这一附加步骤。
23.刺激病人体内细胞分裂的方法，该方法包括给所述的病人服用权利要求10-18中任意一种药物组合物的步骤。
24.权利要求23中的方法，其中所述的方法是用于治疗病人的噁性疾病。
25.权利要求24中的方法，包括给所述病人服用常规的用于治疗噁性疾病的药物这一附加步骤。
26.权利要求24中的方法，包括给所述病人服用用于治疗噁性疾病的羟基脲这一附加步骤。
27.权利要求19中的药物组合物，其中所述的常规药物是羟基脲。
28.权利要求27中的药物组合物，其中的丁酸酯前药是化合物(IIIc)。
29.权利要求23中的方法，其中所述的常规药物是羟基脲。
30.权利要求29中的方法，其中所述的丁酸酯前药是化合物(IIIc)。
全文摘要
本发明涉及衍生自乳酸的丁酸酯前药、其药物组合物以及单独或与其它药物一起联合使用它们用来增加患者体内γ－珠蛋白及胎儿血红蛋白的方法。这些化合物、药物组合物及方法在治疗β－血红蛋白病,包括镰形红细胞综合症以及β－地中海贫血综合症方面特别有效。另外,本发明还涉及单独或与其它药物一起联合使用这些前药,刺激细胞分化,其结果可防止恶性细胞的增殖。这些方法在治疗癌症,特别是恶性血液失调方面非常有用。
文档编号A61K31/215GK1201447SQ96197978
公开日1998年12月9日 申请日期1996年9月30日 优先权日1995年10月6日
发明者R·D·藤格, B·李 申请人:沃泰克斯药物股份有限公司