药瓶中，而非 注射器中。干燥组分可包含稳定剂，例如乳糖、蔗糖或甘露醇，及其混合物，如乳糖/蔗糖混 合物、蔗糖/甘露醇混合物等。一种可能的配置使用在预填装注射器中的液态乳液组分和 药瓶中的冻干抗原组分。
[0139] 如果疫苗还含有乳液和抗原以外的其它组分，那么这些其它组分可包含在这两种 药盒组分之一中，或者可以是第三种药盒组分的一部分。
[0140] 适用于本发明混合疫苗或单独药盒组分的容器包括药瓶和一次性注射器。这些容 器应无菌。
[0141] 组合物/组分装在药瓶中时，药瓶优选由玻璃或塑料材料制成。在将组合物加入 药瓶之前，优选对其进行灭菌。为了避免胶乳过敏患者可能产生的问题，药瓶优选用无胶乳 塞子密封，且优选所有包装材料均不含胶乳。在一个实施方式中，药瓶具有丁基橡皮塞。药 瓶可包含单一剂量的疫苗/组分，或者可以包含一个以上剂量（'多剂量'药瓶），如10个 剂量。在一个实施方式中，药瓶包含l〇x 0. 25ml剂量的乳液。优选的药瓶由无色玻璃制成。
[0142] 药瓶可以有适合的帽（如鲁尔（Luer)锁），从而预填装注射器可插入该帽，可以 将注射器的内容物推入药瓶（如在其中重建冻干物质），可以将药瓶的内容物吸回注射器 中。从药瓶中移出注射器后，可连上针头，将该组合物给予患者。该帽优选位于封口或盖子 内侧，从而在封口或盖子移除后才能接触到该帽。
[0143] 将组合物/组分包装到注射器中时，注射器通常不会连接有针头，但可提供单独 的针头与注射器组装和使用。优选安全性针头。一般是1-英寸23号、1-英寸25号和 5/8-英寸25号针头。可提供有剥离标签的注射器，该标签上可打印有内含物的批号、流感 季节和过期日期，以帮助记录保存。注射器的活塞优选带有防脱装置，以防止活塞在吸出时 偶然脱出。注射器可以有胶乳橡胶帽和/或活塞。一次性注射器含有单一剂量的疫苗。注 射器通常带有顶帽以在连接针头前密封顶端，所述顶帽优选由丁基橡胶制成。如果注射器 和针头分开包装，则针头优选装有丁基橡胶护罩。
[0144] 可用缓冲液稀释乳液，然后包装入药品或针筒。常用缓冲剂包括：磷酸盐缓冲剂； Tris缓冲剂；硼酸盐缓冲剂；琥珀酸盐缓冲剂；组氨酸缓冲剂；或柠檬酸盐缓冲剂。稀释可 降低佐剂组分的浓度，而同时维持其相对比例，例如提供"半强度"佐剂。
[0145] 容器可标注显示半剂量体积，例如以利于递送给儿童。例如，含有0. 5ml剂量的注 射器可标有显示0. 25ml体积的标记。
[0146] 采用玻璃容器（如注射器或药瓶）时，优选采用由硼硅酸盐玻璃，而非钠钙玻璃制 成的容器。
[0147] 各种抗原均可用于水包油乳液，包括但不限于：病毒抗原，如病毒表面蛋白；细菌 抗原，如蛋白质和/或糖抗原；真菌抗原；寄生虫抗原；和肿瘤抗原。本发明特别可用于针对 以下的疫苗：流感病毒、HIV、钩虫、乙肝病毒、单纯疱瘆病毒、狂犬病病毒、呼吸道合胞病毒、 巨细胞病毒、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus)、衣原体、SARS冠状病毒、水痘-带 状疱瘆病毒、肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae)、脑膜炎奈瑟氏菌（Neisseria Meningitidis)、结核分支杆菌（Mycobacterium tuberculosis)、炭疽杆菌（Bacillus anthracis)、EB病毒、人乳头瘤病毒等。例如：
[0148] ?流感病毒抗原。这些抗原可以采取活病毒或者灭活病毒的形式。采用灭活病毒 时，该疫苗可包含完整的病毒颗粒、裂解病毒颗粒或纯化的表面抗原（包括血凝素，通常也 包括神经氨酸酶）。流感抗原也可以病毒体形式出现。抗原可具有选自下组的任何血凝素 亚型：!11、!12、!13、!14、册、册、!17、!18、!19、!110、!111、!112、!113、!114、!115和/或!116。疫苗可包 括来自一种或多种（例如1、2、3、4或更多种）流感病毒株（包括甲型流感病毒和/或乙型 流感病毒）的抗原，例如单价A/H5N1或A/H1N1疫苗或三价A/H1N1+A/H3N2+B疫苗。流感 病毒可以是重组株，并可通过逆向遗传学技术获得[例如51-55]。因此，该病毒可包含来自 A/PR/8/34病毒（一般是来自A/PR/8/34的6个区段，HA和N区段来自疫苗株，即6:2重组 株）的一个或多个RNA区段。可以在鸡蛋（如含胚鸡蛋）或细胞培养物上培养用作抗原来 源的病毒。使用细胞培养物时，细胞底物一般是哺乳动物细胞系，如MDCK ;CH0 ;293T ;BHK ; Vero ;MRC-5 ;PER. C6 ;WI-38 ;等。用于培养流感病毒的哺乳动物细胞系优选包括：MDCK细 胞[56-59]，衍生自马达二氏（Madin Darby)犬肾；Vero细胞[60-62]，衍生自非洲绿猴肾； 或PER. C6细胞[63]，衍生自人胚视网膜母细胞。在哺乳动物细胞系上培养病毒时，该组合 物宜不含鸡蛋蛋白质（如卵清蛋白和卵类粘蛋白）和鸡DNA，从而降低变应原性。通常参 照血凝素（HA)含量（通常用SRID测定）标准化疫苗的单位剂量。现有的疫苗一般含有约 15 μ g HA/毒株，尽管也可使用更低的剂量，特别是使用佐剂时。分数剂量如1/2 (即7. 5 μ g HA/毒株）、1/4和1/8[64,65]以及较高剂量（如3x或9x剂量[66,67])已有应用。因 此，疫苗可包含每流感毒株〇. 1-150 μ g HA，优选0. 1-50 μ g，例如0. 1-20 μ g、0. 1-15 μ g、 0. 1-10 μ g、0. 1-7. 5 μ g、0. 5-5 μ g等。具体剂量包括例如，每毒株约15、约10、约7. 5、约5、 约 3. 8、约 1.9、约 1.5 yg 等。
[0149] ·人免痔缺陷病毒，包括HIV-I和HIV-2。该抗原一般是包膜抗原。
[0150] ?乙肝病毒表而抗原。该抗原优选通过重组DNA方法获得，例如在酿酒酵母 (Saccharomyces cerevisiae)中表达后获得。与天然病毒HBsAg不同，重组酵母表达的抗 原是非糖基化抗原。它可以是基本呈球形的颗粒形式（平均直径约为20nm)，包括含有磷脂 的脂质基质。不像天然HBsAg颗粒，酵母表达的颗粒可能包含磷脂酰肌醇。HBsAg可来自以 下任何亚型：aywl、ayw2、ayw3、ayw4、ayr、adw2、adw4、adrq-和 adrq+〇
[0151] ?钩虫,特别是大.中发现的钩虫（大.钩虫（Ancylostoma caninum))。这种抗原可 以是重组Ac-MTP-I (虾红素样金属蛋白酶）和/或天冬氨酸血红蛋白酶（Ac-APR-I)，它可 以在杆状病毒/昆虫细胞系统中表达为分泌蛋白[68,69]。
[0152] ·单纯疱疹病毒抗原（HSV)。用于本发明的优选HSV抗原是膜糖蛋白gD。优选使 用HSV-2毒株的gD (' gD2'抗原）。该组合物可使用C-末端膜锚定区缺失的gD形式[70]， 如包含天然蛋白的氨基酸1-306且C-末端加入天冬酰胺和谷胺酰胺的截短的gD。这种蛋 白质形式包括信号肽，信号肽被切割后产生成熟的283个氨基酸的蛋白质。缺失锚定物可 将该蛋白制备成可溶形式。
[0153] ?人乳头瘤病毒抗原（HPV)。用于本发明的优选HPV抗原是Ll衣壳蛋白， 该蛋白可组装形成称为病毒样颗粒（VLP)的结构。可通过在酵母细胞（例如酿酒 酵母（S. cerevisiae))或昆虫细胞（例如夜蛾（Spodoptera)细胞，如草地贪夜蛾 (S.frugiperda)，或果幡（Drosophila)细胞）中重组表达Ll来产生VLP。对于酵母细胞， 质粒载体可携带Ll基因；对于昆虫细胞，杆状病毒载体可携带Ll基因。更优选地，该组合 物包含来自HPV-16和HPV-18毒株的L1VLP。已证明这种二价组合非常有效[71]。除了 HPV-16和HPV-18毒株外，也可能包含来自HPV-6和HPV-Il毒株的L1VLP。也可能采用致 癌性HPV毒株。疫苗可包含20-60 μ g/ml (如约40 μ g/ml)Ll/HPV毒株。
[0154] ?炭疽抗原。炭疽是由炭疽杆菌（Bacillus anthracis)引起的。合适的炭疽杆 菌抗原包含A组分（致死因子（LF)和水肿因子（EF))，二者共有称为保护性抗原（PA)的B 组分。任选地，可使抗原脱毒。其它详情可参见参考文献[72-74]。
[0155] ?金昔色葡萄球菌抗原。已知各种金昔色葡萄球菌抗原。合适的抗原包括荚膜糖 (例如5型和/或8型菌株）和蛋白（例如IsdB，Hla等）。荚膜糖抗原理想地与载体蛋白 偶联。
[0156] ?肺炎链球菌抗原。已知各种肺炎链球菌抗原。合适的抗原包括荚膜糖（例如来 自一种或多种的血清型1、4、5、68、7?、听、14、18(：、19?、和/或23?)和蛋白质（例如肺炎球 菌溶血素、脱毒的肺炎球菌溶血素、聚组氨酸三聚体蛋白D(PhtD)等）。荚膜糖抗原理想地 与载体蛋白偶联。
[0157] ·癌抗原。已知各种肿瘤特异性抗原。本发明可使用引发针对肺癌、黑素瘤、乳腺 癌、前列腺癌等的免疫治疗性应答的抗原。
[0158] 抗原溶液通常与乳液，例如以1:1的体积比混合。该混合可以由疫苗厂商在装填 前进行，或可在使用时由健康护理工作者进行。
[0159] 药物组合物
[0160] 用本发明方法制备的组合物是药学上可接受的。它们可包含除了乳液和可任选的 抗原以外的组分。
[0161] 组合物可含有防腐剂，如硫柳汞或2-苯氧乙醇。然而，疫苗优选应基本无（即小 于5 μg/ml)含采物质，如不含硫柳采[75,76]。更优选无采的疫苗和组分。
[0162] 组合物的pH通常为5.0-8. 1，更常为6. 0-8.0,例如6. 5-7. 5。因此，本发明方法可 包括在包装前调整疫苗pH的步骤。
[0163] 该组合物优选无菌。该组合物优选无热原，如每剂量含有〈IEU (内毒素单位，标准 量度），优选每剂量〈〇. 1EU。该组合物优选不含谷蛋白。
[0164] 该组合物可含有一次免疫的物质，或者可含有多次免疫的物质（即'多剂量'药 盒）。多剂量配置优选含有防腐剂。
[0165] 疫苗的给药剂量体积一般为约0· 5ml，但可将一半剂量（即约0· 25ml)给予儿童。
[0166] 治疗方法和所述疫苗给药
[0167] 本发明提供用本发明方法制备的药盒和组合物。根据本发明的方法制备的组合物 适合给予人类患者，本发明提供了在患者中产生免疫应答的方法，包括将这种组合物给予 患者的步骤。
[0168] 本发明也提供用作医药品的这些药盒和组合物。
[0169] 本发明也提供以下应用：（i)抗原的水性制剂；和（ii)按照本发明制备的水包油 乳液在制备引起患者免疫应答的药物中的应用。
[0170] 这些方法和应用引起的免疫应答通常包括抗体应答，优选保护性抗体应答。
[0171] 可以各种方式给予该组合物。最优选的免疫途径是肌肉内注射（如注射到上肢或 下肢），但其它可用的途径包括皮下注射、鼻内[77-79]、口服[80]、皮内[80,81]、经皮、透 皮[83]等。
[0172] 可用按照本发明制备的疫苗治疗儿童和成年人。患者可以小于1岁、1-5岁、5-15 岁、15-55岁或至少55岁。患者可以是老年人（如>50岁，优选>65岁）、青年（如〈5岁）、 住院患者、健康护理人员、军队服务人员和军人、怀孕妇女、慢性疾病患者、免疫缺陷患者和 出国旅行人员。然