) -种利用核酸或蛋白质转染细胞的方法，包括将所述核酸或蛋白质与如本文 所限定的多胺衍生物例如在含水缓冲液中混合，以及利用在先前步骤中得到的混合物处理 所述细胞。
[0037] (11) -种包含多个区室的容器，所述区室含有包含转染剂的冻干组合物，所述转 染剂可为如第1项至第7项中任一项所限定的多胺衍生物或者可包含如第1项至第7项中 任一项所限定的多胺衍生物。
[0038] 本发明还提供：
[0039] (12)羧基烷基-烷基-多胺用于将聚阴离子转染至细胞中的用途。
[0040] (13)根据第12项的用途，其中所述羧基烷基-烷基-多胺的多胺部分选自由 多亚烷基亚胺、聚烯丙基胺、聚乙烯胺、聚赖氨酸以及聚鸟氨酸组成的组，其中所述多亚 烷基亚胺优选为聚亚乙基亚胺、聚亚丙基亚胺（polypropylenimines)、聚亚丁基亚胺 (polybutylenimines)或寡精胺（oligospermines)或者其同系物，并且其中所述多胺部分 包含12至100000个氮原子，更优选20至5000个氮原子。
[0041] (14)根据第12项或第13项中任一项的用途，其中羧基烷基部分为具有4至40个 碳原子、优选6至20个碳原子、更优选8至16个碳原子的脂肪族羧基烷基部分。
[0042] (15)根据第12项至第14项中任一项的用途，其中烷基部分为具有至少2个碳原 子、优选6至40个碳原子的脂肪族烷基部分。
[0043] (16)根据第12项至第15项中任一项的用途，其中所述羧基烷基-烷基-多胺的 所有羧基烷基部分均相同且所有烷基部分均相同，并且羧基烷基部分和烷基部分中的碳原 子的总数为10至30个，优选为15至25个。
[0044] (17)根据第12项至第16项中任一项的用途，其中所述羧基烷基-烷基-多胺为 包含下式（6)所示结构单元的直链的羧基烷基-烷基-多亚烷基亚胺
[0045] _ [CH2_NR6_ (CH2) x] _ (6)
[0046] 其中
[0047] X为1至10的整数，其中在不同的（CH2)x基团之间，X的值可相同或不同，
[0048] R6为氢、C 洱,+1或 C ^H2rfCOOH
[0049] r为2至40的整数，
[0050] s为4至40的整数；
[0051] 或者
[0052] 其中所述羧基烷基-烷基-多胺为包含式（7)、式（8)和式（9)中每一个所示的结 构单元的支链的羧基烷基-烷基-多亚烷基亚胺：
[0053] -[CH2-NR6- (CH2)J- (7)
[0054] -[CH2-NR7- (CH2)J- (8)
[0055] - (CH2) y-NR62 (9)
[0056] 其中
[0057] R6、x、r以及s如上所定义，以及
[0058] R7包含一个或多个选自式（7)、式（8)和式（9)的单元；
[0059] y为1至10的整数，优选为2至10的整数，其中在多次出现的（CH2)y基团之间，y 的值可相同或不同；
[0060] 以及其中每分子所述直链的羧基烷基-烷基-多亚烷基亚胺或所述支链的羧基烷 基-烷基-多亚烷基亚胺的氮原子数目为12至100000。
[0061] (18)根据第12项至第17项中任一项的用途，其中在所述羧基烷基-烷基-多胺 中羧基烷基部分与烷基部分的摩尔比在6 :1至0. 33 :1的范围内，优选在2 :1至0. 5 :1的 范围内。
[0062] (19)根据第12项至第18项中任一项的用途，其中所述多胺的至少IOmol%、优选 25至80mol %、更优选30至60mol %的氨基被所述羧基烷基和所述烷基取代（取代度）。
[0063] (20)根据第12项至第19项中任一项的用途，其中聚阴离子为核酸。
[0064] (21)根据第5项的多亚烷基亚胺衍生物，其为羧基烷基-烷基-多胺，其中所述羧 基烷基-烷基-多胺具有一种类型的羧基烷基部分以及一种类型的烷基部分，该类型的羧 基烷基部分和该类型的烷基部分中的碳原子的总数为10至30,优选为15至25。
[0065] (22)根据第21项的多亚烷基亚胺衍生物，其中所述多亚烷基亚胺衍生物为支链 的聚亚乙基亚胺，其中进一步地所述羧基烷基部分具有8至16个碳原子以及其中所述烷基 部分具有8至10个、优选约9个碳原子。
[0066] (23)核酸与如前述第12项至第22项中任一项所限定的羧基烷基-烷基-多胺的 复合物。
[0067] (24) -种试剂盒，包括：
[0068] (i)如第12项至第19项或者第21项至第22项中任一项所限定的羧基烷基-烷 基 -多胺，
[0069] (ii)pH值介于4至8之间以及离子强度为0· 2mol/L或更低、优选为0· lmol/L或 更低的缓冲溶液，以及
[0070] (iii)任选地，使用说明手册。
[0071] (25)第24项的试剂盒，其中所述多胺以溶液的形式提供，以及其中溶剂为选自乙 醇、丙醇、1，2-二羟基丙烷或异丙醇的组的低级醇，或者为包含水以及33至100%的此类低 级醇的混合物。
[0072] (26)第24项的试剂盒，其中以干的形式提供所述多胺。
[0073] (27)第24项或第26项的试剂盒，其中以冻干的形式提供所述多胺。
[0074] (28)第24项至第27项中任一项的试剂盒，其中所述多胺被放置在多孔板中。
[0075] (29)如第28项所述的试剂盒，其中所述多孔板的孔包含不同量的所述多胺，优选 在相邻的孔中包含梯度的所述多胺或者其中某些孔是空的。
[0076] (30) -种利用聚阴离子转染细胞的方法，包括：将所述聚阴离子与如第12项至第 22项中任一项所限定的羧基烷基-烷基-多胺在水中或含水缓冲液中混合，以及利用在先 前步骤中得到的混合物处理所述细胞。
[0077] 利用包含经由疏水连接体与多胺结合的羧基的羧化取代基以及利用疏水取代基 对多胺进行化学改性。本发明所用的改性的多胺在整个说明书中表示为羧化的、疏水化的 多胺或者改性的多胺或者多胺衍生物。在一个实施方式中，利用羧基烷基取代基和烷基取 代基对多胺进行化学改性。这些改性的多胺在本文中表示为羧基烷基-烷基-多胺。令人 惊讶地发现，两种改性的组合优于任何单一改性，因为实现了高信噪比和更有效的转染。新 型试剂对许多细胞类型具有这些结果，并且也优于市售的材料以及现有技术中记载的那些 材料。
[0078] 发明详沭
[0079] 本发明的多胺衍生物在多胺上具有羧化取代基和疏水取代基，其中这些取代基可 各自独立地包括一个、两个或三个选自氧、氮或硫的杂原子。本发明的羧基烷基-烷基-多 胺是在多胺上具有羧基烷基取代基作为所述羧化取代基以及具有烷基取代基作为所述疏 水取代基的多胺衍生物。
[0080] 本发明的多胺衍生物可通过本领域已知的方法获得。一种可能的方法是多胺与卤 代羧酸以及卤代疏水化合物的衍生化，所述卤代羧酸在卤素被多胺的氨基亲核取代时形成 所述羧化取代基，所述卤代疏水化合物在卤素被多胺的氨基亲核取代时形成所述疏水取代 基。本发明的羧基烷基-烷基-多胺可类似地获得。一种可能的方法是多胺与卤代链烷酸 以及与卤代烷烃通过亲核取代的烷基化。卤素或卤代取代基可为氯、溴或碘原子，优选地， 其为溴。下面给出关于多胺衍生物和羧基烷基-烷基-多胺的制备的更多细节。
[0081]
[0082] 可用作生产本发明的多胺衍生物的起始材料的多胺为具有形成多个氨基的多个 氮原子的聚合物。通过质子化作用，这些氮原子可在水溶液中带电荷。大多数脂肪族胺具 有大于8或9的pK，这意味着它们基本上或者完全地在pH值为7. 4左右（生理pH)或者更 低pH值的水溶