FBS的培养基中的、稀释至 最终浓度为2. 5μΜ的香豆雌酚处理所述细胞。用测试物质处理24小时后，用Oxiselect? 高级糖化终产物（AGE)ELISA试剂盒来评价皮肤细胞的糖化。测定糖化终产物的浓度，如表 4所示。
[0043][表 4]
由表4可以看出，香豆雌酚抑制了皮肤细胞的糖化。因此，含有香豆雌酚的组合物可改 善皮肤弹性和提供美白皮肤的作用。
[0044][测试实施例5]ATP生成作用的评价 在对人体成纤维细胞（CAS-C-004-5C，Invitrogen，科罗拉多州，美国）进行测试实施 例4的处理之后，用ATP测定试剂盒（Invitrogen，A22066)评价细胞中ATP的生成。测定 的ATP的浓度如表5所示。
[0045][表 5]
由表5可以看出，香豆雌酚促进了细胞中ATP的产生。因此，含有香豆雌酚的组合物可 促进皮肤再生，通过促进皮肤细胞的能量代谢改善皮肤弹性和活化皮肤细胞。
[0046][测试实施例6]对黑色素生成的抑制作用的评价 将取自C57BL/6小鼠的小鼠黑素细胞（Mel-Ab细胞），在37 °C和5 %的0)2中，含有 10%FBS、100nM2-氧-十四烧酰佛波醇-13-乙酸酯（2-〇-tetradecanoylphorbol-13-a cetate)和InM霍乱毒素的Dulbecco改良的Eagles培养基（DMEM)中培养。用0. 25%胰 蛋白酶-EDTA分离培养后的Mel-Ab细胞，并在24-孔板上培养，每孔105个细胞。从第二 天开始，连续3天加入0. 01、0. 1或ΙμΜ的香豆雌酚。接着，去除培养基后，用PBS冲洗，将 细胞悬浮在1Ν的氢氧化钠中，测定400nm处的吸光度。用10μΜ的对苯二酸作为阳性对照 组，已知其具有卓越的黑色素的生成抑制作用。根据测定的吸光度计算黑色素生成抑制作 用（％ )，结果见表6。
由表6可以看出，香豆雌酚具有极佳的黑色素生成抑制作用。因此，含有香豆雌酚的组 合物可具有卓越的皮肤美白作用。
[0048][测试实施例7]对前列腺素Ε2 (PGE2)生成的抑制作用的评价 按如下方法测试香豆雌酚对前列腺素Ε2生成的抑制作用。将人体成纤维细胞 (CAS-C-004-5C，Invitrogen，加利福尼亚州，美国）在C02培养箱中培养24小时。用新鲜的 无FBS的培养基替换培养基之后，培养2小时，然后用在新鲜的无FBS的培养基中的、稀释 至最终浓度为0. 〇l，〇. 1或1μΜ的香豆雌酚处理细胞。然后将细胞在并在37°C和5% (体 积比）C02培养箱中培养2小时。接着，用50μΜ的钙离子载体A23187和花生四烯酸处理 细胞5分钟以刺激前列腺素E2,细胞裂解，用ELISA读数器测定450nm处的吸光度来定量前 列腺素E2,结果见表7。计算相对于未经香豆雌酚处理组的抑制作用（％)。测定5次，结 果取平均值。
[0049][表7]
由表7可知，香豆雌酚可抑制前列腺素E2的生成。因此，含有香豆雌酚的组合物具有 消炎作用，可防止皮脂分泌、缓解皮肤问题、改善痤疮和皮肤过敏。
[0050][测试实施例8]对脂多糖类（LPS)诱导的环氧合酶-2 (C0X-2)生物合成的抑制作 用的评价 用人体成纤维细胞（CAS-C-004-5C，Invitrogen，加利福尼亚州，美国）评价香豆雌酸 对C0X-2生物合成的抑制作用。将细胞接种到6孔板，密度为每孔5xl04个细胞，在含有 10%FBS的培养基中培养约24小时，直至约80%铺满（80%confluency)。用在新鲜的无 FBS的培养基中的、稀释至最终浓度为0. 01，0. 1或1μΜ的香豆雌酚处理细胞，然后在37°C 和5% (体积比）C02培养箱中培养24小时。收获细胞，并用蛋白质印迹法对产生的C0X-2 进行定量。计算相对于对照组的C0X-2表达水平（％ )，结果见表8。
[0051][表 8]
由表8可知，香豆雌酚抑制了LPS诱导的C0X-2的生物合成。因此，含有香豆雌酚的组 合物可提供消炎作用，改善痤疮和皮肤过敏。
[0052][测试实施例9]对特应性皮炎的改善作用的评价 将诊断为具有过敏性症状（发痒、水疱或严重的干燥）或表现出遗传性过敏症状的10 岁-50岁的30人分成2组，分别给予含有0. 1 %香豆雌酚的软膏或不含香豆雌酚的软膏（对 照组）。要求他们在其过敏性症状的部位涂敷上述软膏连续12周，每天两次。12周后，通 过调查问卷检验过敏性症状的改善。检查到特应性皮炎的典型症状包括"发痒"、"干燥"、 "角质化"、"头皮肩"、"红斑"、"肿胀"、"皮肤裂"、"分泌物和湿疹"的改善。让受试者为症状 的改善情况打分，取平均值来评价特应性皮炎的改善，结果见表9。
[0053][表9]
由表9可以看出，香豆雌酚和含有香豆雌酚的组合物具有改善特应性皮炎的作用。
[0054][测试实施例10]对皮肤保湿的改善作用的评价 为了评价皮肤保湿能力的改善，在恒温、恒湿（24°C，相对湿度40% )条件下，用皮肤水 分测试仪测定测试实施例9中受试者的经皮水分损失，结果取平均值，见表10。
[0055][表 10]
由表10可以看出，香豆雌酚能抑制经皮水分的损失，且随着时间的延长，抑制作用会 增加。因此，含有香豆雌酚的组合物可提供皮肤保湿的作用。
[0056] 下面将描述本发明组合物的剂型实施例，但是本发明的范围并不仅局限于以下实 施例。
[0057][剂型实施例1]柔肤乳液 根据通常采用的方法，用表11中描述的成分制备柔肤乳液。
[0058][表11]
[剂型实施例2]滋养乳液 根据通常采用的方法，用表12中描述的成分制备滋养乳液。
[0059][表 12]
[剂型实施例3]滋养霜 根据通常采用的方法，用表13中描述的成分制备滋养霜。
[0060] [表 13]
[剂型实施例4]片剂 将香豆雌酚（80mg)、维生素E(9mg)、维生素C(9mg)、低聚半乳糖（200mg)、乳糖（60mg) 和麦芽糖（140mg)混合，用硫化干燥床造粒。加入糖酯（6mg)后，根据通常采用的方法，将 所得的组合物（500mg)制备成片剂。
[0061][剂型实施例5]饮剂 将香豆雌酸（80mg)、维生素E(9mg)、维生素C(9mg)、葡萄糖（10g)、梓檬酸（0.6g)和 寡糖糖浆（25g)混合。加入纯净水（300mL)后，将200mL所得混合物填充到瓶中。接着，在 130°C消毒4-5秒便制成饮剂。
[0062] 本领域的技术人员可以理解在本发明的范围内，可对本发明进行各种更改或修 改。
【主权项】
1. 香豆雌酚或包含香豆雌酚的豆提取物在制备用于改善特应性皮炎的皮肤护理组合 物中的用途。2. 根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述组合物包括占所述组合物的总重量 的0. 001-30wt%的香豆雌酚或包含香豆雌酚的豆提取物。3. 根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述组合物为化妆品组合物。4. 根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述组合物为食品组合物。
【专利摘要】本发明涉及一种用于皮肤护理的化妆品组合物，该组合物含有香豆雌酚，或含有包含香豆雌酚的豆提取物。
【IPC分类】A61K8/97, A61P17/00, A61Q19/00, A61Q19/08, A61P17/10, A23L33/105, A61Q19/02, A23L11/00, A61K8/49
【公开号】CN105362151
【申请号】CN201510909598
【发明人】田熙英, 金正基, 金秀耿, 徐大方, 李尚骏
【申请人】株式会社爱茉莉太平洋
【公开日】2016年3月2日
【申请日】2011年3月31日
【公告号】CN102905685A, CN103989589A, US9265707, US20130071342, WO2011122869A2, WO2011122869A3