中所含黄芩苷的mg数表示，表示其它物 质的含量时具有类同含义。
[0041] 根据本发明的注射液，其中所述黄芩提取物以及相关提取物以及本发明注射液等 物料中所含有的化学成分特别是野黄芩苷，可照以下HPLC含量测定法2描述的方法进行测 定：
[0042]【HPLC含量测定法2】（其可用于测定各种物料中的野黄芩苷）：照高效液相色谱 法（中国药典2010年版一部附录VID)测定；
[0043] 色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动 相A，以0. 1 %甲酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为280nm。理 论板数按野黄苳苷峰计算，应不低于3000 ;
[0044]
[0045] 对照品溶液的制备：精密称取野黄芩苷对照品适量，加甲醇溶解并制成每1ml含 25μg的溶液，摇勾，即得；
[0046] 供试品溶液的制备：精密量取或称取供试品适量（根据预试验确定其中分别含有 与上述对照品溶液制备过程中的相应成分相当数量级的量），置量瓶中，加水溶解/稀释至 刻度，摇匀，必要时过滤，即得；
[0047] 测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测 定，可以算得供试品中野黄芩苷（C21H18012)的含量。
[0048] 根据本发明的注射液，其中所述山羊角提取物以及相关提取物以及本发明注射液 等物料中所含有的化学成分特别是总氨基酸，可照以下HPLC含量测定法3描述的方法进行 测定：
[0049] 【HPLC含量测定法3】（其可用于测定各种物料中的单一氨基酸量，特别是可用于 测定总氨基酸值）：照高效液相色谱法（中国药典2010年版一部附录VID)测定；
[0050] 色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（Hypersil-ODS 色谱柱，柱长为20cm，内径为4. 6mm，粒径5μm);流动相A:取醋酸钠（三个结晶水）7. 00g， 加水4000ml使溶解，加三乙胺0. 8ml，四氢呋喃24ml，混匀，用2%冰醋酸溶液调节pH值至 7. 2 ;流动相B:取醋酸钠（三个结晶水）10. 88g，加水800ml使溶解，用2%冰醋酸溶液调节 pH值至7. 2,加乙腈1400ml，甲醇1800ml，混匀，按下表进行梯度洗脱；0~37. 5分钟，检测 波长为338nm，37. 5分钟之后，检测波长为262nm;柱温：35°C;理论板数按丙氨酸峰计算应 不低于40000 ;
[0051]
[0052] 对照品浴m的制爸：精想、称取大冬m酸、酸、合m酸、丝m酸、苏氨酸、苯丙氨 酸、异亮氨酸、脯氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸对照品适量，置l〇ml量瓶中，加0.lmol/L盐 酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备溶液（每lml各含天冬氨酸、甘氨酸、谷氨 酸、丝氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸lmg，苯丙氨酸0. 5mg);精密 吸取上述对照品储备溶液2ml，置10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液（每 lml各含天冬氨酸、甘氨酸、谷氨酸、丝氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮 氨酸0. 2mg，苯丙氨酸0.lmg);
[0053] 供试品溶液的制备：精密量取或称取供试品适量（根据预试验确定其中分别含有 与上述对照品溶液制备过程中的相应成分相当数量级的量），置量瓶中，加水溶解/稀释至 刻度，摇匀，必要时过滤，即得；
[0054] 测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各1μL，注入液相色谱仪，采用 1 %邻苯二甲醛（0ΡΑ)溶液与0. 5 %-氯甲酸芴甲酯溶液（FM0C)计算机模拟柱前衍生化，测 定并计算上述各氨基酸的量，以及它们的总量（为总氨基酸量）。
[0055] 在以上"HPLC含量测定法3"中涉及到的试液和操作法可照如下方法配制或执行：
[0056] 0.4mol/L硼酸缓冲液（ρΗΙΟ. 2):取硼酸，配制成0.4mol/L的溶液，用40%氢氧化 钠溶液调节pH值至10. 2,即得（本液需冷藏）；
[0057] 1 %邻苯二甲醛（0ΡΑ)溶液：称取邻苯二甲醛（OPA) 80mg，加硼酸缓冲液 (pHIO· 2) 7ml，乙腈lml，巯基丙酸125μ1，混匀，即得（本液需冷藏）；
[0058] 0.5%-氯甲酸荷甲酯（?10〇溶液：称取一氯甲酸荷甲酯$10〇5〇11^，用乙腈适 量使溶解，并稀释至l〇ml(本液需冷藏）；
[0059] 柱前衍生化反应：供试品溶液和对照品溶液在pHIO. 2的硼酸缓冲液中首先和0ΡΑ 反应，再用FM0C进行衍生；
[0060] 柱前衍生化进样程序（瓶1~5分别为OPA、FM0C、水、硼酸盐缓冲液、水）：从瓶 3吸取0μ1 (水，清洗针头）；从瓶4吸取5μ1 (硼酸盐缓冲液）；从瓶3吸取0μ1 (水，清 洗针头）；从瓶1吸取1μ1 (0ΡΑ);从瓶3吸取0μ1 (水，清洗针头）；吸取样品1μ1 ;从瓶 3吸取0μ1 ( 7Κ，清洗针头）；"在空气中"混合7μ1，10次；从瓶2吸取1μ1 (FM0C);从瓶 3吸取0μ1 (水，清洗针头）；"在空气中"混合8μ1，30次；从瓶5中吸取32μ1 (水）；"在 空气中"混合20μ1，最大速度，2次；进样。
[0061] 根据本发明的注射液，其中所述金银花提取物或总有机酸以及本发明注射液等物 料中所含有的化学成分特别是总有机酸及其各具体的有机酸，可照以下HPLC含量测定法4 描述的方法进行测定：
[0062] 【HPLC含量测定法4】（其可用于测定各种物料中的单一有机酸量，特别是可用于 测定总有机酸值）：照高效液相色谱法（中国药典2010年版一部附录VID)测定；
[0063] 色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（柱长为25cm， 内径为4. 6mm，粒径为5μm);以乙腈为流动相A，以0. 1 %甲酸溶液为流动相B，按下表中的 规定进行梯度洗脱（出峰完毕后用高比例的乙腈冲洗色谱柱）；柱温为30°C;检测波长为 325nm;理论板数按咖啡酸峰计算应不低于50000 ;
[0064]
[0065] 对照品溶液的制备：取咖啡酸和绿原酸对照品适量，精密称定，分别加50%甲醇 制成每lml含30μg的溶液，即得；
[0066] 供试品溶液的制备：精密量取或称取供试品适量（根据预试验确定其中分别含有 与上述对照品溶液制备过程中的相应成分相当数量级的量），置量瓶中，加甲醇溶解/稀释 至刻度，摇匀，必要时过滤，即得供试品溶液；
[0067]测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测 定，记录色谱峰，可以算得咖啡酸和绿原酸在测试物中的含量。
[0068] 进一步，可以分别使用以下各公式计算测试物中新绿原酸、隐绿原酸、3, 4-二咖啡 酸酰奎尼酸、3, 5-二咖啡酸酰奎尼酸、4, 5-二咖啡酸酰奎尼酸的含量：
[0074] 进一步地，可以使用以下公式计算测定物中的有机酸总量（即总有机酸的量）：
[0075] 有机酸总量=新绿原酸含量+
[0076] 绿原酸含量+
[0077] 隐绿原酸含量+
[0078] 咖啡酸含量+
[0079] 3, 4-二咖啡酸酰奎尼酸含量+
[0080] 3, 5-二咖啡酸酰奎尼酸含量+
[0081] 4, 5-二咖啡酸酰奎尼酸含量。
[0082] 在本发明中，如未另外说明，测定各种物料例如连翘提取物或者本发明注射液中 的具体化学成分例如连翘酯苷Α和连翘苷或者是它们的总和即连翘总苷时，是参照中国药 典2010年版一部第381页所载"连翘提取物"项目的【含量测定】项下的方法进行，在试样 配制以及其它具体操作时可根据本领域技术人员的常规经验作适当调整。需要说明的是， 测定各种物料例如连翘提取物或者本发明注射液中的具体化学成分例如连翘酯苷A和连 翘苷或者是它们的总和即连翘总苷的方法还可使用其它文献报道的方法，例如可以采用蔡 颖报道的方法（蔡颖，HPLC法测定小儿肺热咳喘品服液中连翘苷和连翘酯苷A的含量，齐 鲁药事，2012, 31 (6) : 333)。
[0083]此外，本发明注射液或者相关提取物特别山羊角提取物或者总氨基酸可照本发明 所述HPLC含量测定法3进行测定，其具有如本发明图1所示的典型液相色谱图，即本发明 注射液或者相关提取物特别是山羊角提取物或者总氨基酸具有图1所示的指纹图谱（在本 发明中可称为指纹图谱1)。在测定指纹图谱1时，使用的参照物溶液的制备方法为：取丙 氨酸对照品适量，精密称定，加水制成每lml含0. 2mg的溶液，即得。在本发明的一个实施 方案中，本发明注射液照本发明所述HPLC含量测定法3进行测定所得指纹图谱与图1指纹 图谱相比，脯氨酸出峰以后的色谱峰除外，经计算机模拟相似度软件（在本发明中使用本 领域技术人员常规的中药指纹图谱计算机辅助相似度评价软件（版本2004A))计算，相似 度大于0. 90。
[0084]此外，本发明注射液或者相关提取物特别金银花提取物或者总有机酸可照本发明 所述HPLC含量测定法4进行测定，检测波长为280nm，其具有类似于本发明图2所示的典型 液相色谱图，即本发明注射液或者相关提取物特别是金银花提取物或者总有机酸具有图2 所示的指纹图谱（在本发明中可称为指纹图谱2)的特征。在测定指纹图谱2时，使用的参 照物溶液的制备方法为：取咖啡酸对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每lml含30μg 的溶液，即得。在本发明的一个实施方案中，本发明注射液照本发明所述HPLC含量测定法 4进行测定（检测波长为280nm)所得指纹图谱与指纹图谱2相比，经计算机模拟相似度软 件（在本发明中使用本领域技术人员常规的中药指纹图谱计算机辅助相似度评价软件（版 本2004A))计算，相似度大于0. 90。
[0085]本发明注射液可使用一般的注射液的制备方法获得，一般而言，包括以下步骤： [0086] ⑴提供以下五种物料：熊总胆酸或熊去氧胆酸、山羊角水解物、黄芩提取物、金 银花提取物、连翘提取物，并确定各物料中的目标物的含量；
[0087] (ii)根据所述目标物在配方中的比例，分别称取步骤⑴的五种物料；
[0088] (iii)将步骤（ii)称取的五种物料与丙二醇和适量注射用水混合溶解，用酸碱调 节剂调节溶液的pH值，用水添加至全量；或者将步骤（ii)称取的五种物料混合，接着再与 丙二醇和适量注射用水混合溶解，用酸碱调节剂调节溶液的pH值，用水添加至全量；
[0089] (iv)将步骤（iii)所得药液经无菌过滤，分装到玻璃瓶中，密封，热压灭菌，即得 本发明注射液。
[0090] 上述术语"目标物"，对于熊总胆酸而言是指熊去氧胆酸，对于山羊角水解物而言 是指总氨基酸，对于黄芩提取物而言是指黄芩苷，对于金银花提取物而言是指总有机酸，对 于连翘提取物而言是指连翘总苷。
[0091] 根据上述方法，由于五种提取物中的目标物的含量可通过HPLC等方法来测定获 知，因此确定本发明注射液中的配料比例时，可以直接以熊去氧胆酸、总氨基酸、黄芩苷、总 有机酸、连翘总苷五种（类）物质的重量比例关系来准确地确定，而不需要考虑熊总胆酸、 山羊角水解物、黄芩提取物、金银花提取物、连翘提取物这些提取物的投料比，亦不需要考 虑熊胆粉、山羊角、黄芩、金银花、连翘这些药材的投料比。特别是，例如对于金银花或者金 银花提取物而言，药材或提取物的批与批之间所含的总有机酸的量可能会有变化，因此在 实际生产过程中投料时不同批次的药材或提取物可能会有变化，而每批之间如果以投料物 料金银花提取物中所含总有机酸计时，以这一参数为配比计算通常可以保持恒定。
[0092] 由此，本发明一个实施方案提供了制备本发明注射液的方法，其包括上述步骤（i) 至步骤（iv)。
[0093]另外，本发明还提供了本发明注射液在制备清热、化痰、解毒的药物中的用途。本 发明还提供了本发明注射液在制备用于风温肺热病痰热阻肺证的药物中的用途。本发明还 提供了本发明注射液在制备发热、咳嗽、咯痰不爽、咽喉肿痛、口渴、舌红、苔黄；肺炎早期、 急性支气管炎、慢性支气管炎急性发作以及上呼吸道感染属上述证候者的药物中的用途。 [0094]本发明各个实施方案的各技术特征可以组合到其它实施方案中，本发明某个实施 方案亦可以与其它实施方案组合，只要这些组合不出现矛盾。
[0095] 以本发明含熊去氧胆酸计1~10mg/ml浓度的注射液提供于临床时，其常用量为： 成人一般一次20ml，重症患者一次可用40ml，加入5 %葡萄糖注射液或0. 9 %氯化钠注射液 250~500ml，静脉滴注，控制滴数每分钟不超过60滴，一日1次；儿童按体重0. 3~0. 5ml/ kg，最高剂量不超过20ml，加入5 %葡萄糖注射液或0. 9 %氯化钠注射液100~200ml，静脉 滴注，控制滴数每分钟30~60滴，一日1次；或遵医嘱。
[0096] 以本发明含熊去氧胆酸1~10mg/ml浓度的注射液提供于临床时，其常以玻璃瓶 (例如西林瓶、安瓿瓶）包装，每支装量通常可以为5~25ml，例如每支装量为5ml、10ml、 或20ml。通常而言，以注射液形式提供的本发明组合物可以在密封状态下避光保存。本发 明注射液应用于临床时，通常成年患者的用量以熊去氧胆酸计可以为10~500mg/天，例如 20~500mg/天，例如50~500mg/天，当然临床应用时还需要考虑患者体积、年龄、性别、疾 病严重程度。鉴于与本发明注射液具有类似组方的药物已应用于临床，因此本发明注射液 的剂量的确定是本领域技术人员容易实现的。
[0097] 本发明的注射液由五种中药材（熊胆粉、山羊角、黄芩、金银花、连翘）制成，或者 由四种中药材（山羊角、黄芩、金银花、连翘）并直接添加可从化学合成或生物学合成途径 得到的熊去氧胆酸制成。各中药材以分别提取得到提取物的方