；"在空气中"混合8μ1，30次；从瓶5中吸取32μ1 (水）；"在空气 中"混合20μ1，最大速度，2次；进样； 其中所述金银花提取物或总有机酸W及本发明注射液等物料中所含有的化学成分特 别是总有机酸及其各具体的有机酸，可照W下HPLC含量测定法4描述的方法进行测定： 【HPLC含量测定法4】（其可用于测定各种物料中的单一有机酸量，特别是可用于测定 总有机酸值）：照高效液相色谱法（中国药典2010年版一部附录VID)测定； 色谱条件与系统适用性试验：W十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（柱长为25cm，内径 为4.6mm，粒径为5μm);W乙腊为流动相A，W0.1%甲酸溶液为流动相B，按下表中的规定 进行梯度洗脱（出峰完毕后用高比例的乙腊冲洗色谱柱）；柱溫为30°C;检测波长为325nm; 理论板数按咖啡酸峰计算应不低于50000 ;对照品溶液的制备：取咖啡酸和绿原酸对照品适量，精密称定，分别加50%甲醇制成 每1ml含30μg的溶液，即得； 供试品溶液的制备：精密量取或称取供试品适量（根据预试验确定其中分别含有与上 述对照品溶液制备过程中的相应成分相当数量级的量），置量瓶中，加甲醇溶解/稀释至刻 度，摇匀，必要时过滤，即得供试品溶液； 测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定，记 录色谱峰，可W算得咖啡酸和绿原酸在测试物中的含量； 进一步，可W分别使用W下各公式计算测试物中新绿原酸、隐绿原酸、3, 4-二咖啡酸酷 奎尼酸、3, 5-二咖啡酸酷奎尼酸、4, 5-二咖啡酸酷奎尼酸的含量：进一步地，可w使用w下公式计算测定物中的有机酸总量（即总有机酸的量）： 有机酸总量=新绿原酸含量+ 绿原酸含量+ 隐绿原酸含量+ 咖啡酸含量+ 3, 4-二咖啡酸酷奎尼酸含量+ 3, 5-二咖啡酸酷奎尼酸含量+ 4, 5-二咖啡酸酷奎尼酸含量。6. 根据权利要求1-5的注射液，其特征在于： 所述注射液或者相关提取物特别山羊角提取物或者总氨基酸照所述HPLC含量测定法 3进行测定，其具有如本发明图1所示的典型液相色谱图；换言之，所述注射液或者相关提 取物特别是山羊角提取物或者总氨基酸具有图1所示的指纹图谱；进一步的，在测定指纹 图谱1时，使用的参照物溶液的制备方法为：取丙氨酸对照品适量，精密称定，加水制成每 1ml含0. 2mg的溶液，即得；进一步的，所述注射液照所述HPLC含量测定法3进行测定所得 指纹图谱与图1指纹图谱相比，脯氨酸出峰W后的色谱峰除外，经计算机模拟相似度软件 计算，相似度大于0.90 ; 所述注射液或者相关提取物特别金银花提取物或者总有机酸可照本发明所述HPLC含 量测定法4进行测定，检测波长为280nm，其具有类似于本发明图2所示的典型液相色谱图； 换言之，所述注射液或者相关提取物特别是金银花提取物或者总有机酸具有图2所示的指 纹图谱的特征；进一步的，在测定指纹图谱2时，使用的参照物溶液的制备方法为：取咖啡 酸对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得；进一步的，本发明 注射液照本发明所述HPLC含量测定法4进行测定（检测波长为280nm)所得指纹图谱与指 纹图谱2相比，经计算机模拟相似度软件计算，相似度大于0. 90。7. 制备权利要求1-6的方法，其包括W下步骤： (i) 提供W下五种物料：熊总胆酸或熊去氧胆酸、山羊角水解物、黄琴提取物、金银花 提取物、连翅提取物，并确定各物料中的目标物的含量； (ii) 根据所述目标物在配方中的比例，分别称取步骤（i)的五种物料； (iii) 将步骤（ii)称取的五种物料与丙二醇和适量注射用水混合溶解，用酸碱调节剂 调节溶液的抑值，用水添加至全量；或者将步骤（ii)称取的五种物料混合，接着再与丙二 醇和适量注射用水混合溶解，用酸碱调节剂调节溶液的抑值，用水添加至全量； (iv)将步骤（iii)所得药液经无菌过滤，分装到玻璃瓶中，密封，热压灭菌，即得注射 液。8.测定权利要求1至6任一项的注射液或制备其的各物料的方法，其特征在于： (1) 测定各种物料中的黄琴巧、熊去氧胆酸、碟去氧胆酸的含量： 照中国药典2010年版一部附录VID所载高效液相色谱法测定； 色谱条件与系统适用性试验十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，W0. 〇5%Ξ氣乙酸 溶液为流动相Α，乙腊为流动相Β，按下表进行梯度洗脱；用蒸发光散射检测器；漂移管溫度 95°C;理论板数按黄琴巧峰计算，应不低于10000 ;_^^对照品溶液的制备：精密称取黄琴巧对照品、熊去氧胆酸对照品和碟去氧胆酸对照品 (运些对照品W及本发明使用的其它对照品均可W容易地从市场购得，例如从中国药品食 品检定研究院购得）适量，加丙二醇和甲醇适量，超声使完全溶解，放冷，加甲醇稀释制成 每1ml含黄琴巧0. 5mg、熊去氧胆酸0. 6mg、碟去氧胆酸0.Img的混合溶液，即得； 供试品溶液的制备：精密量取或称取供试品适量（根据预试验确定其中分别含有与上 述对照品溶液制备过程中的相应成分相当数量级的量），置10ml量瓶中，加甲醇溶解/稀释 至刻度，摇匀，必要时过滤，即得； 测定法：分别精密吸取对照品溶液4μ1、8μ1及供试品溶液5μ1，注入液相色谱仪，测 定，用外标两点法对数方程计算含量，即得，可W算得供试品中黄琴巧、熊去氧胆酸、碟去氧 胆酸的含量；该含量通常可每mg物料中所含黄琴巧的mg数表示，表示其它物质的含量 时具有类同含义； (2) 测定各种物料中的野黄琴巧： 照中国药典2010年版一部附录VID所载高效液相色谱法测定； 色谱条件与系统适用性试验十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；W乙腊为流动相A，W0. 1 %甲酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为280nm;理论板数 按野黄琴巧峰计算，应不低于3000 ;_对照品溶液的制备：精密称取野黄琴巧对照品适量，加甲醇溶解并制成每1ml含25μg的溶液，摇匀，即得； 供试品溶液的制备：精密量取或称取供试品适量（根据预试验确定其中分别含有与上 述对照品溶液制备过程中的相应成分相当数量级的量），置量瓶中，加水溶解/稀释至刻 度，摇匀，必要时过滤，即得； 测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定，可W算得供试品中野黄琴巧（C21H18012)的含量； (3)测定各种物料中的单一氨基酸量，特别是测定总氨基酸值： 照中国药典2010年版一部附录VID所载高效液相色谱法测定； 色谱条件与系统适用性试验：W十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（Hypersil-ODS色谱 柱，柱长为20cm，内径为4. 6mm，粒径5μm);流动相A:取醋酸钢（Ξ个结晶水）7.OOg，加水 4000ml使溶解，加Ξ乙胺0. 8ml，四氨巧喃24ml，混匀，用2%冰醋酸溶液调节抑值至7. 2 ; 流动相B:取醋酸钢（Ξ个结晶水）10. 88g，加水800ml使溶解，用2%冰醋酸溶液调节抑值 至7. 2,加乙腊1400ml，甲醇1800ml，混匀，按下表进行梯度洗脱；0~37. 5分钟，检测波长 为338nm，37. 5分钟之后，检测波长为262nm;柱溫：35°C;理论板数按丙氨酸峰计算应不低 于 40000 ;对照品溶液的制备：精密称取天冬氨酸、甘氨酸、谷氨酸、丝氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、异 亮氨酸、脯氨酸、丙氨酸、鄉氨酸、亮氨酸对照品适量，置10ml量瓶中，加0.Imol/L盐酸溶液 溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备溶液（每1ml各含天冬氨酸、甘氨酸、谷氨酸、丝 氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、丙氨酸、鄉氨酸、亮氨酸Img，苯丙氨酸0.5mg);精密吸取 上述对照品储备溶液2ml，置10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液（每1ml 各含天冬氨酸、甘氨酸、谷氨酸、丝氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、丙氨酸、鄉氨酸、亮氨酸 0. 2mg，苯丙氨酸 0.Img); 供试品溶液的制备：精密量取或称取供试品适量（根据预试验确定其中分别含有与上 述对照品溶液制备过程中的相应成分相当数量级的量），置量瓶中，加水溶解/稀释至刻 度，摇匀，必要时过滤，即得； 测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各1μ以注入液相色谱仪，采用1%邻 苯二甲醒（0ΡΑ)溶液与0. 5%-氯甲酸巧甲醋溶液（FM0C)计算机模拟柱前衍生化，测定并 计算上述各氨基酸的量，W及它们的总量（为总氨基酸量）； 在W上HPLC含量测定法中设及到的试液和操作法可照如下方法配制或执行： 0. 4mol/L棚酸缓冲液（pHlO.。：取棚酸，配制成0. 4mol/L的溶液，用40%氨氧化钢溶 液调节抑值至10. 2,即得（本液需冷藏）； 1%邻苯二甲醒（0PA)溶液：称取邻苯二甲醒（0PA)80mg，加棚酸缓冲液（P化0. 2)7ml， 乙腊1ml，琉基丙酸125μ1，混匀，即得（本液需冷藏）； 0.5%-氯甲酸巧甲醋（尸10〇溶液：称取一氯甲酸巧甲醋（尸10〇50111邑，用乙腊适量使 溶解，并稀释至10ml (本液需冷藏）； 柱前衍生化反应：供试品溶液和对照品溶液在抑10. 2的棚酸缓冲液中首先和OPA反 应，再用FMOC进行衍生； 柱前衍生化进样程序（瓶1~5分别为OPA、FMOC、水、棚酸盐缓冲液、水）：从瓶3吸 取0 μ 1 (水，清洗针头）；从瓶4吸取5 μ 1 (棚酸盐缓冲液）；从瓶3吸取0 μ 1 (水，清洗针 头）；从瓶1吸取1 μ 1 (ΟΡΑ);从瓶3吸取0 μ 1 ( 7心清洗针头）；吸取样品1 μ 1 ;从瓶3吸 取0 μ 1 (水，清洗针头）；"在空气中"混合7 μ 1，10次；从瓶2吸取1 μ 1 (FMOC);从瓶3吸 取0 μ 1 (水，清洗针头）；"在空气中"混合8 μ 1，30次；从瓶5中吸取32 μ 1 (水）；"在空气 中"混合20 μ 1，最大速度，2次；进样； (4)测定各种物料中的单一有机酸量，特别是测定总有机酸值： 照中国药典2010年版一部附录VID所载高效液相色谱法测定； 色谱条件与系统适用性试验：W十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（柱长为25畑1，内径 为4.6mm，粒径为5μm);W乙腊为流动相A，W0.1%甲酸溶液为流动相B，按下表中的规定 进行梯度洗脱（出峰完毕后用高比例的乙腊冲洗色谱柱）；柱溫为30°C;检测波长为325nm; 理论板数按咖啡酸峰计算应不低于50000 ;_^^对照品洛液的制备：取咖啡酸和绿原酸对照品适量，精酱称定，分别加50 %甲醇制成 每1ml含30 μ g的溶液，即得； 供试品溶液的制备：精密量取或称取供试品适量（根据预试验确定其中分别含有与上 述对照品溶液制备过程中的相应成分相当数量级的量），置量瓶中，加甲醇溶解/稀释至刻 度，摇匀，必要时过滤，即得供试品溶液； 测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，测定，记 录色谱峰，可W算得咖啡酸和绿原酸在测试物中的含量； 进一步，可W分别使用W下各公式计算测试物中新绿原酸、隐绿原酸、3, 4-二咖啡酸酷 奎尼酸、3, 5-二咖啡酸酷奎尼酸、4, 5-二咖啡酸酷奎尼酸的含量：> 进一步地，可w使用w下公式计算测定物中的有机酸总量（即总有机酸的量）： 有机酸总量=新绿原酸含量+ 绿原酸含量+ 隐绿原酸含量+ 咖啡酸含量+ 3, 4-二咖啡酸酷奎尼酸含量+ 3, 5-二咖啡酸酷奎尼酸含量+ 4, 5-二咖啡酸酷奎尼酸含量。9. 根据权利要求8的方法，其特征在于： 所述注射液或者相关提取物特别山羊角提取物或者总氨基酸照所述HPLC含量测定法 3进行测定，其具有如本发明图1所示的典型液相色谱图；换言之，所述注射液或者相关提 取物特别是山羊角提取物或者总氨基酸具有图1所示的指纹图谱；进一步的，在测定指纹 图谱1时，使用的参照物溶液的制备方法为：取丙氨酸对照品适量，精密称定，加水制成每 1ml含0. 2mg的溶液，即得；进一步的，所述注射液照所述HPLC含量测定法3进行测定所得 指纹图谱与图1指纹图谱相比，脯氨酸出峰W后的色谱峰除外，经计算机模拟相似度软件 计算，相似度大于0.90 ; 所述注射液或者相关提取物特别金银花提取物或者总有机酸可照本发明所述HPLC含 量测定法4进行测定，检测波长为280nm，其具有类似于本发明图2所示的典型液相色谱图； 换言之，所述注射液或者相关提取物特别是金银花提取物或者总有机酸具有图2所示的指 纹图谱的特征；进一步的，在测定指纹图谱2时，使用的参照物溶液的制备方法为：取咖啡 酸对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得；进一步的，本发明 注射液照本发明所述HPLC含量测定法4进行测定（检测波长为280nm)所得指纹图谱与指 纹图谱2相比，经计算机模拟相似度软件计算，相似度大于0. 90。10. 权利要求1-6任一项所述注射液在制备清热、化疲、解毒的药物中的用途；或者，在 制备用于风溫肺热病疲热阻肺证的药物中的用途；或者，在制备发热、咳嗽、咯疲不爽、咽喉 肿痛、口渴、舌红、苔黄；肺炎早期、急性支气管炎、慢性支气管炎急性发作W及上呼吸道感 染属上述证候者的药物中的用途。
【专利摘要】本发明涉及用于清热化痰解毒的注射液。该注射液包括活性物质、丙二醇、和注射用水。所述活性物质是由以下物料制备得到的：熊胆粉或熊去氧胆酸、山羊角、黄芩、金银花、连翘。本发明还涉及该注射液的制备方法以及其制药用途。本发明注射液可用于清热、化痰、解毒，可用于风温肺热病痰热阻肺证，可用于发热、咳嗽、咯痰不爽、咽喉肿痛、口渴、舌红、苔黄；肺炎早期、急性支气管炎、慢性支气管炎急性发作以及上呼吸道感染属上述证候者。
【IPC分类】A61P11/14, A61K31/575, A61K35/32, A61K36/634, A61P29/00, A61P11/10, A61K9/08, A61K35/413, A61P11/00, A61P11/04
【公开号】CN105395616
【申请号】CN201510827913
【发明人】李兴惠
【申请人】李兴惠
【公开日】2016年3月16日
【申请日】2013年12月2日
【公告号】CN103610757A, CN103610757B