静脉内、皮内、肌内或腹膜内。脂质体组合物也可作为组合物或制剂的一部分给予。
[0057] 如本文所用，术语"受试者"是指在生命的任何阶段的任何哺乳动物，尤其是人。
[0058] 如本文所用，术语"约"表示用于修改该特定值时数值附近的闭合范围（close range)。如果"X"为所述值，例如，"约X"将表示0.9X至I. IX的值，且更优选地，0.95X至1.05X 的值。任何提及"约 X" 特别表示至少值Χ、0·9Χ、0·91Χ、0·92Χ、0·93Χ、0·94Χ、0·95Χ、0·96Χ、 0·97Χ、0·98Χ、0·99Χ、1·01Χ、1·02Χ、1·03Χ、1·04Χ、1·05Χ、1·06Χ、1·07Χ、1·08Χ、1·09Χ和 1·1Χ 〇
[0059] III.发明实施方案
[0060] 脂质体
[0061] 在一个方面，本发明提供用于治疗癌症的组合物。该组合物包括：（a)基本上由约 5 Omo 1 %至约7 Omo 1 %的磷脂酰胆碱脂质或磷脂酰胆碱脂质混合物、约2 5mo 1 %至约4 5mo 1 % 的胆固醇和约2mol%到约8mol%的PEG-脂质组成的两性离子脂质体;和(b)奥沙利铂，其以 使得总脂质重量与奥沙利铂重量的比例为约20:1至约65:1的量包封在脂质体中。在一些实 施方案中，磷脂酰胆碱脂质或磷脂酰胆碱脂质混合物具有14个碳原子或更多的脂肪酸链， 并且两个脂肪酸链中不多于一个是不饱和的（no more than one of the two fatty acid chains is unsaturdated)〇
[0062] 本发明的脂质体可含有任何合适的磷脂酰胆碱脂质(PC)或PC混合物。合适的磷脂 酰胆碱脂质包括饱和的PC和不饱和的PC。
[0063] 饱和的PC的实例包括1，2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(二硬脂酰磷脂酰胆碱； DSPC)、1，2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(二棕榈酰磷脂酰胆碱;DPPC)、1-肉豆蔻酰-2-棕榈酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(MPPC)、1-棕榈酰-2-肉豆蔻酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(PMPC)、 1-肉豆蔻酰-2-硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(MSPC)、1-棕榈酰-2-硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸 胆碱(PSPC)、1_硬脂酰-2-棕榈酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱（SPPC)和1-硬脂酰-2-肉豆蔻酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(SMPC)。
[0064] 不饱和的PC的实例包括但不限于1-棕榈酰-2-油酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(棕榈酰 油酰磷脂酰胆碱(POPC); 1-棕榈酰-2-亚油酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱、1-硬脂酰-2-油酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(SOPC)、1-硬脂酰-2-亚油酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱、1-油酰-2-肉豆蔻酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(OMPC)、1-油酰-2-棕榈酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(OPPC)和1-油酰-2-硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(OSPC)。
[0065] 脂质提取物，例如蛋黄PC、心脏提取物、脑提取物、肝脏提取物、大豆PC和氢化大豆 PC(HSPC)也可用于本发明中。在一些实施方案中，脂质体中的磷脂酰胆碱脂质或磷脂酰胆 碱的混合物不是氢化大豆磷脂酰胆碱(HSPC)或不是包含HSPC的混合物。
[0066] 在一些实施方案中，磷脂酰胆碱脂质选自P0PC、DSPC、S0PC和DPPC。在一些实施方 案中，磷脂酰胆碱脂质是P0PC。
[0067]通常，本发明的组合物包括含有50-70mol%的磷脂酰胆碱脂质或磷脂酰胆碱脂质 混合物的脂质体。脂质体可含有，例如，50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、 64、65、66、67、68、69或70111〇1%磷脂酰胆碱。在一些实施方案中，脂质体含有50-55111〇1%磷 脂酰胆碱。在一些实施方案中，脂质体含有55-70mol%磷脂酰胆碱。在一些实施方案中，月旨 质体含有65mol%磷脂酰胆碱。在一些实施方案中，脂质体含有60mol%磷脂酰胆碱。在一些 实施方案中，脂质体含有55mol%磷脂酰胆碱。
[0068] 本发明组合物中的脂质体还含有25-45mo 1 %的胆固醇（即，2，15-二甲基-14- (1， 5-二甲基己基）四环[8.7.0.02'7.011'15]二十七碳-7-烯-5-醇）。脂质体可含有，例如，25、26、 27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44或45111〇1%胆固醇。在一些实 施方案中，脂质体含有25-40mol %胆固醇。在一些实施方案中，脂质体含有40-45mol %胆固 醇。在一些实施方案中，脂质体含有30mol %胆固醇。在一些实施方案中，脂质体含有 35mol%胆固醇。在一些实施方案中，脂质体含有40mol%胆固醇。
[0069]本发明的脂质体可包括任何合适的聚（乙二醇）_脂质衍生物(PEG-脂质）。在一些 实施方案中，PEG-脂质为二酰基-磷脂酰乙醇胺-N-[甲氧基（聚乙二醇）JEG-脂质中的聚 (乙二醇）的分子量通常在约500Da至约5000Da的范围内。聚（乙二醇）可具有例如750Da、 1000 Da、2000Da或5000Da的分子量。在一些实施方案中，PEG-脂质选自二硬脂酰-磷脂酰乙 醇胺-N-[甲氧基（聚乙二醇)-2000] (DSPE-PEG-2000)和二硬脂酰-磷脂酰乙醇胺-N-[甲氧 基（聚乙二醇）-5000 ] (DSPE-PEG-5000)。在一些实施方案中，PEG-脂质为DSPE-PEG-2000。
[0070] 通常，本发明的组合物包括含有2-8mol%的PEG-脂质的脂质体。该脂质体可含有， 例如，2、3、4、5、6、7或8mo 1 % PEG-脂质。在一些实施方案中，脂质体含有4-6mo 1 % PEG-脂质。 在一些实施方案中，脂质体含有5mol%PEG-脂质。
[0071] 在一些实施方案中，两性离子脂质体包括约55mol%P0PC、约40mol%胆固醇和约 5mol%DSPE-PEG(2000)。在一些实施方案中，两性离子脂质体包括约60mol%P0PC、约 35mol%胆固醇和约5mol%DSPE-PEG(2000)。在一些实施方案中，两性离子脂质体包括约 65mo 1 % POPC、约30mo 1 % 胆固醇和约5mo 1 % DSPE-PEG(2000)。
[0072] 通常，本发明的组合物含有脂质体包封的奥沙利铂，其量为使得治疗有效剂量的 奥沙利铂可以方便的剂量体积递送至受试者。给定制剂的奥沙利铂含量可表示为绝对浓度 (例如，mg/mL)或相对于脂质体中的脂质的相对量。通常，总脂质重量与奥沙利铂重量的比 例为约20:1至约65:1。脂质：奥沙利铂比例可以为，例如，20 :1、25:1、30:1、35:1、40:1、45: 1、50:1、55:1、60:1或65:1。在一些实施方案中，奥沙利铂以使得总脂质重量与奥沙利铂重 量的比例为约30:1至约45:1的量包封于所述脂质体中。在一些实施方案中，本发明的组合 物包括脂质体，该脂质体含有奥沙利铂，其以使得总脂质重量与奥沙利铂重量的比例为约 50:1的量包封于脂质体中。在一些实施方案中，本发明的组合物包括脂质体，该脂质体含有 奥沙利铂，其以使得总脂质重量与奥沙利铂重量的比例为约30:1至约35:1的量包封于脂质 体中。
[0073] 脂质体尺寸可通过本领域技术人员已知的多种方法来确定。脂质体尺寸可例如， 通过动态光散射(DLS)、准弹性光散射(QELS)、分析超速离心或电子显微镜来确定。脂质体 尺寸可以脂质体直径、脂质体体积、光散射强度或其它特征来报告。在一些实施方案中，月旨 质体的平均粒径对应于脂质体的体积平均值。在一些实施方案中，本发明的组合物包括具 有约75至约125nm的平均粒径(直径）的两性离子脂质体。例如，脂质体可具有75、85、90、95、 100、105、110、115、120或125腦的直径。在一些实施方案中，脂质体具有80-120腦的平均粒 径。在一些实施方案中，脂质体具有90-120nm的平均粒径。在一些实施方案中，本发明的组 合物含有具有90nm的平均粒径的脂质体。
[0074] 制备脂质体奥沙利铂的方法
[0075] 可使用本领域技术人员已知的多种技术来制备脂质体并装载奥沙利铂。脂质囊泡 可例如，通过用水或水性缓冲液水合干燥的脂质膜(通过在合适的容器中蒸发脂质和有机 溶剂的混合物而制备)来制备。脂质膜的水合通常得到多层囊泡(MLV)的悬浮液。或者，MLV 可通过用水或水性缓冲液在合适的溶剂例如(^-4烷醇中稀释脂质溶液来形成。单层囊泡可 由MLV通过超声处理或经具有限定的孔径的膜挤出来形成。奥沙利铂的包封可通过将药物 包括在用于在MLV形成期间膜水合或脂质稀释的水溶液中来进行。
[0076] 因此，本发明的一些实施方案提供含有如上所述的两性离子脂质体的组合物，其 中脂质体通过包括以下步骤的方法制备:a)形成含有磷脂酰胆碱脂质、胆固醇、PEG-脂质和 选自C^ 4烷醇和C^4烷醇/水混合物的溶剂的脂质溶液;b)将脂质溶液与水性缓冲液混合以 形成多层囊泡(MLV);和c)通过多孔过滤器挤出MLV以形成小单层囊泡(SUV)。在一些实施方 案中，奥沙利铂的包封通过在MLV形成期间将奥沙利铂包括在水性缓冲液中来进行。或者， 奥沙利铂的包封可在挤出后进行以在胆固醇的量低至基本上为零时形成SUV。在一些实施 方案中，脂质体制备进一步包括无菌过滤两性离子脂质体。
[0077] 制剂和给药
[0078] 在一些实施方案中，本发明的组合物可包括如上所述的脂质体和生理学上（即，药 学上)可接受的载体。术语"载体"是指用作脂质体奥沙利铂的稀释剂或媒介物(vehicle)的 通常的惰性物质。该术语也包括赋予组合物粘着特性的通常的惰性物质。通常，生理学上可 接受的载体以液体形式存在。液体载体的实例包括生理盐水、磷酸盐缓冲液、生理缓冲盐水 (135-150mM NaCl )、水、缓冲水、0.4 %盐水、0.3 %甘氨酸、提供增强的稳定性的糖蛋白（例 如，白蛋白、脂蛋白、球蛋白等)等。在一些实施方案中，载体包括碳水化合物，例如但不限于 蔗糖、葡萄糖、乳糖、直链淀粉或淀粉。因为生理学上可接受的载体部分通过所给予的具体 组合物以及通过用于给予组合物的具体方法来决定，因此有很多种本发明的药物组合物的 合适制剂（参见，例如Remington's Pharmaceutical Sciences，17th ed.，1989)〇
[0079] 本发明的组合物可通过常规的、众所周知的灭菌技术进行灭菌或可在无菌条件下 制备。水溶液可被包装使用或在无菌条件下过滤并冻干，该冻干制剂在给药前与无菌水溶 液合并。该组合物可按需要含有药学上可接受的辅助物质以接近生理条件，例如PH调节和 缓冲剂、张力调节剂、润湿剂等，例如，乙酸钠、乳酸钠、氯化钠、氯化钾和氯化钙。可包含糖 以稳定组合物，例如用于冻干的脂质体组合物的稳定剂。
[0080] 适合肠胃外给药的制剂，例如，通过关节内、静脉内、肌内、瘤内、皮内、腹膜内和皮 下途径，包括水性和非水性、等渗无菌注射溶液。该注射溶液可含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌 剂和使得制剂与预期接受者的血液等渗的溶质，以及水性和非水性无菌悬浮液，其可包括 助悬剂、增溶剂、增稠剂、稳定剂和防腐剂。注射溶液和悬浮液也可由无菌粉末，例如冻干的 脂质体制备。在本发明的实践中，组合物可例如，通过静脉内输注、腹膜内、膀胱内或鞘内给 药。肠胃外给药和静脉内给药是优选的给药方法。脂质体组合物的制剂可存在于单位剂量 或多剂量密封容器，例如安瓿和小瓶中。
[0081] 该药物制剂优选以单位剂型形式。在该形式中，制剂细分为含有适当量的活性成 分的单位剂量，例如，脂质体组合物。该单位剂型可以是包装的制剂，含有离散量的制剂的 包装。如果需要的话，该组合物也可含有其他相容的治疗剂
[0082] 治疗癌症的方法
[0083] 在另一个方面，本发明提供治疗癌症的方法。该方法包括向需要其的受试者给予 含有如上所述的脂质体奥沙利铂的组合物。在一些实施方案中，该方法包括给予含有以下 的组合物：（a)基本上由约50mol%至约70mol%的磷脂酰胆碱脂质或磷脂酰胆碱脂质混合 物、约2 5mo 1 %至约4 5mo 1 %的胆固醇和约2mo 1 %至约8mo 1 %的PEG-脂质组成的两性离子脂 质体;和(b)奥沙利铂，其以使得总脂质重量与奥沙利铂重量的比例为约20:1至约65:1的量 包封在脂质体中。在一些实施方案中，该方法包括给予含有以下的组合物：a)基本上由 55mol%P0PC、40mol%胆固醇和5mol%DSPE-PEG(2000)组成的两性离子脂质体；和b)奥沙 利铂，其以使得总脂质重量与奥沙利铂重量的比例为约50:1的量包封在脂质体中。在一些 实施方案中，该方法包括给予含有以下的组合物:a)基本上由65mo 1 % POPC、30mo 1 %胆固醇 和5mol%DSPE-PEG(2000)组成的两性离子脂质体;和b)奥沙利铂，其以使得总脂质重量与 奥沙利铂重量的比例为约30:1至约40:1的量包封在脂质体中。
[0084] 在癌症治疗的治疗使用中，可给予本发明的脂质体组合物使得奥沙利铂的初始剂 量在每日约〇.〇〇lmg/kg至约lOOOmg/kg的范围内。可使用约0.01_500mg/kg，或约0· 1-200mg/kg，或约 l-100mg/kg，或约 10_50mg/kg，或约 10mg/kg，或约 5mg/kg，或约2mg/kg，或约 lmg/kg的每日剂量范围。
[0085] 剂量可根据患者的需要、所治疗的癌症的严重程度和类型以及所采用的脂质体组 合物而变化。例如，可考虑在特定患者中诊断的癌症的类型和阶段凭经验确定剂量。给予至 患者的剂量应足以随着时间的推移在患者中实现有益的治疗反应。剂量的大小还将通过伴 随特定脂质体组合物的给药在特定患者中的任何不良副作用的存在、性质和程度来确定。 具体情况的适当剂量的确定在执业医师的技能范围内。通常，治疗以小于脂质体组合物的 最佳剂量的较小剂量开始。此后，小幅度增加剂量，直至在环境下达到最佳效果。为方便起 见，如果需要的话，可将总的每日剂量分开并在一天期间分批给药。
[0086] 本文所述的方法特别适用于实体瘤癌症(实体瘤），其是器官和组织的癌症(与血 液恶性肿瘤相反），且理想上适用于上皮癌。实体瘤癌症的实例包括膀胱癌、乳腺癌、宫颈 癌、结肠直肠癌(CRC)、食道癌、胃癌、头颈癌、肝细胞癌、肺癌、黑色素瘤、神经内分泌癌、卵 巢癌、胰腺癌、前列腺癌和肾癌。在一组实施方案中，适用于根据本发明的方法治疗的实体 瘤癌症选自CRC、乳腺癌和前列腺癌。在另一组实施方案中，本发明的方法适用于治疗血液 恶性肿瘤，包括例如多发性骨髓瘤、T细胞淋巴瘤、B细胞淋巴瘤、霍奇金病、非霍奇金淋巴 瘤、急性髓细胞性白血病和慢性髓细胞性白血病。
[0087] 上述方法中使用的组合物可以单独或与其他治疗剂组合给药。其他药剂可以是抗 癌剂或细胞毒素剂，包括但不限于阿瓦斯丁、多柔比星、顺铂、奥沙利铂（以非脂质体形式）、 卡铂、5-氟尿嘧啶、吉西他滨或紫杉烷，如紫杉醇和多西他赛。另外的抗癌剂可包括但不限 于20-印i-1,25-二羟基维生素 D3,4-甘薯苦醇、5-乙炔基尿嘧啶、9-二氢紫杉醇、阿比特龙、 阿西维辛、阿柔比星、盐酸阿考达唑、阿克罗宁、acylfulvene、腺环戊醇、阿多来新、阿地白 介素、all-tk拮抗剂、六甲蜜胺、氨莫司汀、安波霉素、醋酸阿美蒽醌、amidox、氨磷汀、氨鲁 米特、氨基乙酰丙酸、氨柔比星、安吖啶、阿那格雷、阿那曲唑、穿心莲内酯、血管发生抑制 剂、拮抗剂D、拮抗剂G、安雷利克斯、安曲霉素、抗背部化形态发生蛋白-1( &11^-dorsalizing morphogenetic protein-Ι)、抗雌激素药、抗瘤酮、反义寡核苷酸、阿非迪霉 素甘氨酸盐、凋亡基因调节剂、凋亡调节剂、脱嘌呤核酸、ARA-CDP-DL-PTBA、精氨酸脱氨基 酶、门冬酰胺酶、曲林菌素、asulacrine、阿他美坦、阿莫司汀、海洋环肽(axinastatin)l、海 洋环肽2、海洋环肽3、阿扎胞苷、阿扎司琼、阿扎毒素、重氮酪氨酸、阿扎替派、阿佐霉素、浆 果赤霉素111衍生物、匕&13]1〇1、巴马司他、苯并二氢卟酸(^61120〇111〇1'；[118)、苯佐替派、苯甲 酰基十字孢碱（benzoylstaurosporine )、β内酰胺衍生物、β-aIethine、β克拉霉素 B (beta