基于s－腺苷蛋氨酸类似物的免疫检测方法及应用于指导个体化用药的制作方法
【专利说明】基于S-腺昔蛋氨酸类似物的免疫检测方法及应用于指导个 体化用药
[0001 ]本发明专利申请延续临时美国专利US61/801，547题目为"S-腺巧蛋氨酸的免疫检 测用于个体化用药或者用于健康与癌症评估"，提交日期为2013年3月15日.本专利申请将 包括上述临时专利的全部内容。 发明领域
[0002] 本发明设及测定S-腺巧蛋氨酸在生物样品中的含量，S-腺巧蛋氨酸可作为许多疾 病的标志物。
[0003] 本发明设及使用由本发明中的抗原类似物制备的抗体的方法，测定S-腺巧蛋氨酸 在生物样品中的含量，S-腺巧蛋氨酸可作为许多疾病的标志物。
[0004] 本发明设及测定S-腺巧蛋氨酸在生物样品中的含量，S-腺巧蛋氨酸可作为许多疾 病的标志物，S-腺巧蛋氨酸的含量与疾病进展有关系，根据S-腺巧蛋氨酸的水平制定合适 的治疗方案。
[0005] 本发明设及诊断、筛查、早期检测癌症的方法，且可W用来监测肿瘤和其它疾病的 治疗效果和复发监测。
[0006] 本发明还设及一种开发祀向特异检测系统，该系统用来决定病人是否会对祀向特 异性药物有反应，具体的设及一种经济的、在同时开发诊断试剂和治疗药物时提供协同作 用的系统。
[0007] 本发明设及发现、筛选、寻找、检出、开发和评估测定甲基化指数的方法，甲基化指 数可用于疾病进展、治疗和对治疗反应的监测指标。
[000引本发明设及使用甲基化指数(有些文献说成甲基化状态，即S-腺巧蛋氨酸/S-腺巧 同型半脫氨酸)作为标志物、方法、机制、试剂、系统与试剂盒用于检测和诊断癌症和其它疾 病，也用于监测癌症进展，检测各种癌症和其它疾病的治疗效果。癌症进一步恶化发展一般 认为与进行性整体DNA低甲基化，区域性CpG过度甲基化和遗传物质不稳定性增强有关系。 甲基化指数降低与整体DNA低甲基化和遗传物质不稳定性增强有相关关系。因此，甲基化指 数是辅助健康状况与疾病进展\和的较好的标志物。
[0009] 发明的背景
[0010] S-腺巧甲硫氨酸或S-腺巧蛋氨酸（SAMe)几乎存在于体内所有的组织及体液中。 SAM对于转甲基作用运一过程至关重要，而甲基化几乎参与到生命的每一方面。SAM是体内 DNA、RNA、蛋白质、脂类及小分子甲基转移反应中的甲基供体。正常的胚胎发育需要适当的 DNA甲基化，有研究证明甲基转移酶缺失可能导致死亡（Pegg,A.E.，Feith,D.J. ,Fong, L.Y.,Coleman,C.S.,0'Brian,T.G.,and Shantz,L.M.,2003,Biochem.Soc.Trans.31,356-360)。许多肿瘤细胞中DNA的甲基化呈现异常，DNA甲基化模式的改变甚至可诱发致肿瘤因 子基因的表达或沉默肿瘤抑制因子的基因，有研究表明，给与晒齿类动物缺乏甲基的食物 将引发肝癌。
[0011] SAMe具有转硫基作用。SAMe脱甲基后生成S-腺巧同型半脫氨酸（SAH)，随后SAH水 解生成同型半脫氨酸，经转硫基作用后生成脫硫酸，随后进一步转换为半脫氨酸并最终成 为谷脫甘肤。谷脫甘肤是肝细胞的抗氧化剂，可作为解毒剂。
[0012] SAMe的另一个重要功能是转氨丙基作用。SAM脱簇后将氨丙基转移给与腐胺，生成 亚精胺和精胺，运两种物质对细胞生长、分化W及DNA和RNA的稳定至关重要。此外，该反应 过程的副产物甲硫腺巧(MTA)是一种强效止痛消炎药，运可能是SAMe对骨关节炎、类风湿性 关节炎和纤维肌痛的临床治疗有功效的原因。
[0013] SAMe是免疫体系中一种重要的物质，可维护细胞膜的正常功能，且有助于大脑中 血清素、稱黑激素及多己胺的等化学物质的产生与分解。缺乏维生素 B12或叶酸铁可造成 SAMe水平降低。SAMe还是一种抗氧化剂，可W保护机体免受活性氧分子的损害，活性氧分子 可能来自于机体自身或环境污染，被认为是造成衰老及变性疾病的重要因素。一般认为 SAMe可提高机体内其它氨基酸的功能水平。
[0014] 进一步的研究表明，SAMe经裂解酶裂解后转化为甲硫分子和高丝氨酸，它是tRNA 的氨基下酸链供体，也是生物素生物合成的氨基酸链供体。脱簇后的SAMe则是生物合成神 经调节物质多胺，亚精胺和精胺的氨丙基供体（Zappia et al(1979),Biomedical and Pharmacologcial roles of Adenosylmethionine and the Central Nervous System, page I,Pergamon Press.N.Y.)D
[0015] SAMe在临床上可作为肝脏疾病化riedel H，Goa，K丄?，and Benfield P. ,(1989)， S-AdenosyI-I-methionine: a review of its pharmacological properties and therapeutic potential in liver dysfunction and affective disorders in relation to its physiological role in cell metabolism.Drugs. 38，389-416)、关节 炎（Di Padova C,( 1987 ),Sadenosyl-I-methionine in the treatment of osteoarthritis:review of the clinical studies.Am J.Med.83，（Suppl. 5) ,6-65似及 抑郁症（Kagan，B, Sultzer D.L. ,Rosenlicht N and Gerner R.(1990), Oral S-adenosy!methionine in depressionia randomized,double blind,placebo-controlled trial. Am. J.Psychiatry 147,591-595.)的治疗药物。阿兹海默症患者脑脊髓液中的SAMe 水平降f氏(Bottiglieri et al，( 1990) ,Cerebrospinal fluid Sadenosy 1-1-methionine in depression and dementia:effects of treatment with parenteral and oral S-adenosy 1-1-methionine .J.Neurol .Neurosurg.Psychiatry 53,1096-1098.) D初步的研究 结果表明，给予SAMe可改善阿兹海默症患者的认知能力（Bottiglierietal(1994)，The clinical potential of admetionine(S-adenosyl-l_methioinine)in neurological disorders . Drugs 48,137-152.) D阿兹海默症患者脑脊髓液中的SAMe水平急剧下降 (Morrison et al，（1996)，Brain S-adenosyImethionine levels are severely decreased in Alzheimer's disease,Journal of Neurochemistry,67，1328-1331.)，中白 金森氏症患者血液中的SAMe水平也显著下降（Cheng et al，（1997), Levels of L-methionine S-adenosyItransferase activity in erythrocytes and concentrations of S-adenosy!methionine and S-adenosy!homocysteine in whole blood of patients with Parkinson's disease.Experimental Neurology 145,580-585.)。
[0016] 使用抗肿瘤药甲氨蝶吟的患者体内SAMe水平降化，该药物与SAMe-起使用可减少 其神经毒性（Bottiglieri et al(1994),The Clinical Potential of Ademetionine(S- adenosy!methionine)in neurological disorders,Drugs,48(2)，137-152.)。
[0017] 有研究报道艾滋病伴有痴呆症或痴呆/HIV病毒感染复合性脑病患者的脑脊液中 SAM-e水平，发现其SAM-e水平比无 HIV感染的痴呆病人明显降化（Keating et al(1991)， Evidence of brain methyltransferase inhibition and early brain involvement in HIV positive patients Lancet:337:935-9.)〇
[0018] De La Cruz等人的研究表明，SAMe是一种有效的抗氧化剂，长期施用SAMe可通过 增强抗氧化防御功能改变大脑、肝脏及肾脏组织中的氧化状态（De La Cruz et al， Effects of chronic administration of S-adenosyI-I-methionine on brain oxidative stress in rats.Naunyn-Schmiedeberg's Archives Pharmacol，2000，361: 47-52.)。
[0019] 无肝脏疾病及有肝脏疾病的患者口服SAMe后，其肝脏中谷脫甘版水平均有上升 (Vendemiale G et al，（1989),Effect of oral S-adenosy1-1-methionine on hepatic glutathione in patients with liver disease.Scand J Gastroenterol；24:407-15.)〇 在口服SAMe后，肝内胆汁齡积患者的搔痒症状及胆汁齡积有所改善(Giudici et al，化e use of admethionine(SAM-e) in the treatment of cholestatic liver disorders.Metaanalysis of clinical trials.IniMato et al editors.Methionine Metabolism:Molecular Mechanism and Clinical Implications.Madrid:CSIC Press; 1992pp67-79.)。而原发性纤维肌痛患者在短期服用SAMe后其症状也有所改善(Tavoni et al,Evaluation of S-adenosyImethioine in Primary Fibromaylgia. The American Journal of Medicine,Vol 83(suppl 5A),PP 107-110,1987. )D此外SAMe还可用于骨关节 炎白勺、冶疗（Koenig B.A long-term( two years ) c I in i ca I trial with Sadenosylmethionine for the treatment of osteoarthritis.The American Journal of Medicine,Vol83(su卵I 5A)，Nov.20，1987pp 89-94)。
[0020] SAMe在细胞的基础代谢过程中发挥重要作用，因此在许多似乎不相关的领域仍具 有重要的临床意义，其中它在酒精性肝硬化的临床治疗方面的应用最引人瞩目，因为酒精 性肝硬化在医学上目前还无法治愈DMato等人的研究表明口服SMe可将酒精性肝硬化的总 死亡率和/或发展为肝移植的概率降化达29%，而安慰剂治疗组仅12% (Mato et al (1999),S-adenosylmethionine in alcohol liver cirrhosis:a randomized,placebo-control led ,double blind,multi-center clinical trial,Journal of Hepatology,30， 1081-1089.)〇
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