胞外无规律 沉淀，加速创伤部位纤维化，有助于皮肤修复。
[0028] 表皮生长因子通过增加胶原生成细胞的数量或直接刺激组织修复细胞内DNA， RNA、蛋白质以及细胞外大分子物质等来实现加速皮肤组织修复的目的。表皮生长因子受体 则主要定位于表皮细胞和内皮细胞的质膜上和胞浆内。表皮生长因子与表皮生长因子受体 结合后，酪氨酸自动磷酸化，激活了酪氨酸蛋白激酶，细胞内蛋白磷酸化，导致表皮生长因 子-表皮生长因子受体复合物向细胞内传递信息，使细胞进行分化增殖。
[0029] 纤维母细胞生长因子通过激活特异性的酪氨酸激酶受体，促进细胞的分裂和增 殖，使细胞的增殖速度增加，细胞生长周期明显缩短，能够使皮肤溃疡伤口快速修复。而纤 维母细胞生长因子-7不仅能使加快表皮增生和血管的重建，而且能够提高新生表皮的抗菌 性，同时纤维母细胞生长因子-7还能促进血管内皮生长因子等营养因子的分泌，最终促进 皮肤溃疡的愈合。
[0030] 碱性成纤维细胞生长因子，能够改善皮肤血液循环，使基底层细胞加速增生，以补 充角化层细胞的脱落，减少湿性皮肤反应的发生率，同时亦可减轻湿性脱皮的炎症反应，促 进上皮修复，缩短愈合时间。
[0031] 血管内皮生长因子除了在上皮细胞表达外，在血小板、巨噬细胞及新生毛细血管 内皮细胞内呈强阳性表达。血管内皮生长因子通过与存在于内皮细胞表面的血管内皮生长 因子特异性受体结合来发挥作用。血管内皮生长因子可以通过上调尿激酶型纤溶酶原激活 物和组织型纤溶酶原激活物以及纤溶酶原激活物抑制剂的表达，以及诱导胶原酶和蛋白水 解酶的表达，满足血管新生时基质降解的要求，从而诱导血管生成。
[0032] 血小板源生长因子能促进成纤维细胞和血管内皮细胞的增殖，导致胶原聚集、大 量的毛细血管生成和肉芽的产生，对炎性细胞具有强烈的趋化作用；同时，还能够诱导创面 血管平滑肌细胞的迀移和内皮细胞增殖、迀移以及血管腔的形成。
[0033] 类胰岛素生长因子与成纤维细胞增殖、活跃程度密切相关，它与I型胶原的分泌和 创面愈合有着固有的内在联系，成纤维细胞产生的i、m型胶原是主要的间质胶原，也是皮 肤结缔组织中的主要胶原类型；它不仅能填充组织缺损，同时还为表皮细胞迀移提供支架， 所以创面中成纤维细胞是否增生活跃直接影响着创面的愈合时间。除此之外，类胰岛素生 长因子能够促进创面新生血管生成和肉芽组织生长及再上皮话，进而使肉芽组织生长活 跃、创面收缩与再上皮化。
[0034] 神经肽P物质能够促进修复细胞DNA合成以及创面肌成纤维细胞的增生，其在体外 能够诱导内皮细胞的增殖和迀移，在体内能够促进新生血管的形成，通过促进创伤后的炎 症反应、修复细胞增殖和组织重建，作用于伤口愈合的各个环节。
[0035] 细胞因子间的相互作用：转化生长因子-β主要作用于成纤维细胞，表皮生长因子 主要作用于上皮细胞，碱性成纤维细胞生长因子主要作用于内皮细胞和成纤维细胞。急性 创伤会抑制碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子基因表达，从而导致创面愈合迟缓甚 至形成溃疡。而通过激活细胞内平滑肌肌动蛋白表达，最终能够引起皮肤组织中肌成纤 维细胞数量增多和创面愈合后瘢痕形成。碱性成纤维细胞生长因子导致转化生长因子-m 表达增强，随后加快成纤维细胞转化成肌成纤维细胞，使创面收缩加快，愈合时间缩短。 [0036]神经肽P物质与其他细胞因子的相互作用：神经肽P物质能够促进转化生长因子_β 诱导的白细胞介素26和前列腺素 Ε2的表达，通过它们之间的相互作用，神经肽P物质能明显 增强星形胶质细胞的免疫调节和神经营养功能。神经肽P物质和表皮生长因子可协同刺激 成纤维细胞的增殖。
[0037] 综上所述，上述细胞因子能够刺激内皮细胞生长，增加创面中成纤维细胞及趋化 中性粒细胞和单核细胞的生长，促进毛细血管生成、胶原合成增加及肉芽生长，并能够增加 皮肤角化细胞的迀移和增殖，促进内皮细胞增殖，诱导新生血管形成，增加微小血管的通透 性，为细胞生长和新生毛细血管网的建立提供营养，因此，与间充质干细胞共同配合能够促 进皮肤快速修复。
[0038] 进一步优选地，细胞因子来源于血小板血浆，一方面由于血小板裂解液中含有大 量丰富的细胞因子，如:血小板衍生生长因子ΑΒ、转化生长因子β、表皮细胞生长因子、类胰 岛素生长因子等；另一方面，由于血小板血浆存在以下优点：1、自源性;2、富含多种高浓度 的生长因子;3、可与凝血酶作用，形成胶冻状，即富血小板凝胶;4、收缩创面，促凝血;5、防 止感染;6、对患者损伤小及无致畸、致肿瘤等作用。
[0039] 在本发明中，血小板血浆裂解液的制备过程，包括以下步骤：
[0040] 无菌条件下，取骨髓，加入肝素钠抗凝，离心至骨髓液分为三层，取下层细胞层，加 入标准培养基进行原代培养;取原代培养后的细胞悬液离心后吸取上层血浆和下层红细胞 进行第二次离心，再次取上层血浆和下层红细胞进行第三次离心，弃上清液后，混匀，置于-50~-80°C保存，24~36小时后取出，水浴解冻，反复冻存解冻至少三次，即可获得血小板血 浆裂解液。
[0041]其中，标准培养基为:含有体积分数为5~15%血清、浓度为2~15U/ml强力霉素以 及1~5U/ml肝素的DMEM培养基。
[0042]血清中含有大量的氨基酸、维生素、无机物、脂类物质和核酸衍生物等，能够为细 胞生长提供基本的营养物质，激素、各种生长因子、结合蛋白以及促接触和伸展因子使细胞 贴壁免受机械损伤等;强力霉素抗菌谱广，抗菌作用强，且作用维持时间长，可用于防止细 胞生长过程中，细菌滋生；而肝素用以起到抗凝的作用，防止细胞堆积，影响其细胞活性及 正常生长。
[0043]进一步优选地，在干细胞制剂中，血小板血浆裂解液的体积分数为5~20%。
[0044] 进一步地，本发明提供的用于修复皮肤溃疡的干细胞制剂还包括血清蛋白、柠檬 酸钠、氯化钠和法舒地尔。其中，血清蛋白是血液中脂肪酸的携带者，脂肪酸是建造脂质的 成分，而脂质又构成了细胞周围和细胞内所有的生物膜，且含有丰富的间充质干细胞细胞 生长所必需的营养成份，优选地，血清蛋白的浓度为20~80mg/ml。柠檬酸钠用于起到抗凝 作用，在本发明中优先采用PH值为5.0~6.0的柠檬酸钠调节注射剂。氯化钠用于维持细胞 外液的渗透压，参与体内酸碱平衡的调节，氯化钠的浓度为〇. 1~〇. 5mol/L。法舒地尔为RHO 激酶抑制物，通过增加肌球蛋白轻链磷酸酶的活性扩张血管，降低内皮细胞的张力，改善表 皮细胞的微循环，同时可拮抗炎性因子，保护皮肤细胞抗凋亡，促进皮肤再生;法舒地尔的 浓度为5~15ymol/L。
[0045] 进一步地，该肝细胞制剂中还包括强力霉素，用于抑制细菌滋生。优选地，在干细 胞制剂中，强力霉素的浓度为1~15U/mL。
[0046] 为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本 发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用 于限定本发明。
[0047] 实施例1
[0048]本发明提供的用于修复皮肤溃疡的干细胞制剂，包括以下成分;且细胞制剂中，各 成分浓度如下：
[0049] 间充质干细胞5X IO7个/ml;
[0050] 血小板血浆裂解液15%;
[0051 ] 人血清蛋白40mg/ml;
[0052] 柠檬酸钠调节注射剂PH=5.5;
[0053] 氯化钠 0.2mol/L;
[0054] 法舒地尔 lOymol/L;
[0055] 强力霉素8U/mL。
[0056] 其中，间充质干细胞的来源过程包括以下步骤：
[0057] Sla、获取脐带；
[0058]取足月剖宫产胎儿的脐带约4~6cm长，在无菌条件下抽经脐带血，PBS中于4°C保 存，并于4小时内进行处理。
[0059] S2a、分离纯化
[0060] 将约4~6cm长的脐带放入超净台中，去除动静脉及外膜，PBS(其中，PBS溶液中包 括0 · 2g的KH2P〇4,0 · 2g的KCl，8·Og的NaCl，1 · 15g的Na2HP〇4,定容至 1L，PH=7 ·4)进行多次清 洗，然后剪成Icm小段，再用PBS多次漂洗以尽可能去除血液，最后剪成肉糜状后，移入50mL 离心管，加入5mL、经37°C预热的、质量分数为0.1 %的胶原酶Π (8卩，100mL的I3BS缓冲液溶解 〇. Ig胶原酶获得的混合液），放入37°