注射器或小瓶），则优选使用硼硅酸盐玻璃而不是钠钙 玻璃制成的容器。
[0079] 可随容器装有(例如，装在同一盒子中）插页，该插页包括疫苗的细节，例如给药的 说明书，疫苗中抗原的细节等。说明书还可包括警告，例如准备肾上腺素溶液以防疫苗接种 后的过敏反应，等等。
[0080] 佐剂
[0081 ]在使用时，本发明疫苗宜包含佐剂，佐剂的作用是增强在接受该组合物的患者中 引起的免疫应答(体液免疫和/或细胞免疫）。水包油乳液佐剂(尤其是含有角鲨烯的佐剂） 的存在被证明可增强季节性[67]和大流行[68,69]流感疫苗的免疫应答的毒株交叉反应 性。
[0082] 本发明所用的水包油乳液通常包含至少一种油和至少一种表面活性剂，所述油和 表面活性剂是生物可降解(可代谢)和生物相容的。乳液中的油滴直径通常小于5μπι，甚至可 具有亚微米直径，通过微流化床实现这种小尺寸以提供稳定乳液。优选小于220nm的液滴， 因为它们可进行过滤除菌。
[0083] 本发明可使用的油诸如动物油（如鱼油）或植物油。植物油的来源包括坚果、种籽 和谷物。最常见的花生油、大豆油、椰子油和橄榄油是坚果油的代表例子。也可使用获自（例 如)霍霍巴豆（jojoba bean)的霍霍巴油。种籽油包括红花油、棉花籽油、葵花籽油、芝麻籽 油等。在谷物油中，最常见的是玉米油，但也可以使用来自其它谷类，如小麦、燕麦、黑麦、 稻、画眉草(teff)、黑小麦(triticale)等的油。可从坚果和种籽油开始，通过水解、分离和 酯化合适物质制备甘油和1，2_丙二醇的6-10碳脂肪酸酯(不是种籽油中天然产生的）。来自 哺乳动物乳汁的脂肪和油类是可代谢的，因此可以用于实施本发明。由动物来源获得纯油 的过程中必需的分离、纯化、皂化和其它方法的步骤是本领域众所周知的。
[0084] 大多数鱼类含有容易回收的可代谢油。例如，鳕鱼肝油、鲨鱼肝油和如鲸蜡的鲸油 是可以用于本发明的几种鱼油的代表例子。通过生化途径用5-碳异戊二烯单位合成许多支 链油，它们总称为萜类化合物。鲨鱼肝油含有称为角鲨烯的支链不饱和萜类化合物，即2，6， 10,15,19,23-六甲基_2,6,10,14,18,22-二十四碳六烯。也可采用角鲨烯的饱和类似物角 鲨烷(squalane)。鱼油，包括角鲨烯和角鲨烷，易于从商业来源获得，或可以通过本领域已 知的方法获得。优选角藍稀。
[0085] 含有角鲨烯的乳液已包含在FLUAND?和PREPANDRIX?产品中。在FLUAND?疫苗中， HA的总量是45yg(3 X 15yg)，角鲨烯的总量是9.75mg，剂量体积为0.5ml (即，19.5mg/ml角鲨 烯）。在PREPANDRIX?疫苗中，HA的总量是3.75yg(单价），角鲨烯的总量是10.68mg，剂量体积 为0.5ml(即，21.4mg/ml角藍稀）。在本发明的许多实施方式中，角藍稀浓度低于19mg/ml，其 同时仍然维持佐剂作用，且其浓度可以是< l〇mg/ml，如< 5mg/ml、< 2.5mg/ml。可使用每剂 0.5mg角鲨烯的最小量(如，见参考文献3)。每剂的量的例子包括5.3mg、4.9mg、2.7mg、2.4mg 和1.2mg等。
[0086]其他有用的油是生育酚，它宜包含在针对老年患者（如年龄大于60岁或更大的患 者）的疫苗中，因为据报道维生素 E在此患者群体中对免疫应答有正面作用[70]。它们也具 有抗氧化特性，这种特性有助于稳定该乳液[71]。存在各种生育酚(α、β、γ 3、￡或|)，但通 常使用生育酚。优选的生育酚是DL-α-生育酚。已知琥珀酸α_生育酚与流感疫苗相容， 并且是有用的替代含汞化合物的防腐剂[8]。
[0087]可使用油的混合物，例如，角鲨烯和α-生育酚的混合物。油含量通常为2-20% (体 积)。
[0088]可通过'HLB'（亲水/亲脂平衡）对表面活性剂分类。本发明优选的表面活性剂的 HLB为至少10,优选至少15,更优选至少16。可以与本发明一起使用的表面活性剂包括但不 限于：聚氧乙烯失水山梨糖醇酯表面活性剂(通常称为吐温），特别是聚山梨醇酯20和聚山 梨醇酯80;以商品名DOWFAX?出售的环氧乙烷(ΕΟ)、环氧丙烷(ΡΟ)和/或环氧丁烷(ΒΟ)的共 聚物，如直链ΕΡ/ΡΟ嵌段共聚物；乙氧基(氧-1，2-乙二基)重复数量不同的辛苯聚醇，特别感 兴趣的是辛苯聚醇9(曲通Χ-100,或叔辛基苯氧基聚乙氧基乙醇）；（辛基苯氧基）聚乙氧基 乙醇（IGEPAL CA-630/NP-40);磷脂，如磷脂酰胆碱(卵磷脂）；壬酚乙醇酯，如Tergit〇lTMNP 系列;衍生自月桂醇、鲸蜡醇、硬脂醇和油醇的聚氧乙烯脂肪醚(称为苄泽(Brij)表面活性 剂），如三甘醇单月桂基醚(苄泽30);以及失水山梨糖醇酯（通常称为司盘(SPAN))，如失水 山梨糖醇三油酸酯（司盘85)和失水山梨糖醇单月桂酸酯。优选非离子型表面活性剂。用于 乳液的最优选的表面活性剂是聚山梨醇酯80(聚氧乙烯失水山梨糖醇单油酸酯；吐温80)。 [0089] 可使用表面活性剂的混合物，如吐温80/司盘85混合物。聚氧乙烯失水山梨糖醇酯 和辛苯聚醇的组合也适用。另一种有用的组合包含月桂醇聚醚9和聚氧乙烯失水山梨糖醇 酯和/或辛苯聚醇。
[0090] 优选的表面活性剂的用量（重量％ )为：聚氧乙烯失水山梨糖醇酯（如吐温80) 0.01-1%，特别是约0.1% ;辛基-或壬基-苯氧基聚氧乙醇(如曲通χ-ioo或曲通系列的其它 去污剂)0.001-0.1 %，特别是0.005-0.02%;聚氧乙烯醚(如月桂醇聚醚9)0.1-20%，优选 0.1-10%，特别是 0.1-1 %或约 0.5%。
[0091] 优选含角鲨烯的水包油乳液，特别是含有聚山梨醇酯80的那些乳液。角鲨烯:聚山 梨醇酯80之间的重量比可以是1到10,例如2到9,如约2.2或约8.3。本发明所用的具体水包 油乳液佐剂包括但不限于：
[0092] ?角鲨烯、聚山梨醇酯80和失水山梨糖醇三油酸酯的亚微米乳液。该乳液的体积 组成可以是约5%角鲨烯、约0.5%聚山梨醇酯80和约0.5%司盘85。以重量计，这些比例为 4.3%角鲨烯、0.5%聚山梨醇酯80和0.48%司盘85。这种佐剂称为'MF59'[72-74]，参考文 献75的第10章和参考文献76的第12章更详细地描述了该佐剂。MF59乳液宜包含柠檬酸根离 子，如1 OmM梓檬酸钠缓冲液。
[0093] ?角鲨烯、生育酚和聚山梨醇酯80的亚微米乳液。这些乳液可含有2-10%角鲨烯、 2-10%生育酚和0.3-3%聚山梨醇酯80,角鲨烯:生育酚的重量比优选< 1(例如0.90)，因为 这能提供更稳定的乳液。角鲨烯和聚山梨醇酯80的体积比可以约为5: 2,或者重量比约为 11:5。可通过下述方法制备一种这样的乳液:将吐温80溶解于PBS得到2 %溶液，然后将90ml 该溶液与5g DL-α-生育酚和5ml角鲨烯的混合物混合，然后使该混合物微流体化。得到的乳 液含有平均直径为如l〇〇_250nm，优选约180nm的亚微米油滴。该乳液也可含有3-脱-0-酰化 单磷酰脂质A(3d-MPL)。此种类型的另一种有用乳液可包含(每个人用剂量)0.5-10mg角鲨 烯、0.5-llmg生育酚和0.1-4mg聚山梨醇酯80[3]。
[0094] ?角鲨烯、生育酚和曲通去污剂（如曲通X-100)的乳液。该乳液也可包含3d_MPL (见下）。该乳液可含有磷酸盐缓冲剂。
[0095] ?含有聚山梨醇酯(如聚山梨醇酯80)、曲通去污剂(如曲通X-100)和生育酚(如琥 珀酸a-生育酚）的乳液。该乳液可包含这三种组分，其质量比约为75:11:10(如750μg/ml聚 山梨醇酯80，110μg/ml曲通X-100和100μg/ml琥珀酸a-生育酚），这些浓度应包括抗原中这 些组分的贡献。该乳液还可包含角鲨烯。该乳液也可包含3d-MPL。水相可含有磷酸盐缓冲 剂。
[0096] ?角鲨烯、聚山梨醇酯80和泊洛沙姆401(〃普流罗尼克(PlUr〇niC)TML121〃）的乳 液。可以用磷酸盐缓冲盐水，pH 7.4配制该乳液。该乳液是一种有用的胞壁酰二肽的递送载 体，已在〃 SAF-Γ佐剂(0.05-1%11^-]\?^、5%角鲨烯、2.5%普流罗尼克1^121和0.2%聚山梨 酸酯80)[77]中与苏氨酰-1?^-起使用。也可不与11^-1?^-起使用，例如 /1?〃佐剂(5%角 鲨烯、1.25%普流罗尼克L121和0.2%聚山梨酸酯80) [78]。优选微流体化。
[0097] ?含有角鲨烯、水性溶剂、聚氧乙烯烷基醚亲水性非离子型表面活性剂(如聚氧乙 烯（12)十六烷基一十八烷基醚)和疏水性非离子型表面活性剂(如失水山梨糖醇酯或二缩 甘露醇酯，如失水山梨糖醇单油酸酯或'司盘80'）的乳液。该乳液优选为热可逆的和/或其 中至少90%油滴（以体积计）的尺寸小于200nm[79]。该乳液也可含有以下一种或多种物质： 醛醇；低温保护剂（例如，糖，如十二烷基麦芽苷和/或蔗糖）；和/或烷基聚糖苷 (alkylpolyglycoside)。该乳液可包含TLR4激动剂[80]。这类乳液可以被冻干。
[0098] ?角鲨烯、泊洛沙姆105和Abi Ι-Care的乳液[81 ]。含佐剂疫苗中这些组分的终浓 度(重量)是5%角鲨烯、4%泊洛沙姆105(普流罗尼克多元醇)和2%Abil-Care 85(双-PEG/ PPG-16/16PEG/PPG-16/16二甲硅油；辛酸/癸酸甘油三酯）。
[0099] ?含有0.5-50%油、0.1-10%磷脂和0.05-5%非离子型表面活性剂的乳液。如参 考文献82所述，优选的磷脂组分是磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、 磷脂酰甘油、磷脂酸、鞘磷脂和心磷脂。优选亚微米液滴尺寸。
[0100] ?不可代谢油（如轻质矿物油）和至少一种表面活性剂（如卵磷脂、吐温80或司盘 80)的亚微米水包油乳液。可包含添加剂，例如Qui 1A皂苷、胆固醇、皂苷-亲脂体偶联物(如 通过葡糖醛酸的羧基将脂族胺加到脱酰基皂苷上而产生的GPI-0100,参见参考文献83)、二 甲基二-十八烷基溴化铵和/或N，N-二-十八烷基-N，N-双(2-羟乙基)丙二胺。
[0101 ] ?皂苷(如Qui 1A或QS21)和固醇(如胆固醇)结合成螺旋胶束的乳液[84]。
[0102] ?包含矿物油、非离子亲脂性乙氧基化脂肪醇和非离子亲水性表面活性剂(例如， 乙氧基化脂肪醇和/或聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物)的乳液[85]。
[0103] ?包含矿物油、非离子亲水性乙氧基化脂肪醇和非离子亲脂性表面活性剂(例如， 乙氧基化脂肪醇和/或聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物)的乳液[85]。
[0104] 可在疫苗制备过程中将乳液与抗原混合，或者可以独立的组分提供，以在递送时 与独立的含抗原组分临时混合(如PREPANDRIX?产品那样）。这两种组分是液体时，混合两种 液体的体积比可变(例如5:1-1:5)，但通常约为1:1。
[0105] 抗原和佐剂混合后，血凝素抗原通常保留在水溶液中，但其本身可分布于油/水界 面附近。通常，如果有，也是很少的血凝素会进入该乳液的油相。
[0106] 本发明组合物中角鲨烯与血凝素(总量）的重量比可以为20-180,如25-30、50-60、 105-115。
[0107] 治疗方法和疫苗的给药途径
[0108] 本发明的组合物适用于人患者，本发明提供了在患者体内诱导免疫反应的方法， 该方法包括给予患者本发明组合物的步骤。
[0109] 本发明还提供了可作为药品使用的本发明组合物。
[0110] 本发明还提供了至少一种甲型流感病毒抗原、至少一种乙型流感病毒抗原和角鲨 烯(如，以水包油乳液形式)在制备用于主动免疫以抵抗