一种环孢素a微乳巴布膏眼贴及其制备方法

一种环孢素a微乳巴布膏眼贴及其制备方法
【专利摘要】本发明提供一种环孢素A微乳巴布膏眼贴及其制备方法，所述环孢素A微乳巴布膏眼贴包括环孢素A巴布剂胶体、无纺布以及流延聚丙烯膜，所述环孢素A巴布剂胶体涂布在无纺布上，并覆盖上流延聚丙烯膜；所述环孢素A巴布剂胶体中各原料组分如下：聚丙烯酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、明胶、高岭土、钛白粉、氢氧化铝、酒石酸、EDTA?2Na、尼泊金甲酯、尼泊金丙脂、吐温?80、甘油、纯化水以及环孢素A微乳。本发明巴布膏眼贴安全性高，药效性质稳定，在透皮性能、粘附性能以及皮肤舒适的方面表现良好，另外其药力药效持久，对皮肤刺激性小、无毒性反应。
【专利说明】一种环孢素 A微乳巴布膏眼贴及其制备方法 【技术领域】
[0001 ]本发明涉及一种环孢素A微乳巴布膏眼贴及其制备方法。 【【背景技术】】
[0002] 正常机体免疫系统存在自身耐受机制，对自身抗原不发生免疫反应。在一些情况 下机体免疫系统可以对自身成分发生免疫应答称为自身免疫(Autoimmunity)，这种自身免 疫应答通常是适度的，不产生组织损伤，而且有利于清除衰老或损伤的自身细胞起免疫稳 定作用。然而过度持久的自身免疫反应，造成组织损伤，引起病变和出现临床症状即称为自 身免疫病（Autoimmunity diseases)。
[0003] 眼部也可以发生一系列的免疫病理过程，引起眼部的各种免疫性疾病，我们把它 们统称为免疫性眼病。目前已知眼的自身免疫性疾病共几十种，诸如，甲状腺相关眼病 (thyroid associated ophthalmopathy，TAO)又称Graves眼病，是一种同时累及甲状腺与 眼眶等器官的特异性自身免疫性疾病，是最常见的眼眶病，占成人眼眶病发病率的20 %，常 见于女性，但在年龄大于50岁的男性中亦常见。约有25-50 %的Graves甲充患者会合并出现 眼部症状，如果进行眼部的MRI或CT检查，这一比例可高达90%。除此之外，在桥本氏甲状腺 炎，甲状腺功能低下的患者中也可出现。其它免疫性眼病还包括内因性葡萄膜炎、交感性眼 炎等等。故免疫性眼病的发病率高，目前临床上采用的方法包括单独的肾上腺皮质激素或 肾上腺皮质激素与免疫抑制剂的联合，对重症患者亦采用放射治疗，甚至手术治疗。但疗效 欠佳，病情反复，致肓率高，严重影响患者的生活。设计本课题的目的，即是对免疫性眼病的 一种治疗探讨，以寻找一种简单易行、行之有效的治疗免疫性眼病的方法。
[0004] 环孢素A(cyCl〇Sp〇rin A，CsA)系由11个氨基酸组成的亲脂性环状多肽，为第三代 高效免疫抑制剂，环孢素A是治疗自身免疫性眼病常用的免疫抑制药物之一，主要有滴眼 液、注射液及口服药三种制剂。本品是真菌Tolypocladiuminf latum培养液中分离的中性环 状多肽混合物，为一免疫抑制作用很强、对骨髓毒性很小的新药。环孢素A有较广泛的免疫 抑制作用，主要作用在免疫反应的诱导期，即抗原识别和增殖克隆阶段，主要降低胸腺细胞 总数，阻断胸腺内淋巴细胞分化成熟及淋巴因子合成。本品干扰抗原或致裂原触发的T细胞 激活过程，可抑制细胞介导的反应发生，因而对细胞和体液免疫过程兼有抑制效用。在细胞 水平，环孢素抑制包括白细胞介素2、T细胞生长因子(TCGF)在内的淋巴因子的生成和释放。 本品能特异而可逆地作用于淋巴细胞，而不影响造血及吞噬细胞的功能，故对中性粒细胞 的影响较小，继发感染的发生率较低。抑制体内T淋巴细胞在抗原或分裂原刺激下的分化、 增殖和分泌淋巴因子。主要作用于T辅助细胞，降低其功能，减少白细胞介素2(IL-2)的产 生。在某些条件下还抑制T细胞对IL-2的反应性，并使T杀伤细胞的发展受阻，抑制T细胞及 NK细胞的细胞毒杀伤活力，降低Th/Ts比值，但却有利于T抑制细胞的生成。本品口服吸收不 规则且不完全，个体差异大，生物利用度20 % -50 %，血药浓度达峰时间3.5小时，与血浆蛋 白结合率90%。主要在肝脏中代谢，由胆汁排出，可通过胎盘及乳汁，半衰期为10-72小时。 近年来其在眼科多种疾病的预防和治疗如干眼症、角膜移植免疫排斥反应、葡萄膜炎等方 面已有应用并取得较好疗效!环孢素A的免疫抑制效果很好，但它全身应用的副作用亦是不 容小觑，主要有肾毒性、肝毒性，发生感染的也很常见，而且有可能是致命的，还可能因为其 免疫抑制作用，发生淋巴细胞瘤。因此在上述药物副作用的前提下，曾有学者报道普通的环 孢素经过微乳化改造后可有效透皮，故课题采用环孢素微乳即"新山地明"的工业用料进行 研究，探讨可否通过眼周局部给药的方式，实现药物有效通过血眼生理屏障，通过环孢素A 微乳对局部淋巴的免疫抑制作用，达到治疗免疫性眼病的目的；再者，局部给药不同于口 月艮、静脉注射等全身给药方式，药物在局部发挥作用，相关的肝肾毒性等不良反应相应减 少，给药方便，增加患者对治疗的依从性。课题中，我们就如何实现眼周局部给药进行了相 应探讨。
[0005] 为减少药物全身给药后的不良反应的发生，随着科学技术的不断发展，新的给药 途径不断出现，例如经皮给药途径、靶向给药途径、植入给药途径等。经皮给药系统是指经 皮肤敷贴方式给药，药物由皮肤吸收进入全身血液循环并达到有效血药浓度，实验疾病预 防或治疗的一类制剂。广义的经皮给药系统可以包括贴片、软膏、凝胶剂、气雾剂和涂剂。这 种给药系统拥有其他给药系统所不具备的优势，可以避免肝脏的首过效应和胃肠道的破 坏，直接进入血液循环，维持较长的作用时间，减少给药次数，延长给药时间，维持恒定的有 效血药浓度，降低药物的毒性和副作用，提高疗效。巴布贴剂又称巴布剂，是以水溶性高分 子聚合物为基质骨架材料的外用贴剂，是从古代泥罨剂发展起来的，常用于中药制剂的体 外透皮给药。自20世纪70年代日本进行工业化生产以来，巴布剂在日本有了较快的发展，并 于80年代成功地打入了欧美市场，同期引入我国。巴布膏属于透皮给药系统或经皮吸收制 剂的一种。是经皮肤贴敷方式用药，药物由皮肤吸收进入全身血液循环并达到有效血药浓 度、实现疾病治疗或预防的一类制剂。巴布贴剂的好处：（1)可避免肝脏的首过效应和药物 在胃肠道的灭活，药物的吸收不受胃肠道因素的影响.减少用药的个体差异。（2)维持恒定 有效血药浓度或生理效应，避免口服给药引起的血药浓度峰谷现象，降低毒副反应。（3)减 少给药次数，提高治疗效能，延长作用时间，避免多剂量给药，使大多数病人易于接受。（4) 使用方便，患者可以自主用药，也可以随时撤销用药。（5)靶向性强，可直接作用与病患处， 最大发挥药物疗效。（6)保湿透气耐老化，载药量大、无刺激性过敏性，是中药外用贴剂的适 宜剂型。 【
【发明内容】
】
[0006] 本发明要解决的技术问题之一，在于提供一种环孢素A微乳巴布膏眼贴，其安全性 高，药效性质稳定，在透皮性能、粘附性能以及皮肤舒适的方面表现良好，另外其药力药效 持久，对皮肤刺激性小、无毒性反应。
[0007] 本发明是这样实现上述技术问题之一的：
[0008] 一种环孢素A微乳巴布膏眼贴，所述环孢素A微乳巴布膏眼贴包括环孢素A巴布剂 胶体、无纺布以及流延聚丙烯膜，所述环孢素A巴布剂胶体涂布在无纺布上，并覆盖上流延 聚丙烯膜;所述环孢素A巴布剂胶体中各原料组分如下：聚丙烯酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、明 胶、高岭土、钛白粉、氢氧化铝、酒石酸、EDTA-2Na、尼泊金甲酯、尼泊金丙脂、吐温-80、甘油、 纯化水以及环孢素A微乳。
[0009] 进一步地，所述环孢素A巴布剂胶体中各原料组分的含量如下：聚丙烯酸钠:聚乙 烯吡咯烷酮：明胶:高岭土:钛白粉:氢氧化铝:酒石酸:EDTA-2Na:尼泊金甲酯:尼泊金丙脂： 吐温-80:甘油：纯化水:环孢素A微乳为30:10:7.5:10:2.5:0.75:1.0:0.25:0.125:0.125: 1.5:75:500:0.1-1.0〇
[0010] 进一步地，所述环孢素A微乳巴布膏眼贴中环孢素A含量为IOmg/片，浓度为0.2-2mg/ml，其规格为7*10cm，重量8g/片。
[0011] 本发明要解决的技术问题之二，在于提供一种环孢素A微乳巴布膏眼贴的制备方 法，其制备的产品安全性高，药效性质稳定，在透皮性能、粘附性能以及皮肤舒适的方面表 现良好，另外其药力药效持久，对皮肤刺激性小、无毒性反应。
[0012] 本发明是这样实现上述技术问题之二的：
[0013] 一种环孢素A微乳巴布膏眼贴的制备方法，所述制备方法步骤如下：
[0014]步骤10、称取甘油，加入环孢素A微乳、尼泊金甲酯、尼泊金丙脂、氢氧化铝、钛白 粉、高岭土，搅拌至初步混合；
[0015]步骤20、采用均质机搅拌，得到细腻白色的混合液；
[0016] 步骤30、往上述白色混合液中加入聚丙烯酸钠，分散机上分散搅拌，得到环孢素A 微乳甘油相，备用；
[0017] 步骤40、用纯化水分别溶解EDTA-2Na、酒石酸、明胶、吐温-80,备用；
[0018] 步骤50、纯化水加热至90°C保温，然后加入聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮进行搅拌 溶解至透明，冷却至室温备用；
[0019] 步骤60、行星混合机当中加入上述聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮混合溶液、EDTA-2Na 溶液进行搅拌；
[0020] 步骤70、把环孢素A微乳甘油相加入到其中，真空条件下搅拌;然后加入酒石酸、明 胶、吐温-80溶液，继续真空搅拌，得到环孢素A巴布剂胶体；
[0021] 步骤80、将环孢素A巴布剂胶体涂布在无纺布上，再覆盖上流延聚丙烯膜，经冲切 机切割后，既得环孢素A微乳巴布膏眼贴。
[0022]进一步地，所述环孢素A微乳巴布膏眼贴中各原料组分的含量如下:所述聚丙烯酸 钠:聚乙烯吡咯烷酮：明胶:高岭土:钛白粉:氢氧化铝:酒石酸:EDTA-2Na:尼泊金甲酯：尼泊 金丙脂:吐温-80:甘油:纯化水:环孢素A微乳为30:10:7.5:10:2.5:0.75:1.0:0.25:0.125: 0.125:1.5：75：500：0.1-1.0〇
[0023] 进一步地，所述环孢素A微乳巴布膏眼贴中环孢素A含量为IOmg/片，浓度为0.2-2mg/ml〇
[0024]进一步地，所述制备方法步骤具体如下：
[0025] 步骤10、称取甘油75g，加入环孢素A微乳500mg、尼泊金甲酯0.125g、尼泊金丙脂 0. 1258、氢氧化铝0.758、钛白粉2.58、高岭土108，手工搅拌至初步混合；
[0026]步骤20、采用均质机3000转/分搅拌5min，得到细腻白色的混合液；
[0027]步骤30、上述白色混合液中加入聚丙烯酸钠30g，分散机上1000转/分，分散搅拌 lOmin，得到环孢素A微乳甘油相，备用；
[0028] 步骤40、纯化水25mg用于溶解EDTA-2Na 0.25g，备用。纯化水25mg进行溶解酒石酸 1. Og，备用；纯化水25mg用于溶解明胶7.5g，备用。纯化水25mg用于溶解吐温-80 1.5g，备 用；
[0029] 步骤50、纯化水400mg加热至90°C保温，一次性加入聚乙烯醇IOg和聚乙烯吡咯烷 酮IOg进行搅拌溶解至透明，冷却至室温备用；
[0030] 步骤60、行星混合机当中加入聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮混合溶液、EDTA-2Na溶液 进行10转/分2min搅拌；
[0031] 步骤70、把环孢素A微乳甘油相加入到其中，真空条件下30转/分，搅拌5min。加入 酒石酸、明胶、吐温-80溶液，继续真空搅拌30转/分，搅拌lOmin，得到环孢素巴布剂胶体； [0032] 步骤80、将环孢素A巴布剂胶体涂布在EW9100无纺布，覆盖CPP膜，冲切机切成7* IOcm规格，重量Sg/片，既得环孢素A微乳巴布膏眼贴。
[0033]本发明具有如下优点：
[0034]本发明环孢素A微乳巴布膏眼贴膏体中含有近50%~60%的水分，接近人体皮肤 含水状况，这样的环境中，药物可以在其中沿着浓度梯度自由移动。再者，贴敷于人体表皮 的膏体层中的药物被吸收一部分后，远端药物分子可以自动向浓度低的皮肤表层转移，由 此造成膏体内药物最大限度地渗透人体皮肤进入局部组织，且给药方便，药力药效持久。 [0035] 本发明环孢素A微乳巴布膏眼贴中环孢素A的浓度为0.15 %，相比0.5 %环孢素滴 眼液，其浓度更低，从理论上讲，安全性也相对优于环孢素滴眼液;再者，本身环孢素A微乳 的纳米粒径大于4-5nm，可通过淋巴管吸收，而淋巴管回流速度仅为血液回流速度的1/200， 故药物与淋巴细胞的接触时间更长，可达48小时之久。除此之外，环孢素A微乳巴布膏眼贴 面积7 X 10cm，可有效覆盖眼眶周转淋巴引流区域，24小时的累计透皮浓度0.4881mg/ml，在 巴布膏的促透皮作用下，其透皮性能高于单纯的环孢素A微乳，为后续研究环孢素A微乳巴 布膏眼贴在治疗免疫性眼病的疗效观察中有重要价值。
[0036]通过对环孢素A微乳巴布膏单次给药和连续给药对豚鼠完整皮肤及破损皮肤的影 响试验，结果表明本发明环孢素A微乳巴布膏对皮肤刺激性小、无毒性反应。对豚鼠皮肤过 敏性试验中，未见豚鼠红斑、水肿等皮肤过敏反应。所以环孢素A微乳巴布膏具有临床应用 价值和深入开发的可行性。 【【附图说明】】
[0037]下面参照附图结合实施例对本发明作进一步的说明。
[0038]图1为本发明实施例中20ul稀释后的环孢素A标准品的透皮图谱。
[0039]图2为本发明实施例中12ul稀释后的环孢素A标准品的透皮图谱。
[0040]图3为本发明实施例中8ul稀释后的环孢素A标准品的透皮图谱。
[0041 ]图4为本发明实施例中4ul稀释后的环孢素A标准品的透皮图谱。
[0042]图5为本发明实施例中2ul稀释后的环孢素A标准品的透皮图谱。
[0043]图6为本发明实施例中环孢素A标准曲线图。
[0044] 图7本发明实施例中环孢素A微乳巴布膏眼贴透皮试验时间-浓度曲线。 【【具体实施方式】】
[0045] 请参阅图1~7所示，对本发明的实施例进行详细的说明。
[0046] 一、环孢素A微乳巴布膏眼贴成型工艺
[0047] 1.1、制备方法
[0048] 环孢素A微乳巴布膏眼贴的制备方法步骤具体如下：
[0049] 步骤10、称取甘油75g，加入环孢素A微乳500mg、尼泊金甲酯0.125g、尼泊金丙脂 0. 1258、氢氧化铝0.758、钛白粉2.58、高岭土108，手工搅拌至初步混合；
[0050]步骤20、采用均质机3000转/分搅拌5min，得到细腻白色的混合液；
[0051]步骤30、上述白色混合液中加入聚丙烯酸钠30g，分散机上1000转/分，分散搅拌 lOmin，得到环孢素A微乳甘油相，备用；
[0052] 步骤40、纯化水25mg用于溶解EDTA-2Na 0.25g，备用。纯化水25mg进行溶解酒石酸 1. Og，备用；纯化水25mg用于溶解明胶7.5g，备用。纯化水25mg用于溶解吐温-80 1.5g，备 用；
[0053] 步骤50、纯化水400mg加热至90°C保温，一次性加入聚乙烯醇IOg和聚乙烯吡咯烷 酮IOg进行搅拌溶解至透明，冷却至室温备用；
[0054] 步骤60、行星混合机当中加入聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮混合溶液、EDTA-2Na溶液 进行10转/分2min搅拌；
[0055]步骤70、把环孢素A微乳甘油相加入到其中，真空条件下30转/分，搅拌5min。加入 酒石酸、明胶、吐温-80溶液，继续真空搅拌30转/分，搅拌lOmin，得到环孢素巴布剂胶体； [0056] 步骤80、将环孢素A巴布剂胶体涂布在EW9100无纺布，覆盖CPP膜，冲切机切成7* IOcm规格，重量Sg/片，既得环孢素A微乳巴布膏眼贴。
[0057] 1.2环孢素A微乳巴布膏的质量控制
[0058] 按2005年版本的《中国药典》一部附录Π贴膏剂的要求对环孢素A微乳巴布膏眼贴 进行检查，以进一步验证成型工艺的合理性。
[0059] 1.2.1粘附性试验
[0060] 取环孢素A微乳巴布膏眼贴3片，在室温下，除去盖衬，置于长30cm、与水平面成15 "的斜面，滚球放在中央，膏面向上，斜面上部IOcm及下部15cm用0.025mm厚的涤纟仑薄膜覆 盖，中间留出5cm膏面，将各该品种项下规定的小球，自斜面顶端自由滚下。3片环孢素A微乳 巴布膏眼贴中应有2片或2片以上能在测试段上粘住钢球，如有1片不能粘住，再用较小1号 的钢球试验，应能粘住。如只有1片能粘住钢球，2片只能粘住较小1号的钢球，则应另取3片 复试，3片均应能粘住钢球为合格。由于巴布膏眼贴将来要敷贴于眼部，且多为睡眠时使用， 故不需要太大的粘性，所以测定结果为环孢素A微乳巴布膏眼贴能粘住的最大球号为3号钢 球。
[0061] 1.2.2含膏量测定
[0062]取巴布膏眼贴1片，除去盖衬，精密称量后置于烧杯中，加适量水，加热煮沸至纱布 与膏药完全分离后将布取出，用水洗涤至布面无残留膏体，晾干后在105°C烘箱中干燥 30min，移至干燥器中，冷却30min。再次精密称量，减失重量即为膏重。按标示面积换算成每 IOOcm 2含膏量。结果，环孢素A微乳巴布膏眼贴含膏量为6.83克。
[0063] 1.2.3其他:符合2005年版《中国药典》(一部)贴膏剂有关巴布膏剂项下的规定。
[0064]二、环孢素A微乳巴布膏眼贴体外透皮实验 [0065] 1.试验材料
[0066]仪器与试剂：
[0067] 环孢素A微乳巴布膏眼贴5片（自制）；
[0068]高效液相色谱仪(岛津公司）
[0069]改良式Franz扩散池(德阳科瑞仪器设备厂）；
[0070] 接受液:30%乙醇溶液(上海金锦乐实业有限公司）；
[0071] BS-10S电子天平(北京赛多利斯天平有限公司）。
[0072]动物：ICR小鼠（长沙市天勤生物技术有限公司）15只，18-20克/只。
[0073] 2.试验方法与结果
[0074] 2.1鼠皮的制备
[0075] ICR小鼠断颈处死，通过脚掌充气至皮肤鼓起，用医用剪刀去除腹部皮肤，剃净腹 部毛发，无菌棉签粘除皮下残留组织，迅速放入生理盐水保存，必要时置入冰箱6°C保存。 [0076] 2.2体外透皮试验方法
[0077] 2.2.1扩散池与接受液的选择：
[0078]漏槽条件是指药物所处释放介质的浓度远小于其饱和浓度，生理学解释为药物在 体内被迅速吸收，制剂的体外包括释放度等测定需要模仿体内生理条件的，满足药物溶解-吸收的过程，漏槽条件起到了修正作用，一般释放介质的体积为药物饱和溶液所需介质体 积的3~5倍。结合环孢素A的漏槽条件，查阅相关文献后，确定本研究中采用改良Franz扩散 池（图3)进行环孢素A微乳巴布膏眼贴的体外透皮吸收实验，并确定本试验所用的接受液是 30%乙醇生理盐水混合液。
[0079] 2 · 2 · 2改良Franz扩散池操作流程
[0080]根据改良Franz扩散池的瓶口大小剪取环孢素A微乳巴布膏眼贴样品，取出事先准 备好的离体ICR小鼠鼠皮，生理盐水洗净，用滤纸吸干表面水分，将同等面积的供试环孢素A 微乳巴布膏眼贴样品贴于皮肤角质层面，贴在瓶口，夹好上口漏槽和夹板(贴药面朝向供应 室，皮肤面朝向接受室），接受室内加入30 %乙醇生理盐水混合液，操作中避免气泡产生。模 拟眼表皮肤温度，循环水温度控制在33°C，搅拌速度控制在50转/分进行试验。分别在实验 的2小时、5小时、8小时、12小时、24小时取2ml样品，取完补足等量的接受液。所得样品经过 滤膜过滤，留取Iml待行液相色谱分析。
[0081] 2.3环孢素A微乳经皮浓度的测定
[0082] 2.3.1色谱条件
[0083] 参照2010年版药典二部附录VD，采用高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC)检测样品环孢素A浓度。用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 (柱前连接f〇.25mmx 1000 mm的不锈钢管）；以乙腈一水一叔丁基甲醚一磷酸(430:520: 50:1)为流动相;检测波长为210nm;不锈钢管和柱温70°C。
[0084] 2.3.2环孢素A浓度-峰面积标准曲线绘制
[0085] 标准溶液配制及测定：称取环孢菌素A标准品0.0234g，溶于2ml甲醇（浓度为 0.0117g/ml，即11.7mg/ml)，从中取0· Iml加0.9ml甲醇稀释(浓度为1 · 17mg/ml)，再从中取 0 · Iml加0 · 9ml 甲醇稀释（浓度为0 · 117mg/ml)，并分别取20ul、12ul、8ul、4ul、2ul采用HPLC 上机检测环孢素A标准品峰面积，如图I~5所示，得到环孢素A各标准品的峰面积值，如表1 所示。根据标准品浓度绘制标准曲线，如图6所示。
[0086] 表1环孢素A标准品峰面积值
[0088]以横作标X代表浓度，纵作标Y代表峰面积，列出线性方程式Y=I. 134X 105+2.522 X 109 XX，浓度 X= (Y-1.134 X 105)/2.522 X 109,如下表 2所示，线性相关系数 R = O .99987。 [0089] 表2线性方程式 [0090] Linear Regression:Y=A+B*X
[0092] 2.3.3环孢素A微乳巴布膏眼贴样品体外透皮试验浓度测定 [0093] 2.3.3.1.样品溶液配制及测定
[0094] 取环孢素A微乳巴布膏眼贴接受液待测样品0.2ml加Iml甲醇稀释，并取20ul测 HPLC，平行测定3次，求取平均峰面积，代入线性方程式计得计算浓度，由于计算浓度=实际 浓度X 0.2ml X (20/1200 )，所以样品实际浓度=计算浓度X 300。根据标准品透皮图谱，环 孢素A透皮峰面积计算起始时间10.53 ± 0.188min，达峰时间12.78 ± 0.104min，计算结束时 间15.57±0.172min，计算机自动生成峰面积数值(表3)，透皮时间与峰面积为正相关关系。 [0095]表3环孢素A微乳巴布膏眼贴透皮接受液样品浓度
[0097] 2.3.3.2.环孢素A微乳巴布膏眼贴透皮试验时间-浓度曲线
[0098] 以横作标代表时间，纵作标代表样品透过浓度作图，如图7所示，说明环孢素A微乳 巴布膏眼贴有良好的透皮能力。
[0099]三、皮肤刺激性及过敏性试验
[0100] 环孢素A微乳巴布膏眼贴含有环孢素A微乳及其它材料，本试验观测动物局部给药 后对皮肤的刺激性及过敏反应。
[0101] 1试验动物及材料
[0102] 健康豚鼠（长沙市天勤生物技术有限公司），环孢素A微乳巴布膏（自制)及基质（自 制），脱毛剂8 %硫化钠(青岛雅各化学试剂有限公司）。
[0103] 2皮肤刺激性试验
[0104] 2.1单次给药对豚鼠完整皮肤及破损皮肤的影响。
[0105] 2.1.1试验方法
[0106] 取豚鼠10只，给药前24小时将豚鼠背部脊柱两侧用8%硫化钠脱毛，面积约9cm2， 其中5只用细砂纸在脱毛部位造成局部擦伤。分脊柱左右两个区，左侧为给药区，右侧为对 照区。在脱毛给药区贴相应面积的环孢素A微乳巴布膏，右侧贴相同面积的基质，药物与皮 肤接触24h后用清水轻轻洗去药膏及基质，于去除受试物后1、12、24、48、721!观察其皮肤刺 激反应，看有无红斑、水肿、隆起、焦痴形成等，并对每只动物的皮肤反应强度进行评分，观 察药物对皮肤刺激情况。
[0107] 2.1.2评分标准
[0108] 表4皮肤反应评分标准
[0111]表5皮肤刺激强度评价
[0113] 反应平均值=(红斑形成总分十水肿形成总分)/合计动物数。
[0114] 2.1.3试验结果
[0115] 环孢素A微乳巴布膏对完整皮肤无刺激性，去除受试药物后1、12、24、48、721!后均 无红斑及水肿（结果见表5)，且动物精神状态、外观、摄食量、体重、呼吸、大小便、肤色、外观 等未见明显异常，破损皮肤给药后也未见明显的皮肤刺激性，其他也未见明显异常(结果 见表6和表7)。
[0116] 表6环孢素A微乳巴布膏一次给药对完整皮肤刺激性试验结果
[0120] 结论:环孢素A微乳巴布膏对豚鼠完整皮肤及破损皮肤单次给药试验未出现皮肤 刺激反应，破损皮肤给药仅有一只见轻度的发红、水肿。
[0121] 2.2多次给药对豚鼠完整皮肤及破损皮肤的影响
[0122] 2.2.1试验方法
[0123] 取豚鼠10只，给药前24小时将豚鼠背部脊柱两侧用8%硫化钠脱毛，面积约9cm cm2,其中5只用细砂纸在脱毛部位造成局部擦伤。分脊柱左右两个区，左侧为给药区，右侧 为对照区。在脱毛给药区贴相应面积的环孢素A微乳巴布膏，右侧贴相同面积的基质，每天1 次，连续7天。每日密切观察皮肤反应情况。观察其皮肤刺激反应，看有无红斑、水肿、隆起、 焦痴形成等，并对每只动物的皮肤反应强度进行评分，观察药物对皮肤刺激情况。
[0124] 2.2.2评分标准
[0125] 评分标准见表3、4。
[0126] 2.2.3试验结果及结论
[0127] 动物完整皮肤区在给药7天后观察，未见明显的红斑、水肿反应。破损皮肤区从用 药即刻到给药前3天均无明显异常，第4天皮肤开始出现轻度红斑、水肿反应，逐渐明显。（结 果见表8)。所有动物精神状态、外观、摄食量、体重、呼吸、大小便、肤色、外观等未见明显异 常。
[0128] 表8环孢素A微乳巴布膏连续给药对豚鼠皮肤刺激性试验结果
[0130] 结论:环孢素A微乳巴布膏对豚鼠完整皮肤连续给药无刺激性;而破损皮肤其保护 屏障受到破坏，连续给药时有轻度刺激性。豚鼠完整皮肤及破损皮肤经连续给药均未出现 毒性反应。
[0131] 3皮肤过敏试验
[0132] 3.1实验方法
[0133] 取豚鼠20只，随机分为基质组、给药组2组，给药前24小时将豚鼠背部脊柱两侧用 8%硫化钠脱毛，面积约9cm2，将环孢素A微乳巴布膏和基质各涂于豚鼠左侧脱毛区，6h后除 去受试物。第7天、第14天以同样方法重复致敏接触1次。在最后一次给受试物致敏后14天， 将环孢素A微乳巴布膏和基质各涂于豚鼠右侧脱毛区，6h后除去受试物，即刻观察，然后于 24、48、72h再次观察皮肤过敏反应情况。
[0134] 3.2评分标准
[0135] 3.2.1皮肤过敏反应评分标准(见表9)。
[0136] 表9皮肤过敏反应评分标准
[0138] 3.2.2皮肤致敏性评价标准(见表10)
[0139] 表10皮肤致敏性评价标准
[0141 ]致敏发生率=发生过敏动物例数(不论过敏程度轻重)/受试动物总数。
[0142] 3.3实验结果
[0143] 涂用化环孢素A微乳巴布膏及基质后，未发现受试豚鼠局部皮肤出现红斑、水肿等 过敏反应，皮肤致敏评价为无致敏性。结果见表11。
[0144] 表11过敏实验结果
[0147] 结论:环孢素A微乳巴布膏对豚鼠皮肤过敏性试验中，未见豚鼠红斑、水肿等皮肤 过敏反应。
[0148] 综上，巴布剂具有众多的优点，例如贴敷舒适、载药量大、生产无"三废"、适宜的粘 附性等。本发明环孢素A微乳巴布膏眼贴膏体基质具有以下优点：（1)对主药稳定性没有影 响，无副作用；（2)有适当的弹性和薪性；（3)不在皮肤上残存；（4)能保持巴布剂的形状；（5) 不因汗水作用而软化;（6)在规定的时间内稳定和保湿性。
[0149] 本发明环孢素A微乳巴布膏眼贴膏体中含有近50%~60%的水分，接近人体皮肤 含水状况，这样的环境中，药物可以在其中沿着浓度梯度自由移动。再者，贴敷于人体表皮 的膏体层中的药物被吸收一部分后，远端药物分子可以自动向浓度低的皮肤表层转移，由 此造成膏体内药物最大限度地渗透人体皮肤进入局部组织，且给药方便，药力药效持久。
[0150] 本发明环孢素A微乳巴布膏眼贴中环孢素A的浓度为0.15%，相比0.5%环孢素滴 眼液，其浓度更低，从理论上讲，安全性也相对优于环孢素滴眼液;再者，本身环孢素A微乳 的纳米粒径大于4-5nm，可通过淋巴管吸收，而淋巴管回流速度仅为血液回流速度的1/200， 故药物与淋巴细胞的接触时间更长，可达48小时之久。除此之外，环孢素A微乳巴布膏眼贴 面积7 X 10cm，可有效覆盖眼眶周转淋巴引流区域，24小时的累计透皮浓度0.4881mg/ml，在 巴布膏的促透皮作用下，其透皮性能高于单纯的环孢素A微乳，为后续研究环孢素A微乳巴 布膏眼贴在治疗免疫性眼病的疗效观察中有重要价值。
[0151] 通过对环孢素A微乳巴布膏单次给药和连续给药对豚鼠完整皮肤及破损皮肤的影 响试验，结果表明本发明环孢素A微乳巴布膏对皮肤刺激性小、无毒性反应。对豚鼠皮肤过 敏性试验中，未见豚鼠红斑、水肿等皮肤过敏反应。所以环孢素A微乳巴布膏具有临床应用 价值和深入开发的可行性。
[0152] 虽然以上描述了本发明的【具体实施方式】，但是熟悉本技术领域的技术人员应当理 解，我们所描述的具体的实施例只是说明性的，而不是用于对本发明的范围的限定，熟悉 本领域的技术人员在依照本发明的精神所作的等效的修饰以及变化，都应当涵盖在本发明 的权利要求所保护的范围内。
【主权项】
1. 一种环孢素 A微乳巴布膏眼贴，其特征在于:所述环孢素 A微乳巴布膏眼贴包括环孢 素 A巴布剂胶体、无纺布以及流延聚丙烯膜，所述环孢素 A巴布剂胶体涂布在无纺布上，并覆 盖上流延聚丙烯膜;所述环孢素 A巴布剂胶体中各原料组分如下：聚丙烯酸钠、聚乙烯吡咯 烷酮、明胶、高岭土、钛白粉、氢氧化铝、酒石酸、EDTA-2Na、尼泊金甲酯、尼泊金丙脂、吐温-80、甘油、纯化水以及环孢素 A微乳。2. 根据权利要求1所述的一种环孢素 A微乳巴布膏眼贴，其特征在于:所述环孢素 A巴布 剂胶体中各原料组分的含量如下：聚丙烯酸钠:聚乙烯吡咯烷酮：明胶:高岭土:钛白粉:氢 氧化铝：酒石酸:EDTA-2Na:尼泊金甲酯：尼泊金丙脂：吐温-80:甘油：纯化水:环孢素 A微乳 为30:10:7.5:10:2.5:0.75:1.0:0.25:0.125:0.125:1.5:75:500:0.1-1.0。3. 根据权利要求2所述的一种环孢素 A微乳巴布膏眼贴，其特征在于:所述环孢素 A微乳 巴布膏眼贴中环孢素 A含量为10mg/片，浓度为0.2-2mg/ml，其规格为7*10cm，重量8g/片。4. 一种环孢素 A微乳巴布膏眼贴的制备方法，其特征在于:所述制备方法步骤如下： 步骤10、称取甘油，加入环孢素 A微乳、尼泊金甲酯、尼泊金丙脂、氢氧化铝、钛白粉、高 岭土，搅拌至初步混合； 步骤20、采用均质机搅拌，得到细腻白色的混合液； 步骤30、往上述白色混合液中加入聚丙烯酸钠，分散机上分散搅拌，得到环孢素 A微乳 甘油相，备用； 步骤40、用纯化水分别溶解E：DTA-2Na、酒石酸、明胶、吐温-80，备用； 步骤50、纯化水加热至90°C保温，然后加入聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮进行搅拌溶解 至透明，冷却至室温备用； 步骤60、行星混合机当中加入上述聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮混合溶液、EDTA-2Na溶液 进行搅拌； 步骤70、把环孢素 A微乳甘油相加入到其中，真空条件下搅拌;然后加入酒石酸、明胶、 吐温-80溶液，继续真空搅拌，得到环孢素 A巴布剂胶体； 步骤80、将环孢素 A巴布剂胶体涂布在无纺布上，再覆盖上流延聚丙烯膜，经冲切机切 割后，既得环孢素 A微乳巴布膏眼贴。5. 根据权利要求4所述的一种环孢素 A微乳巴布膏眼贴的制备方法，其特征在于:所述 环孢素 A微乳巴布膏眼贴中各原料组分的含量如下:所述聚丙烯酸钠:聚乙烯吡咯烷酮：明 胶:高岭土:钛白粉:氢氧化铝:酒石酸:EDTA-2Na:尼泊金甲酯:尼泊金丙脂：吐温-80:甘油： 纯化水：环孢素 A微乳为30:10: 7 · 5:10: 2 · 5:0 · 75:1 · 0 :0 · 25:0 · 125 :0 · 125 :1 · 5:75: 500 : 0·Η·0〇6. 根据权利要求5所述的一种环孢素 A微乳巴布膏眼贴的制备方法，其特征在于:所述 环孢素 A微乳巴布膏眼贴中环孢素 A含量为1 Omg/片，浓度为0.2-2mg/ml。7. 根据权利要求5所述的一种环孢素 A微乳巴布膏眼贴的制备方法，其特征在于:所述 制备方法步骤具体如下： 步骤10、称取甘油75g，加入环孢素 A微乳500mg、尼泊金甲酯0.125g、尼泊金丙脂 0.1258、氢氧化铝0.758、钛白粉2.58、高岭土10 8，手工搅拌至初步混合； 步骤20、采用均质机3000转/分搅拌5min，得到细腻白色的混合液； 步骤30、上述白色混合液中加入聚丙烯酸钠30g，分散机上1000转/分，分散搅拌10min， 得到环孢素 A微乳甘油相，备用； 步骤40、纯化水25mg用于溶解EDTA-2Na 0.25g，备用；纯化水25mg进行溶解酒石酸 1 · 〇g，备用；纯化水25mg用于溶解明胶7 · 5g，备用；纯化水25mg用于溶解吐温-80 1 · 5g，备 用； 步骤50、纯化水400mg加热至90°C保温，一次性加入聚乙烯醇10g和聚乙烯吡咯烷酮10g 进行搅拌溶解至透明，冷却至室温备用； 步骤60、行星混合机当中加入聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮混合溶液、EDTA-2Na溶液进行 10转/分2min搅拌； 步骤70、把环孢素 A微乳甘油相加入到其中，真空条件下30转/分，搅拌5min;加入酒石 酸、明胶、吐温-80溶液，继续真空搅拌30转/分，搅拌lOmin，得到环孢素巴布剂胶体； 步骤80、将环孢素 A巴布剂胶体涂布在EW9100无纺布，覆盖CPP膜，冲切机切成7*10cm规 格，重量8g/片，既得环孢素 A微乳巴布膏眼贴。
【文档编号】A61K38/13GK105963678SQ201610326300
【公开日】2016年9月28日
【申请日】2016年5月17日
【发明人】陈丹娜, 陈敏, 许丽疆
【申请人】莆田学院附属医院