一种组合物及其在制备改善肠道功能的产品中的应用
【专利摘要】本发明涉及保健品技术领域，尤其涉及一种组合物及其在制备改善肠道功能的产品中的应用。本发明提供了一种组合物及其在制备改善肠道功能的产品中的应用，本发明将益生菌、益生元、山楂和山药进行合理复配，各组分协同作用，从而使得所得组合物具有良好的防治腹泻、调节肠道菌群的作用。其效果显著优于(p<0.05)对比例。
【专利说明】
一种组合物及其在制备改善肠道功能的产品中的应用
技术领域
[0001] 本发明涉及保健品技术领域，尤其涉及一种组合物及其在制备改善肠道功能的产 品中的应用。
【背景技术】
[0002] 腹泻是长期以来一直困扰人类身体健康的一种常见病。现代随着人类生活方式的 跨越式变化，人类肠道菌群在一定程度上已难以适应现代的生活方式，各种应激、膳食结构 和进食习惯的改变都对脾胃和肠道微生态产生了不良作用，进而影响肠道正常功能。
[0003] 中医认为脾胃为气血化生之源，后天之本。功能上脾主运化，胃主沉降，与消化、吸 收、排泄和代谢过程有关。脾失健运时，则会出现泄泻，故中医学认为，"泄泻之本，无不由于 脾胃"。现代医学研究发现脾虚泄泻往往伴随着肠道菌群的紊乱。脾虚时消化吸收障碍、出 现纳差、便溏、消瘦等，使机体各脏器间的平衡遭到破坏，这势必会导致肠道菌群的失调，而 菌群失调反过来又可加重脾虚，两者互为因果。一方面脾虚腹泻时，肠道功能紊乱，肠蠕动 加快，大便次数增多，有益的厌氧菌被排出，使得肠道菌群失调；另一方面，脾虚时机体抵抗 力下降，外部有害菌极易侵入和繁殖，加重菌群失调，由此形成恶性循环，加重腹泻、腹胀。
[0004] 抗生素相关性腹泻(antibiotic-associated diarrhea，AAD)是指临床使用抗生 素治疗感染性疾病后导致肠道菌群失调而引起的最常见的医源性腹泻。抗生素自20世纪40 年代问世以来，显著减少了细菌性感染的病死率和并发症，对人类的健康和发展发挥了巨 大的作用。但是现如今，抗生素的普及和滥用带来了很多副作用。抗生素类药物在杀死体内 有害菌的同时，也会杀死体内的有益菌，肠道的微生态平衡被打破，导致菌群失调，引起腹 泻。
[0005] 目前治疗腹泻的药物多为西药，副作用明显且效果有限，往往治标却不能治本。故 而，进一步研发能够改善和/或预防腹泻、且能够调节肠道菌群的产品具有非常重要的意 义。
【发明内容】
[0006] 有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种组合物及其在制备改善肠道功 能的产品中的应用;本发明提供的组合物能够有效预防和/或改善腹泻，且具有良好的调节 肠道菌群的作用。
[0007] 本发明提供的组合物包括:益生菌、益生元、山楂和山药。
[0008] 益生菌是一类对宿主有益的活性微生物，是定植于人体肠道、生殖系统内，能产生 确切健康功效从而改善宿主微生态平衡、发挥有益作用的活性有益微生物的总称。本发明 中，益生菌选自乳酸杆菌和双歧杆菌。
[0009] 其中，乳酸杆菌是一群杆状或球状的革兰氏阳性菌，能发酵糖产生大量乳酸的细 菌。乳酸杆菌存在于人体肠道之中能够作用于肠道的菌群，且可以减少肠道中有毒物质的 产生，使肠道保持一个更加稳定的环境，同时还具有调节免疫的作用。
[0010] 双歧杆菌是革兰氏阳性、无芽孢、厌氧、多形的杆菌，为结肠微生物丛的主要微生 物驻留细菌。双歧杆菌长期以来被认为是安全且对人体有益的微生物，其代谢产物乙酸和 乳酸，有调节肠道功能的作用。不仅如此，双歧杆菌还能够刺激特异性免疫能力，提高机体 的免疫力，还可以改善腹泻症状。
[0011] 本发明中，乳酸杆菌与双歧杆菌的质量比为(1.0~20.0):(1.0~20.0)。
[0012] 其中，乳酸杆菌的质量分数为1.0%~20.0%;双歧杆菌的质量分数为1.0%~ 20.0%〇
[0013]本发明的实施例中，乳酸杆菌与双歧杆菌的质量比为(2.0~20.0):(2.0~20.0)。 [0014]其中，乳酸杆菌的质量分数为2.0%~20.0%;双歧杆菌的质量分数为2.0%~ 20.0%〇
[0015] 一些实施例中，乳酸杆菌与双歧杆菌的质量比为20.0:3.0。
[0016]在此实施例中，乳酸杆菌的质量分数为20.0%;双歧杆菌的质量分数为3.0%。
[0017] -些实施例中，乳酸杆菌与双歧杆菌的质量比为10.0:5.0。
[0018] 在此实施例中，乳酸杆菌的质量分数为10.0%;双歧杆菌的质量分数为5.0%。
[0019] 一些实施例中，乳酸杆菌与双歧杆菌的质量比为7.0:12.0。
[0020] 在此实施例中，乳酸杆菌的质量分数为7.0%;双歧杆菌的质量分数为12.0%。
[0021 ] -些实施例中，乳酸杆菌与双歧杆菌的质量比为2.0:20.0。
[0022]在此实施例中，乳酸杆菌的质量分数为2.0%;双歧杆菌的质量分数为20.0%。
[0023] -些实施例中，乳酸杆菌与双歧杆菌的质量比为2.0:2.0。
[0024] 在此实施例中，乳酸杆菌的质量分数为2.0%;双歧杆菌的质量分数为2.0%。
[0025]本发明提供的组合物中所述益生菌的添加量为IO6CFlVg~1012CFU/g。
[0026] 本发明采用的乳酸杆菌中菌的密度为不少于100亿CFU/g。
[0027] 本发明采用的双歧杆菌中菌的密度为不少于100亿CFU/g。
[0028] 益生元指的是不能被宿主消化吸收，但是能够选择性地促进宿主肠道内原有的一 种或几种有益细菌(益生菌）的生长繁殖，抑制有害细菌生长，从而达到调整肠道菌群，促进 机体健康作用的食品组分。
[0029] 本发明中，益生元的质量分数为30.0%~96.0%。
[0030] 本发明的实施例中，益生元的质量分数为47.0%~90.0%。
[0031] 一些实施例中，益生元的质量分数为47.0%。
[0032] 一些实施例中，益生元的质量分数为65.0%。
[0033] 一些实施例中，益生元的质量分数为48.0%。
[0034] 一些实施例中，益生元的质量分数为50.0%。
[0035] 一些实施例中，益生元的质量分数为90.0%。
[0036] 本发明中，益生菌与益生元的质量比为(2.0~40.0):(30.0~96.0)。
[0037] 本发明的实施例中，益生菌与益生元的质量比为(4.0~25.0):(47.0~90.0)。 [0038] 一些实施例中，益生菌与益生元的质量比为23.0:47.0。
[0039]在此实施例中，益生菌的质量分数为23.0% ;益生元的质量分数为47.0%。
[0040] -些实施例中，益生菌与益生元的质量比为15.0:65.0。
[0041 ]在此实施例中，益生菌的质量分数为15.0% ;益生元的质量分数为65.0%。
[0042] 一些实施例中，益生菌与益生元的质量比为19.0:48.0。
[0043]在此实施例中，益生菌的质量分数为19.0% ;益生元的质量分数为48.0%。
[0044] -些实施例中，益生菌与益生元的质量比为22.0:50。
[0045] 在此实施例中，益生菌的质量分数为22.0% ;益生元的质量分数为50.0%。
[0046] 一些实施例中，益生菌与益生元的质量比为4.0:90.0。
[0047]在此实施例中，益生菌的质量分数为4.0% ;益生元的质量分数为90.0%。
[0048]本发明中，益生元为菊粉。
[0049] 菊粉，源自于菊苣根的天然成分，是一种天然低聚糖果糖，以能量的形式存在于植 物中。菊粉几乎不被胃酸所水解和消化，完整的菊粉到达结肠前全部未破坏，而在结肠中被 有益菌发酵，却不能被大多数腐败细菌利用，从而使肠道中的益生菌增殖处于优势条件，保 持肠道的健康，预防腹泻等作用。
[0050] 山药和山楂具有健运脾胃的功效。山药，甘、平。补脾养胃，生津益肺，可用于脾虚 食少，泄泻便溏；山楂，酸、甘，微温。有消食健胃，行气散瘀，泻痢腹痛之功，可用于肉食积 滞，泻痢不爽。所述山楂粉为山楂鲜果经干燥、粉碎后制得，粒径40目；所述山药粉为山药根 茎干燥粉碎后制得，粒径为40目。
[0051 ] 本发明中，山楂与山药的质量比为（1.0~30.0):(1.0~30.0)。
[0052] 山楂的质量分数为1.0%~30.0% ;山药的质量分数为1.0%~30.0%。
[0053] 本发明的实施例中，山楂与山药的质量比为(3.0~25.0):(3.0~25.0)。
[0054] 山楂的质量分数为3.0%~25.0% ;山药的质量分数为3.0%~25.0%。
[0055] 一些实施例中，山楂与山药的质量比为25:5.0。
[0056]在此实施例中，山楂的质量分数为25% ;山药的质量分数为5.0%。
[0057] 一些实施例中，山楂与山药的质量比为5.0:15。
[0058]在此实施例中，山楂的质量分数为5.0%;山药的质量分数为15%。
[0059] 一些实施例中，山楂与山药的质量比为8.0:25。
[0060]在此实施例中，山楂的质量分数为8.0% ;山药的质量分数为25%。
[0061 ] 一些实施例中，山楂与山药的质量比为3:25.0。
[0062]在此实施例中，山楂的质量分数为3% ;山药的质量分数为25.0%。
[0063] 一些实施例中，山楂与山药的质量比为3.0:3.0。
[0064]在此实施例中，山楂的质量分数为3.0% ;山药的质量分数为3.0%。
[0065] 本发明将益生菌、益生元、山楂和山药进行合理复配，各组分协同作用，从而使得 所得组合物具有良好的防治腹泻、调节肠道菌群的作用。其效果显著优于(P〈〇.05)对比例 (对比例1:仅给予山楂和山药，对比例2:仅给予益生元和益生菌）。
[0066] 本发明中，益生菌、益生元、山楂和山药的质量比为（2.0~40.0):(30.0~96.0): (1.0~30.0):(1.0~30.0)。
[0067] 本发明的实施例中，益生菌、益生元、山楂和山药的质量比为(4.0~25.0):(47.0 ~90.0):(3.0~25.0):(3.0~25.0)。
[0068] 一些实施例中，益生菌、益生元、山楂和山药的质量比为23.0:47.0:25.0:5.0。 [0069]在此实施例中，益生菌的质量分数为23.0%;益生元的质量分数为47.0%;山楂的 质量分数为25.0% ;山药的质量分数为5.0%。
[0070] -些实施例中，益生菌、益生元、山楂和山药的质量比为15.0:65.0:5.0:15.0。
[0071] 在此实施例中，益生菌的质量分数为15.0%;益生元的质量分数为65.0%;山楂的 质量分数为5.0% ;山药的质量分数为15.0%。
[0072] 一些实施例中，益生菌、益生元、山楂和山药的质量比为19.0:48.0:8.0:25.0。 [0073]在此实施例中，益生菌的质量分数为19.0%;益生元的质量分数为48.0%;山楂的 质量分数为8.0% ;山药的质量分数为25.0%。
[0074] 一些实施例中，益生菌、益生元、山楂和山药的质量比为22.0:50.0:3.0:25.0。 [0075]在此实施例中，益生菌的质量分数为22.0%;益生元的质量分数为50.0%;山楂的 质量分数为3.0% ;山药的质量分数为25.0%。
[0076] 一些实施例中，益生菌、益生元、山楂和山药的质量比为4.0:90.0:3.0:3.0。
[0077]在此实施例中，益生菌的质量分数为4.0% ;益生元的质量分数为90.0% ;山楂的 质量分数为3.0%;山药的质量分数为3.0%。
[0078] 中医认为脾主运化，胃主沉降，脾胃与消化、吸收、排泄和代谢过程有关。脾失健运 时，则会出现泄泻，故中医学认为，"泄泻之本，无不由于脾胃"。现代医学研究发现脾虚泄泻 往往伴随着肠道菌群的紊乱。抗生素的普及和滥用带来了很多副作用。抗生素类药物在杀 死体内有害菌的同时，也会杀死体内的有益菌，肠道的微生态平衡被打破，导致菌群失调， 引起腹泻。本发明提供的组合物中不仅添加了具有健运脾胃的中草药山楂和山药，同时添 加了具有调节肠道菌群的益生菌和益生元，通过中药、益生菌和益生元三者的合理搭配、协 同作用达到改善和预防腹泻、调节肠道菌群的效果。
[0079] 本发明提供的组合物在制备防治腹泻的产品中的应用。
[0080] 本发明组合物防治的腹泻为抗生素相关性腹泻和/或脾虚腹泻。
[0081 ]实验表明，以SD大鼠为实验对象，以大黄造脾虚腹泻模型，造模过程中出现倦怠扎 堆、懒动、毛色晦暗、粪便稀溏等表现，造模结束后10天，模型对照组上述症状有所减轻，大 鼠粪便性状趋于正常，而实施例1~7的动物活动正常，大便性状正常，饮食体重与正常比较 无明显变化。
[0082]以BALB/c小鼠为实验对象，以氨苄青霉素造抗生素相关性腹泻模型，腹泻模型对 照组的稀便级、腹泻指数与正常对照组比较差异性著(P<〇.05)。与模型对照组相比，对比 例1~2和实施例1、实施例4、实施例5给药后的稀便级、腹泻指数均有不同程度的下降，并且 具有显著差异。结果表明，本发明提供的组合物具有协同增效作用，可改善抗生素诱导腹泻 的症状。
[0083]本发明中，本发明提供的组合物用于防治腹泻的剂量为0.33g/kg/d。
[0084] 即剂量为每日每千克动物体重给予0.33g本发明提供的组合物，所述动物为小鼠 或大鼠。
[0085] 本发明还提供了一种防治腹泻的产品，其中包括本发明提供的组合物。
[0086] 所述防治腹泻的产品为保健品，食品或药物。
[0087] 所述保健品中还包括保健品中可接受的辅料。
[0088] 所述药物中还包括药学上可接受的辅料。
[0089] 所述食品中还包括食品中可接受的配料。
[0090] 所述保健品或药品的剂型为口服制剂，优选为片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、汤剂、 膏剂、露剂、口服液剂、滴丸剂或糖浆剂。
[0091] 本发明提供的组合物在制备调节肠道菌群的产品中的应用。
[0092] 本发明提供的组合物能够调节肠道菌群为调节服用抗生素导致的肠道菌群失衡 和/或调节脾虚导致的肠道菌群失衡。
[0093]本发明中，本发明提供的组合物用于调节肠道菌群的剂量为0.33g/kg/d。
[0094] 即剂量为每日每千克动物体重给予0.33g本发明提供的组合物。
[0095] 以SD大鼠为实验对象，以大黄造脾虚腹泻模型，止泻实验后大鼠粪便细菌培养结 果显示:与正常对照组比较，脾虚模型大鼠粪便中乳酸杆菌和双歧杆菌均明显减少，产气荚 膜梭菌数量明显增高;仅给予山楂粉和山药粉的对照组可显著提高模型大鼠粪便中乳酸杆 菌数量，但对其他菌无明显影响；仅给予益生菌和益生元的对比例2可显著提高模型大鼠粪 便中乳酸杆菌和双歧杆菌数量，但对其他菌无明显影响；组合样品组可显著增高模型大鼠 粪便中乳酸杆菌和双歧杆菌数量，且其效果显著优于对比例2。结果表明，本发明提供的益 生菌组合物具有协同增效作用，可改善脾虚泄泻的症状，有效调节肠道菌群平衡。
[0096]以BALB/c小鼠为实验对象，以氨苄青霉素造抗生素相关性腹泻模型，止泻试验后， 小鼠粪便细菌培养结果显示：与正常对照组比较，抗生素模型小鼠粪便中乳酸杆菌和双歧 杆菌均明显减少，肠杆菌、肠球菌、产气荚膜梭菌数量明显增高;对比例1可显著提高模型小 鼠粪便中乳酸杆菌和双歧杆菌数量，显著降低肠球菌和产气荚膜梭菌的数量，对其肠杆菌 无明显影响;对比例2可显著提高模型小鼠粪便中乳酸杆菌和双歧杆菌数量，显著降低肠杆 菌、肠球菌和产气荚膜梭菌的数量;实施例1、实施例4、实施例5可显著增高模型小鼠粪便中 乳酸杆菌和双歧杆菌数量，显著降低肠杆菌、肠球菌和产气荚膜梭菌的数量。结果表明，本 发明提供的益生菌组合物具有协同增效作用，可改善抗生素诱导的腹泻症状，有效调节肠 道菌群平衡。
[0097] 本发明还提供了一种调节肠道菌群的产品，其中包括本发明提供的组合物。
[0098] 所述调节肠道菌群的产品为保健品，食品或药物。
[0099] 所述保健品中还包括保健品中可接受的辅料。
[0100] 所述药物中还包括药学上可接受的辅料。
[0101] 所述食品中还包括食品中可接受的配料。
[0102] 所述保健品或药品的剂型为口服制剂，优选为片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、汤剂、 膏剂、露剂、口服液剂、滴丸剂或糖浆剂。
[0103] 本发明提供了一种组合物及其在制备改善肠道功能的产品中的应用，本发明将益 生菌、益生元、山楂和山药进行合理复配，各组分协同作用，从而使得所得组合物具有良好 的防治腹泻、调节肠道菌群的作用。其效果显著优于(P〈〇.05)对比例。
【具体实施方式】
[0104] 本发明提供了一种组合物及其在制备改善肠道功能的产品中的应用，本领域技术 人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改 动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应 用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
【发明内容】
、精神和范围内 对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
[0105] 本发明采用的材料、仪器皆为普通市售品，皆可于市场购得。
[0106] 所述山楂粉为山楂鲜果经干燥、粉碎后制得，粒径为40目；所述山药粉为山药根茎 干燥粉碎后制得，粒径为40目。
[0107] 本发明采用的乳酸杆菌中菌的密度为不少于100亿CFU/g。
[0108] 本发明采用的双歧杆菌中菌的密度为不少于100亿CFU/g。
[0109] 下面结合实施例，进一步阐述本发明：
[0110] 实施例1
[0111] 乳酸杆菌20.0 g、双歧杆菌3. Og、山楂粉25. Og、山药粉5. Og、菊粉47. Og。
[0112] 将上述组分粉碎后，混匀，制得组合物。
[0113] 实施例2
[0114]乳酸杆菌10.Og、双歧杆菌5.Og、山楂粉5.Og、山药15.Og、菊粉65.Og。
[0115] 将上述组分粉碎后，混匀，制得组合物。
[0116] 实施例3
[0117] 乳酸杆菌7 · Og、双歧杆菌12 · Og、山楂粉8 · Og、山药粉25 · Og、菊粉48 · Og。
[0118] 将上述组分粉碎后，混匀，制得组合物。
[0119] 实施例4
[0120]乳酸杆菌2. Og、双歧杆菌20.0 g、山楂粉3. Og、山药粉25g、菊粉50.0 g。
[0121 ] 将上述组分粉碎后，混匀，制得组合物。
[0122] 实施例5
[0123] 乳酸杆菌2.0g、双歧杆菌2.0g、山楂粉3.0g、山药粉3.0g、菊粉90.0g。
[0124] 将上述组分粉碎后，混匀，制得组合物。
[0125] 对比例1
[0126] 山楂粉50g、山药粉50g。粉碎后，混匀，制得组合物。
[0127] 对比例2
[0128] 乳酸杆菌2. Og、双歧杆菌2. Og、菊粉96g。粉碎后，混匀，制得组合物。
[0129] 实施例8
[0130] 研究本发明组合物制得的组合物具有改善和预防腹泻的作用。
[0131] 1、实验材料
[0132] 1.1实验样品与制剂
[0133] 以实施例1、实施例4、实施例5和对比例1~2制得的组合物为实验样品，对比例和 实施例是在相同的给药剂量下进行对比实验。实验以未经处理的正常鼠为正常对照，以造 模后不给于实验样品的鼠为模型对照，具体如表1:
[0134] 表1预防和改善脾虚泄泻给药剂量
[0136] l. 2实验试剂
[0137] 大黄，3 %过氧化氢，注射用氨苄青霉素，EMB培养基、BDS培养基、TPY琼脂培养基、 TSC培养基、LBS琼脂和肠球菌琼脂。
[0138] 1.3实验动物
[0139] SPF级SD大鼠，体重180-220g，雌雄各半；
[0140] SPF级BALB/c小鼠，三周龄，雄性，18g~22g。
[0141] 1.4实验结果统计学处理
[0142] 实验数据用均数土标准差(X土s)表示，采用SPSS 16.0软件进行统计学分析，不同 实验组之间的差异分析采用t检验，P〈0.05为差异有显著性统计学意义，P〈0.01为差异有极 显著性统计学意义。
[0143] 2、实验方法
[0144] 2.1选取健康SD大鼠，随机分组，即正常对照组、模型对照组、对比例1、对比例2、实 施例1、实施例4、实施例5组，共计7组，每组10只。
[0145] 除正常对照组外，其他大鼠进行脾虚模型制备:大黄水洗除浮尘，加水煮2次(每次 煮沸后15min)，过滤，合并两次滤液，水浴浓缩至生药浓度为lg/ml，4°C冰箱储存备用。动物 正常喂养3d，灌胃给予大黄水煎液(lg/ml )，给药体积Iml/100g体重，每天两次，连续10天。
[0146] 脾虚造模结束后，按表1给药，灌胃体积lml/lOOg体重，1次/天，连续IOd;正常对照 组和模型对照组给予等量蒸馏水。大黄脾虚大鼠造模过程中出现倦怠扎堆、懒动、毛色晦 暗、粪便稀溏等表现，造模结束后10天，上述症状有所减轻，大鼠粪便性状趋于正常，实施例 1、实施例4、实施例5动物活动正常，大便性状正常，饮食体重与正常比较无明显变化。
[0147] 2.2BALB/C小鼠适应性饲养1周后，随机分组，即正常对照组、模型对照组、对比例 1、对比例2、实施例1、实施例4、实施例5组，共计7组，每组15只。
[0148] 小鼠进行抗生素相关性腹泻模型的制备:小鼠每天以22.4g/kg(小鼠重量)剂量的 氨苄青霉素连续灌胃小鼠5天，每天两次，每次剂量为11.2g/kg;正常对照组5只小鼠每天同 时间灌胃同体积的生理盐水作为参照。造摸成功的判断标准为:毛发欠光泽，采食量减少， 小鼠蜷缩，活动较少，反应较迟钝，动作比较迟缓，屁股有明显的污迹。
[0149] 第6d观察各组小鼠并称量各只小鼠的造模后体重，剔除造模不理想的小鼠，剔除 后各组的小鼠均为10只。第6d各组小鼠进行给药前稀便点数实验:禁食12h，每组每只小鼠 分别灌胃氨苄青霉素(〇.3g生药/mL)25mL/kg体重，空白对照组灌胃等量的生理盐水。此后 放入观察笼中单只单笼观察(笼底铺有专用的滤纸），记录灌胃氨苄青霉素药液后每只小鼠 5h内（笼底滤纸根据情况及时更换）的稀便数、干便数、粪便总数并测量各稀便的稀便级和 各小鼠的腹泻指数。干(成形)便与稀(湿)便的判断以滤纸有无污迹为标准。
[0150] 表2稀便级别判断标准
[0152] 稀便率计算公式:稀便率=一定时间内所排稀便数/总排便数。
[0153] 腹泻指数计算公式:腹泻指数=稀便率X稀便级。
[0154] 第7d开始，进行对给予对比例和实施例的小鼠进行治疗研究。每天灌胃1次，给药 剂量为0.33mg/kg，连续灌胃治疗14天。腹泻模型对照组和正常对照组皆灌胃等量的生理盐 水。灌胃治疗14天后，第15天进行稀便点数实验，对稀便级、稀便率和腹泻指数进行计算。结 果如表3:
[0155] 表3腹泻小鼠稀便级、腹泻指数
LUID/J 汪：与模型对照组K牧，朴·<υ·〇?3，*朴*<U.Ui，林朴*<〇.UUi
[0158] 由表3知，腹泻模型对照组的稀便级、腹泻指数与正常对照组比较差异性著（Ρ< 0.05)。与模型对照组相比，对比例和实施例的组合物均能够使稀便级、腹泻指数有不同程 度的下降，并且具有显著差异。且，实施例1、实施例4、实施例5的效果显著优于对比例1~2 (ρ〈0.01)。结果表明，本发明提供的组合物具有协同增效作用，可改善抗生素诱导腹泻的症 状。
[0159] 实施例8
[0160] 研究本发明组合物制得的组合物具有改善和预防腹泻的作用。
[0161] 1、实验材料
[0162] 1.1实验样品与制剂
[0163] 以实施例1、实施例4、实施例5和对比例1~2制得的组合物为实验样品，对比例和 实施例是在相同的给药剂量下进行对比实验。实验以未经处理的正常鼠为正常对照，以造 模后不给于实验样品的鼠为模型对照，具体如表4:
[0164] 表4预防和改善脾虚泄泻给药剂量
[0167] h 2实验试剂
[0168] 大黄，3 %过氧化氢，注射用氨苄青霉素，EMB培养基、BDS培养基、TPY琼脂培养基、 TSC培养基、LBS琼脂和肠球菌琼脂。
[0169] 1.3实验动物
[0170] SPF级SD大鼠，体重180-220g，雌雄各半；
[0171 ] SPF级BALB/c小鼠，三周龄，雄性，18g~22g。
[0172] 1.4实验结果统计学处理
[0173]实验数据用均数土标准差(X土s)表示，采用SPSS 16.0软件进行统计学分析，不同 实验组之间的差异分析采用t检验，P〈0.05为差异有显著性统计学意义，P〈0.01为差异有极 显著性统计学意义。
[0174] 2、实验方法
[0175] 2.1选取健康SD大鼠，随机分组，即正常对照组、模型对照组、对比例1、对比例2、实 施例1、实施例4、实施例5组，共计7组，每组10只。
[0176] 除正常对照组外，其他大鼠进行脾虚模型制备:大黄水洗除浮尘，加水煮2次(每次 煮沸后15min)，过滤，合并两次滤液，水浴浓缩至生药浓度为lg/ml，4°C冰箱储存备用。动物 正常喂养3d，灌胃给予大黄水煎液(lg/ml )，给药体积Iml/100g体重，每天两次，连续10天。
[0177] 脾虚造模结束后，按表1给药，灌胃体积lml/lOOg体重，1次/天，连续IOd;正常对照 组和模型对照组给予等量蒸馏水。给药结束后收集各组大鼠新鲜粪便，将所有样品连续10 倍稀释，每个稀释度取样〇.2mL涂布于1^5、1?￥』1?、肠球菌琼脂平板35(：，37°(：，厌氧培4811 后分别对乳酸杆菌、双歧杆菌、肠杆菌、肠球菌、产气荚膜梭菌进行平板计数。
[0178] 结果如表5:
[0179]表5组合物对脾虚大鼠粪便细菌培养的影响(单位:lgCFU/g)
[0181] 正常对照组比较，*p<0 · 05，**p<0 · 01;
[0182] 与模型对照组比较，#p < 0 · 0 5，##p < 0 · 01
[0183] 大鼠粪便细菌培养结果显示(表5):与正常对照组比较，脾虚模型大鼠粪便中乳酸 杆菌和双歧杆菌均明显减少，产气荚膜梭菌数量明显增高;对比例1可显著提高模型大鼠粪 便中乳酸杆菌数量，但对其他菌无明显影响;对比例2可显著提高模型大鼠粪便中乳酸杆菌 和双歧杆菌数量，但对其他菌无明显影响;实施例1、实施例4、实施例5可显著增高模型大鼠 粪便中乳酸杆菌和双歧杆菌数量，但对其他菌无明显影响，且其效果显著优于对比例1~2 (p〈0.01)。结果表明，本发明提供的益生菌组合物具有协同增效作用，可改善脾虚泄泻的症 状，有效调节肠道菌群平衡。
[0184] 2.2BALB/C小鼠适应性饲养1周后，随机分组，即正常对照组、模型对照组、对比例 1、对比例2、实施例1、实施例4、实施例5组，共计7组，每组15只。
[0185] 小鼠进行抗生素相关性腹泻模型的制备:小鼠每天以22.4g/kg(小鼠重量)剂量的 氨苄青霉素连续灌胃小鼠5天，每天两次，每次剂量为11.2g/kg;正常对照组5只小鼠每天同 时间灌胃同体积的生理盐水作为参照。造摸成功的判断标准为:毛发欠光泽，采食量减少， 小鼠蜷缩，活动较少，反应较迟钝，动作比较迟缓，屁股有明显的污迹。
[0186] 第6d观察各组小鼠并称量各只小鼠的造模后体重，剔除造模不理想的小鼠，剔除 后各组的小鼠均为10只。第6d各组小鼠进行给药前稀便点数实验:禁食12h，每组每只小鼠 分别灌胃番泻叶药液(0.3g生药/mL) 25mL/kg体重，空白对照组灌胃等量的生理盐水。
[0187] 第7d开始，进行对给予对比例和实施例的小鼠进行治疗研究。每天灌胃1次，给药 剂量为0.33mg/kg，连续灌胃治疗14天。腹泻模型对照组和正常对照组皆灌胃等量的生理盐 水。灌胃治疗14天后，第15天无菌采取灌胃治疗前后粪便样品，将所有样品连续10倍稀释， 每个稀释度取样〇. 2mL涂布于LBS、TPY、EMB、肠球菌琼脂平板、TSC，37 °C，厌氧培养48h后分 别对乳杆菌、双歧杆菌、肠杆菌、肠球菌、产气荚膜梭菌进行平板计数。
[0188] 结果如表6:
[0189] 表6组合物对抗生素诱导腹泻大鼠粪便细菌培养的影响(单位:lgCFU/g)
[0191] 与正常对照组比较，*p <0 · 05，#p <0 · 01;
[0192] 给药前后自身比较，#ρ<〇·〇5，##ρ<〇·〇1，###ρ<〇·〇〇1
[0193] 小鼠粪便细菌培养结果显示(表6):与正常对照组比较，抗生素模型小鼠粪便中乳 酸杆菌和双歧杆菌均明显减少，肠杆菌、肠球菌、产气荚膜梭菌数量明显增高;对比例1可显 著提高模型小鼠粪便中乳酸杆菌和双歧杆菌数量，显著降低肠球菌和产气荚膜梭菌的数 量，对其肠杆菌无明显影响；对比例2可显著提高模型小鼠粪便中乳酸杆菌和双歧杆菌数 量，显著降低肠杆菌、肠球菌和产气荚膜梭菌的数量;实施例1、实施例4、实施例5可显著增 高模型小鼠粪便中乳酸杆菌和双歧杆菌数量，显著降低肠杆菌、肠球菌和产气荚膜梭菌的 数量，且其效果显著优于对比例1~2(ρ〈0.01)。结果表明，本发明提供的益生菌组合物具有 协同增效作用，可改善抗生素诱导的腹泻症状，有效调节肠道菌群平衡。
[0194] 以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来 说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为 本发明的保护范围。
【主权项】
1. 一种组合物，其特征在于，包括:益生菌、益生元、山楂和山药。2. 根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述益生菌、益生元、山楂和山药的质量 比为（2.0~40.0) :(30.0~96.0) :(1.0~30.0) :(1.0~30.0)。3. 根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述益生菌选自乳酸杆菌和双歧杆菌； 所述益生元为菊粉。4. 根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述乳酸杆菌与双歧杆菌的质量比为 (2.0~20.0):(2.0~20.0)。5. 根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，其中所述益生菌的添加量为106CFU/g~ 1012CFU/g。6. 权利要求1~5任一项所述的组合物在制备防治腹泻的产品中的应用。7. 根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述腹泻为抗生素相关性腹泻和/或脾虚 腹泻。8. -种防治腹泻的产品，其特征在于，包括权利要求1~5任一项所述的组合物。9. 权利要求1~5任一项所述的组合物在制备调节肠道菌群的产品中的应用。10. 根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述调节肠道菌群为调节服用抗生素导 致的肠道菌群失衡和/或调节脾虚导致的肠道菌群失衡。11. 一种调节肠道菌群的产品，其特征在于，包括权利要求1~5任一项所述的组合物。
【文档编号】A61K35/745GK106074975SQ201610580563
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年7月21日 公开号201610580563.1, CN 106074975 A, CN 106074975A, CN 201610580563, CN-A-106074975, CN106074975 A, CN106074975A, CN201610580563, CN201610580563.1
【发明人】金鑫, 葛亚中, 马忠华, 秦垂新
【申请人】无限极（中国）有限公司