Cu纳米材料的制备方法及癌细胞检测方法
【技术领域】
[0001]本发明属于纳米材料制备和生物医学应用领域，尤其涉及一种透明质酸修饰的Cu包覆的镀镍ZnO纳米材料的制备方法和利用该材料检测癌细胞的方法。
【背景技术】
[0002]癌症是威胁人类健康和生命的主要疾病之一，而且发病率也日益上升。目前，大量临床事实证明，癌病变初期的治愈率是相当高的。因此，早期诊断对提高癌症患者的生存率具有重大意义。这迫切需要寻找一种准确、灵敏、操作简单的早期诊断方法。
[0003]目前，癌症检查方式主要有B超、CT、MR1、活检等等。B超利用切面声像图，能从角度、多方位对病灶进行连续显示观察，有助于了解肿瘤的部位，与周围组织器官的关系，对癌症的诊断和治疗有重要帮助，但其适用范围较小。CT，简称电子计算机横断体层摄影，可用于检查全身病灶，可以明确癌病灶侵犯的范围，是否侵犯周围的器官，但CT设备价格昂贵费用较高，过度CT会存在诱发恶性肿瘤、白血病等危险。MRI，简称核磁共振成像术，其对脑深部肿瘤、脑干肿瘤、脊髓肿瘤、纵隔内肿瘤、心脏肿瘤等可以明确诊断，但是装有心脏起搏器、体内有弹片残留、手术留有金属银夹等的患者不能使用。活检分为切除活检和穿刺活检两种方式，切除活检是在手术过程中进行活检，可以决定肿瘤切除范围，帮助检查肿瘤的潜在扩散和实际扩散，确定癌症分期，从而确定后续治疗方案;穿刺活检需要在CT、B超等的引导下，将穿刺针穿入病变部位，取活组织作病理诊断，穿刺活检有导致针道种植、癌肿出血的可能，临床使用时需谨慎。
【发明内容】
[0004]有鉴于此，本发明的目的之一是提供Cu纳米材料的制备方法，通过该方法可获得透明质酸修饰的Cu包覆的镀镍ZnO纳米材料，所述纳米材料兼具磁性纳米材料和Cu纳米材料的优势，具有制备简单、成本低廉、不发生团聚，分散性好，能轻易的与CD44抗体连接起来的优点。
[0005]本发明通过以下技术手段实现上述技术目的:
[0006]本发明的Cu纳米材料的制备方法，包括以下步骤:
[0007]利用直接沉积法制备棒状ZnO;
[0008]将Ni镀在ZnO上，得到镀镍的ZnO。
[0009]用Cu包覆镀镍的ZnO，即得到Cu包覆的镀镍ZnO纳米材料；
[0010]采用透明质酸对Cu包覆的镀镍ZnO纳米擦了进行修饰，其包括以下步骤:将透明质酸与缓冲液置于水浴中搅拌，使透明质酸分散于溶液后再加入Cu包覆的镀镍ZnO，持续搅拌，采用超滤管除去多余的透明质酸，从而得到透明质酸修饰的Cu包覆的镀镍ZnO纳米材料。
[0011]金属Ni是一种具有磁性、制备相对简单、而且生物相容性较好的磁性材料。Cu的化学性质稳定，其纳米级具有生物亲和性及独特的光谱特性，并且Cu的价格较金银价格低廉，以Cu包覆的磁性纳米材料形成纳米复合材料有效克服了磁性纳米材料稳定性差，容易团聚，表面功能基团少等缺点，改善了磁性材料的物理化学性能。ZnO与Cu纳米结合可以提高Cu纳米的生物相容性、抗干扰性、电子传输速度，以及使其表面更容易被修饰。
[0012]透明质酸，又名透明酸或玻尿酸，其特异性受体CD44在多种癌细胞中过度表达，而正常细胞表面的CD44受体则处于一种非活跃的沉默状态，因此可通过透明质酸与其受体CD44的结合作用实现对癌细胞的靶向成像分析或定量分析。
[0013]进一步，所述将Ni镀在ZnO上，其包括以下步骤:将ZnO在二氯化锡和盐酸的溶液中敏化，再放入到二氯化钯和盐酸溶液中活化，活化后的ZnO用去离子水清洗，然后再将ZnO放入到含有硫酸镍、次磷酸钠、氯化铵、柠檬酸钠、丁二酸和乳酸的化学镀池中进行化学镀，最后将镀过镍的ZnO过滤并用去离子水洗涤并烘干，即得到镀镍的ZnO。
[0014]进一步，所述用Cu包覆镀镍的ZnO，其包括以下步骤:将制备的镀镍ZnO移入去离子水中，加入聚乙二醇，在超声条件下分散得到镀镍ZnO的悬浊液;将氧化亚铜粉末移入去离子水中充分溶解，得到氧化亚铜悬浊液;将氧化亚铜悬浊液与镀镍ZnO悬浊液混合，经过静置、过滤、水洗、醇洗后烘干，即得到Cu包覆的镀镍ZnO纳米材料。
[0015]本发明的目的之二是提供Cu纳米材料的癌细胞检测方法，通过该方法检测，只需采集患者的血液，且在极少的样本中就能够识别癌细胞，实现患病初期能够准确、灵敏、无创伤的诊断癌症。
[0016]本发明通过以下技术手段实现上述技术目的:
[0017]本发明的一种癌细胞检测方法，包括以下步骤:
[0018]a)荧光素标记，将所述的Cu纳米材料溶解在去离子水中，加入异硫氰酸荧光素进行标记；
[0019]b)癌细胞的培养，将传代后达到80%?90%汇合的癌细胞，接种于孔板，孵化24h后，用碱性磷酸盐溶液洗涤，加入异硫氰酸荧光素标记的透明质酸修饰的Cu纳米材料溶液，并采用多聚甲醛溶液固定后，用碱性磷酸盐溶液洗涤，加入等量的2%亚铁氰化钾溶液和2 %氯化氢混合液后静置，避光孵化18?30min，洗去染色液，核固红复染，去除上清液，用碱性磷酸盐溶液再次洗涤;采用50%、75%、85%、95%和100%乙醇梯度脱水各1次，二甲苯透明2次，每次10?15min;中性树胶封片，置于激光共聚焦显微镜下观察，肿瘤细胞的细胞膜及细胞质有阳性荧光染色，可根据染色数量定量检测出癌细胞的数量。
[°02°] 进一步，所述透明质酸修饰的Cu纳米材料的粒径范围为40-60nm，透明质酸在Cu包覆的镀Ni的ZnO纳米材料表面的载量为0.4?0.5mmol/g。
[0021]进一步，所述癌细胞为肺癌细胞、肝癌细胞、乳腺癌细胞或胃癌细胞中的一种。
[0022]本发明的有益效果:(l)Cu纳米材料兼具磁性纳米材料和Cu纳米材料的优势，具有制备简单、成本低廉、不发生团聚，分散性好等优势；(2)用透明质酸对Cu纳米材料进行表面修饰，不仅可以提高其稳定性，而且使其表面功能化，能更轻易的与CD44抗体连接起来；(3)利用透明质酸修饰的Cu纳米材料检测癌细胞的方法只需采集患者的血液进行体外检测，且在极少的样本中就能够识别癌细胞，实现患病初期能够准确、灵敏、无创伤的诊断癌症。
【具体实施方式】
[0023]以下将通过具体实施例对本发明的技术方案进行详细描述:
[0024]实施例lCu纳米材料的制备方法
[0025]本发明