杂环苄基氨基衍生物，它们的制备以及作为药剂的应用的制作方法

专利名称：：杂环苄基氨基衍生物，它们的制备以及作为药剂的应用的制作方法杂环苄基氨基衍生物，它们的制备以及作为药剂的应用本发明涉及抑制蛋白激酶活性的杂环苄基氨基衍生物。蛋白激酶是催化磷酸基团从ATP转移到氨基酸残基的酶，所述氨基酸残基如蛋白质上的酪氨酸、丝氨酸、苏氨酸或组氨酸。这些蛋白激酶的调节对于控制广泛多样的细胞事件是必需的，所述细胞事件包括增殖和迁移。
背景技术：
：已知酪氨酸激酶的不适当的活化涉及各种各样的疾病状态，包括炎性、免疫学、CNS病症，或肿瘤病症，或骨病。参见例如Susva，M.,等，TrendsPharmacol.Sci.21(2000)489-495;Biscardi,J.S.,等，Adv.CancerRes.76(1999)61-119。酪氨酸激酶是一类蛋白激酶。Src家族代表胞质蛋白酪氨酸激酶的主要家族，由至少8个成员组成(Src，Fyn,Lyn,Yes,Lck,Fgr,Hck和Blk)，它们参与各种各样的信号转导途径(Schwartzberg,P.L.,Oncogene17(1998)1463-1468)。该酪氨酸激酶家族的原型成员是Src，它参与许多细胞类型的增殖和迁移反应(Sawyer,T.，等，ExpertOpin.Investig.Drugs10(2001)1327-1344)。已经显示Src活性在不同癌症中升高，所述癌症例如乳腺、结肠(>90%)、胰腺(>90%)和肝脏(>90%)肿瘤。高度增加的Src活性还与转移瘤(>90%)和差的预后相关。反义Src信使在裸鼠中阻止结肠肿瘤细胞的生长(Staley，C.A.,CellGrowthDiffer.8(1997)269-274)，提示Src抑制剂可以延缓肿瘤生长。另外，除了它在细胞增殖中的作用，Src还在包括缺氧应激的应激反应途径中起作用。具有表达反义Src信使的结肠肿瘤细胞的裸鼠具有减少的血管生成(Ellis,L.M.,等，J.Biol.Chem.273(1998)1052-1057)，这提示Src抑制剂可以抗血管生成以及抗增殖。Src破坏与细胞-细胞相互作用有关的E-钙粘着蛋白(Avizienyte，E.,等,Nat.CellBiol.4(2002)632-638)。低分子量的Src抑制剂防止这种破坏，由此减少癌细胞迁移(Nam,J.S.，等，Clin.CancerRes.8(2002)2430-2436)。Src抑制剂可以防止由VEGF-介导的血管渗透性增加导致的二次损伤，如在卒中之后所看到的(Eliceiri，B.R,等，Mol.Cell.4(1999)915-924;Paul,R.，等，Nat.Med.7(2001)222-227)。Src的阻断以与其防止VEGF-介导的VP/水肿相同的动力学防止了包括Flk、VE-钙粘着蛋白、和(3-连环蛋白的复合物的解离，解释了在VEGF-介导的渗透性中需要Src并且为Src抑制作为急性心肌梗死患者的治疗选择提供了基础(Weis，S.,等，J.Clin.Invest,113(2004)885-894)。Src还在骨质疏松症中发挥作用。被遗传修饰而缺少Src生成的小鼠被发现显示骨硬化症，不能再吸收骨(Soriano,P.,等，Cell64(1991)693-702;Boyce,B.F.，等，J.Clin.Invest.90(1992)1622-1627)。该缺陷的特征在于缺少破骨细胞活性。由于破骨细胞通常表达高水平的Src，Src激酶活性的抑制可能在治疗骨质疏松症中有效(Missbach,M.，等，Bone24(1999)437-449)。在现有技术中广泛已知蛋白激酶的低分子量抑制剂。对于src抑制，这些抑制剂是基于例如噻吩并-吡啶衍生物(US2004/0242883);吡啶并-嘧啶衍生物(WO04/085436);吡啶并-嘧啶酮衍生物(WO04/041823);嘧啶衍生物(WO03/004492和WO01/00213);喹唑啉衍生物(WO01/94341和WO02/016352);异噁唑衍生物(WO02/083668)和卩比唑衍生物(WO02/092573)。从WO04/024897已知，一些苯基-氮杂-苯并咪唑是IgE-介导的免疫应答的抑制剂和细胞因子以及白细胞的抑制物，具有抗增殖效果。并且从WO03/035065中已知，一些苯并咪唑-吡唑和』引唑是激酶抑制剂，特别是作为针对Kdr、Syk和Itk酪氨酸激酶的抑制剂。WO2005/063747描述了吡咯并[2,3-b]吡啶衍生物作为激酶抑制剂，用于治疗激酶相关疾病，如癌症，病毒感染，早老性痴呆等。发明概述本发明涉及通式I的杂环苄基氨基衍生物，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>式I其中，R1和R2独立地表示氢，卣素，烷基，烷氧基，烷氧基垸氧基或酰氨基；R3是氢或垸基；R4是氢，卤素，烷氧基或垸基；A是二CH-或二N-;及其所有药用盐。根据本发明的化合物显示作为蛋白激酶抑制剂的活性，特别是作为Src家族酪氨酸激酶的抑制剂，并且因此可以有效用于治疗由所述酪氨酸激酶介导的疾病。己知Src家族酪氨酸激酶涉及各种各样的疾病状态。本发明的化合物可以用作预防和治疗例如以下病症的活性剂移植排斥，炎性肠综合症，类风湿性关节炎，银屑癣，再狭窄，过敏性哮喘，早老性痴呆，帕金森病，卒中，骨质疏松症，良性增生和癌症，包括结肠癌、乳腺癌、肺癌、前列腺癌和胰腺癌以及白血病。本发明的目的是式I的化合物和药用盐和它们的对映体形式，上述化合物的制备，含有它们的药物组合物或药物和它们的制备，以及上述化合物在控制或预防疾病或在制备相应的药物组合物中的应用，所述疾病特别是以上所述的疾病和病症。发明详述本文使用的术语"烷基"表示饱和的、直链或支链的含有l-6个碳原子、优选1-4个碳原子且更优选1或2个碳原子的烃基，如甲基，乙基，正丙基，异丙基，正-丁基,2-丁基，叔-丁基。本文使用的术语"烷氧基"是指经由氧原子连接的如上定义的烷基基团。实例有例如甲氧基，乙氧基，异丙氧基等。本文使用的术语"烷氧基烷氧基"是指被垸氧基取代的以上定义的垸氧基。实例有例如甲氧基-甲氧基，乙氧基-甲氧基，2-甲氧基-乙氧基，2-乙氧基-乙氧基,4-甲氧基-丁氧基，2-甲氧基-丁氧基，2-乙氧基-丙氧基，3-丙氧基-丁氧基等，优选2-乙氧基-乙氧基。本文使用的术语"酰氨基"是指经由-C(O)-NH-基团连接的如上定义的垸基基团。实例有例如乙酰氨基，丙酰氨基，异丁酰氨基，正丁酰氨基，3-甲基-丁酰氨基，戊酰氨基等。本文使用的术语"卤素"是指氟，氯，溴和碘，优选氟，氯或溴并且更优选氟和氯。本文使用的术语"治疗有效量"的化合物是指化合物的量有效预防、缓解或改善疾病的症状或延长被治疗受试者的存活时间。确定治疗有效量属于本领域技术范围内。治疗有效量或剂量的根据本发明的化合物可以在宽范围内变化并且可以以本领域已知的方法测定。该剂量可以根据每个具体病例的个体要求来调整，所述要求包括施用的特定化合物、给药途径、被治疗的病症、以及被治疗的患者。通常，在口服或肠胃外给药于体重约70Kg的成人的情形中，约10mg至约10,000mg、优选约200mg至约1,000mg的日剂量应当是适当的，但是当需要时上限可能被超出。所述日剂量可以作为单一剂量或以分剂量施用，或者用于肠胃外给药，它可以作为连续输注液提供。如本文使用，"药用载体"意欲包括任何和所有与药物给药相容的材料，包括溶剂，分散介质，包衣材料，抗细菌和抗真菌剂，等渗和吸收延迟剂，和其他与药物给药相容的材料和化合物。除了与活性化合物不相容，考虑将任何常规介质或试剂用于本发明的组合物中。辅助的活性化合物也可以被掺入组合物中。优选式I中R4的位置是-(3皿3-皿-键的邻位。本发明的一个实施方案是根据式I的化合物，其中R1是氢，烷氧基垸氧基或酰氨基；R2是氢；和R4是氢或烷基。本发明的另一个实施方案是根据式I的化合物，其中A是；N-。本发明的另一个实施方案是根据式I的化合物，其中R1是氢，烷氧基烷氧基或酰氨基；R2是氢；R4是氢或烷基；和A是N-。本发明的另一个实施方案是根据式I的化合物，其中R1和R2独立地表示氢或烷基；R3是氢或烷基；R4是氢或烷基；和A是N-o该化合物例如是(1-苯基-乙基)-(2-苯基-3乐咪唑并[4，5-6]吡啶-6-基)-胺。本发明的另一个实施方案是根据式I的化合物，其中R1和R2是氢；R是綜基;R4是氢；和A是N-。本发明的另一个实施方案是根据式I的化合物，其中A是《H-。本发明的另一个实施方案是根据式I的化合物，其中R1是氢，垸氧基垸氧基或酰氨基；R2是氢；R4是氢或垸基；和a是-ch-。本发明的另一个实施方案是根据式I的化合物，其中R1是氢，烷氧基垸氧基或酰氨基；R2是氢；R3是氢；R4是氢或烷基；和a是-ch-。本发明的另一个实施方案是根据式I的化合物，其中R1是氢或烷氧基烷氧基；R2是氢；R3是氢；R4是氢或垸基；和a是k:h-。该化合物例如可以选自由下列各项组成的组(2-甲基-苄基)-(2-苯基-1//-吡咯并[2,3-6]吡啶-5-基)-胺；苄基-{2-[3-(2-甲氧基-乙氧基)-苯基]-1//-吡咯并[2，3-6]吡啶-5-基}-胺；{2-[3-(2-甲氧基-乙氧基)-苯基]-1//-吡咯并[2,3-6]吡啶-5-基}-(2-甲基-苄基)-胺；和苄基-(2-苯基-1//-吡咯并[2，3-6]吡啶-5-基)-胺。本发明的另一个实施方案是根据式I的化合物，其中R'是酰氨基；R2是氢；R3是氢；R4是氢或垸基；和a是《h-。该化合物例如可以选自由下列各项组成的组A43-(5-苄基氨基-lH-吡咯并[2,3-W吡啶-2-基)-苯基]-乙酰胺；iV-(3-[5-(2-甲基-苄基氨基)-l/f-吡咯并[2,3-6]吡啶-2-基]-苯基L乙酰胺;胺。AL[4-(5-节基氨基-li7-吡咯并[2，3-6]吡啶-2-基)-苯基]-乙酰胺；禾口,{4-[5-(2-甲基-节基氨基)-1//-吡咯并[2,3-6]吡啶-2-基]-苯基}-乙酰本发明还有另一个实施方案是制备式I化合物的方法，其中(a)式VI的化合物，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>式VI,其中A,R1和R2具有以上在式I中给出的含义，与式VII的化合物反应，式VII，其中R和W具有以上关于式I给出的含义，并且Hal是溴或碘，以获得各自的式I化合物，(b)从反应混合物中分离所述式I的化合物，和(c)如果需要，转化为药用盐。本发明还有另一个实施方案是制备其中R3是氢的式I化合物的方法，射(a)式VI的化合物，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>式VI，其中A,R'和Fe具有以上关于式I给出的含义，与式viii的化合物反应，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula>式viii,其中r"具有以上关于式i给出的含义，以获得其中r3是氢的各自的式i化合物；Cb)从反应混合物中分离所述式i的化合物，和(c)如果需要，转化为药用盐。通式i的衍生物或其药用盐，可以通过本领域技术人员已知适用于制备化学相关的化合物的任何方法来制备。这些方法，当用于制备式i的衍生物或其药用盐时，作为本发明的另一个特征而提供，并且通过以下反应路线1或反应路线2的代表性实例来举例说明，其中除非另外指出，rj,r2,r3和r"具有上文关于式i给出的含义，并且在反应路线1中a是二n-，在反应路线2中a是k:h-。必要的原料可以通过有机化学的标准方法获得。这些原料的制备方法描述于后附的实施例中。备选地，可以采用与属于有机化学家普通技术范畴内的方法类似的方法获得必要的原料。反应路线l式i化合物的制备根据式i中"a"的性质不同而不同。其中"a"是:n-的本发明化合物可以按照反应路线1进行制备，并命名为i-a。步骤la<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>反应路线l在反应路线1中，R1，R2，R3和R"具有以上关于式I给出的含义，Y是溴(对于经由步骤2a的路线)或硝基(对于经由步骤2b的路线)，并且Hal是溴或碘。步骤la:式III的芳族醛与式II的2,3-二氨基-吡啶衍生物的缩合可以在60至200°C的升高的温度下、在适当的溶剂中、任选地在氧化剂的存在下进行，以给出式V-A(其中A是二N-)的化合物，所述溶剂如乙腈、硝基苯、二甲基甲酰胺(DMF)、二甲亚砜(DMSO)、二甲苯或甲氧基乙醇，所述氧化剂如氧或铁(III)盐或硫，或2,3-二氯-5，6-二氰基-l,4-苯醌(DDQ)。步骤lb:式IV的芳族羧酸或其适当的衍生物与式II的2，3-二氨基-吡啶衍生物的縮合可以在100-220°C范围内的温度下使用縮合试剂如多磷酸、P0C13、或P40u)，任选地与甲磺酸混合来完成，以获得式V-A(其中A是N-)的化合物。步骤2a:在其中Y是溴的式V-A的化合物中，通过在氨水中在催化剂如CuS04或CuI的存在下加热，该溴可以被氨基替代，以获得式VI-A的化合物。可以加入增溶共溶剂如N-甲基-吡咯烷酮(NMP)或二甲基乙酰胺，并且该反应在100-180°C的温度下在密封容器中进行。备选地，氨基官能度可以以被保护的形式如叔丁氧羰基氨基取代基经过偶联，在标准Hartwig/Buchwald条件下(例如，使用碱如叔丁醇钠和钯催化剂如Pd2(dba)3和膦配体如三叔丁基膦(phosphane))引入。步骤2b:对于其中Y是硝基的式V-A的化合物，硝基基团的还原是通过标准条件完成的如在溶剂如甲醇、乙醇、四氢呋喃(THF)或乙酸乙酯中，在室温或高达80。C下，用披钯木炭作为催化剂多相氢化；或在溶剂如甲醇中在回流条件下，用Pd催化剂和甲酸三乙铵多相氢化。该还原也可以用碱金属如铁或锡，在酸性介质如乙酸或HC1水或醇溶液中，在室温至120。C下进行。另一种适当的还原剂是水或甲醇中的硫化铵，或二甲基甲酰胺(DMF)或HC1水溶液中的氯化锡(II)。该还原反应产生相应的式VI-A的化合物。步骤3a:式VI-A化合物之上的氨基部分的垸基化可以用适当的式VII的苄基溴或苄基碘，在惰性溶剂如二甲基甲酰胺、二氯甲烷、甲苯、四氢呋喃(THF)、二甲基甲酰胺(DMF)、或二甲基乙酰胺中，任选地在碱如吡啶、三乙胺、或二异丙基乙胺的存在下完成，获得式I-A的化合物。适当的温度是在-20。C至100。C的范围内。步骤3b:备选地，对于其中R3是氢的式VI-A化合物，在还原性烷基化的条件下可以使用适当的苯甲醛，例如在还原剂如硼氢化钠或氰基硼氢化钠的存在下，在溶剂如四氢呋喃(THF)、甲醇、二甲基甲酰胺(DMF)中，或在金属如锌或锡的存在下在乙酸中。也可以形成中间体席夫碱并且在单独步骤中从醛和杂环胺中分离，例如通过在通过甲苯磺酸的酸催化下在甲苯、苯或氯仿中縮合，共沸去除水，或者通过在三氟化硼或四氯化钛的存在下缩合。席夫碱可以随后通过上述还原剂，或通过乙醚或THF中的氢化铝锂，或通过在惰性溶剂如THF、乙酸乙酯或甲醇中的钯催化剂上的催化氢化来还原。因此，获得其中R3是氢的式I-A化合物。反应路线2式I化合物的制备根据式I中"A"的性质不同而不同。其中"A"是二CH-的本发明的化合物可以按照反应路线2进行制备，并且命名为I-B。<formula>complexformulaseeoriginaldocumentpage15</formula>反应路线2在反应路线2，R1,R2,W和I^具有以上关于式I给出的含义并且Hal是溴或碘。步骤1:式IX的乙炔基-芳烃可以与2-氨基-3-溴-5-硝基吡啶在所谓的Sonogashira反应的标准条件下，使用铜催化剂如Cul或CuCl和钯催化剂如PdCl2(PPh3)2或PdCl2(PhCN)2/PtBu3以及碱如三乙胺或二异丙基胺，在惰性溶剂如四氢呋喃(THF)、二噁烷、二甲基甲酰胺(DMF)或乙腈中偶联。该反应在室温或可达160°C的更高温度下进行，获得相应的式X的化合物。备选地，式IX的乙炔基-芳烃可以通过本领域已知的方法首先转化为更为活性的炔基-Zn或-Sn衍生物该乙炔基-芳烃用强碱如丁基锂去质子化，形成炔基-Li中间体，其与ZnCl2或Bu3SnCl反应，获得所需的锌或锡中间体。这些可以随后在标准交叉偶联条件下与溴吡啶偶联，例如在诸如二甲基乙酰胺、THF或甲苯的溶剂中通过钯膦复合物如Pd(PPh3)4或PdCl2(PPh3)2或Pd2(dba)3/PtBu3催化。步骤2:式X的炔烃中间体的环化以获得式V-B的吡咯，这可以通过在惰性溶剂如N-甲基-吡咯烷酮(NMP)、四氢呋喃(THF)、二甲基甲酰胺(DMF),或乙醇中，在室温至回流的温度下，用碱如叔丁醇钾、氢化钾或乙醇钠处理来实现。备选地，碱可以用催化剂如CuI替代。获得的式V-B的吡咯然后可以根据步骤3和步骤4a或4b转化为式I-B的化合物。步骤3,步骤4a和步骤4b:这些步骤类似于在以上反应路线1中描述的步骤2b,步骤3a和步骤3b。某些式I-A或I-B中的取代基可以对上述合成系列的条件不是惰性的，因此可能要求通过本领域己知的标准保护基进行保护。例如，氨基可以作为叔丁氧羰基衍生物进行保护。备选地，一些取代基可以在反应系列结束时由其它衍生。例如，可以合成携带硝基取代基的式I化合物，该取代基最终通过标准方法转化为酰氨基取代基。通式I的化合物可以含有一个或几个手性中心并且因此可以以外消旋或旋光形式存在。该外消旋物可以按照已知方法分离成对映体。例如，通过与旋光酸反应，从外消旋混合物形成非对映体盐，其可以通过结晶法分离，所述旋光酸如例如D-或L-酒石酸，苦杏仁酸，苹果酸，乳酸或樟脑磺酸。备选地，对映体的分离也可以通过使用可商购的手性HPLC-相上的色谱法实现。本发明的化合物可以以其药用盐形式存在。术语"药用盐"指的是保持式I化合物的生物有效性和特性且由适宜的非毒性有机酸或无机酸或有机碱或无机碱形成的常用酸加成盐或碱加成盐。酸加成盐包括例如来源于无机酸和那些来源于有机酸的那些酸加成盐，所述的无机酸诸如盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸和硝酸；所述的有机酸诸如对-甲苯磺酸、水杨酸、甲磺酸、草酸、琥珀酸、柠檬酸、苹果酸、乳酸、富马酸等。碱加成盐包括来源于铵、钾、钠和季铵氢氧化物，诸如氢氧化四甲基铵，特别是钠的那些。将药物化合物化学改性成盐是药物化学工作者众所周知的技术，目的是为使化合物获得改善的物理和化学稳定性、吸湿性、流动性和溶解性。例如，在Stahl，PH.和Wermuth,G.,(编辑)，HandbookofPharmaceuticalSalts,VerlagHelveticaChimicaActa(VHCA)，Zurich,(2002)或Bastin,RJ.等，OrganicProc.Res.Dev.4(2000)427-435中描述了该项技术。可以将本发明的化合物及其药用盐作为药剂使用，例如以药物组合物的形式。可以通过口服，例如以片剂、包衣片、锭齐U、硬明胶胶囊和软明胶胶囊、溶液、乳剂或混悬剂形式给予所述药物组合物。然而，还可以通过直肠、例如以栓剂形式或通过胃肠外、例如以注射液形式进行给药。可以通过用药物上可接受的无机或有机载体加工本发明的化合物，得到上述药物制剂。例如，可以将乳糖、玉米淀粉或其衍生物、滑石、硬脂酸或其盐等用作片剂、包衣片、锭剂和硬明胶胶囊的载体。用于软明胶胶囊的适宜载体有例如植物油、蜡、脂肪、半固体和液体多元醇类等。然而，随活性物质特性的不同，就软明胶胶囊而言通常不需要载体。用于生产溶液和糖浆剂的适宜载体例如有水、多元醇类、甘油、植物油等。用于栓剂的适宜载体例如有天然或硬化油、蜡、脂肪、半固体或液体多元醇类等。此外，药物组合物可以含有防腐剂、增溶剂、稳定剂、湿润剂、乳化剂、甜味剂、着色剂、调味剂、用于改变渗透压的盐、缓冲剂、掩蔽剂或抗氧化剂。它们还可以含有其它治疗上有价值的物质。本发明的一个实施方案是药物组合物，其含有一种或多种按照式I的化合物作为活性成分、以及药用载体。本发明的另一个实施方案是药物组合物，其用于治疗由src家族酪氨酸激酶的不适当激活介导的疾病。本发明的另一个实施方案是药物组合物，其用于治疗炎性-、免疫学-、CNS病症，或骨病。本发明的另一个实施方案是药物组合物，其用于治疗癌症。本发明的另一个实施方案是药物组合物，其用于治疗结直肠癌、乳腺癌、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、胃癌、膀胱癌、卵巢癌、黑素瘤、成神经细胞瘤、宫颈癌、肾脏癌或肾癌，白血病或淋巴瘤。本发明的另一个实施方案是一种或多种按照式I的化合物在制备药物组合物中的应用，所述药物组合物用于治疗癌症。本发明的另一个实施方案是一种或多种按照式I的化合物在制备药物组合物中的应用，所述药物组合物用于治疗结直肠癌、乳腺癌、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、胃癌、膀胱癌、卵巢癌、黑素瘤、成神经细胞瘤、宫颈癌、肾脏癌或肾癌，白血病或淋巴瘤。本发明的另一个实施方案是一种或多种按照式I的化合物在制备药物组合物中的应用，所述药物组合物用于治疗炎性-、免疫学-、CNS病症，或骨病。本发明的另一个实施方案是一种或多种按照式I的化合物作为src家族酪氨酸激酶抑制剂的应用。本发明的另一个实施方案是一种或多种按照式I的化合物作为细胞信号转导-调节剂和抗增殖剂的应用。本发明的另一个实施方案是一种或多种按照式I的化合物用于治疗炎性-、免疫学-、CNS病症，或骨病的应用。本发明的另一个实施方案是一种或多种按照式I的化合物用于治疗癌症的应用。本发明的另一个实施方案是一种药物组合物，其包含治疗有效量的按照式I的化合物作为活性成分、以及药用载体。本发明的另一个实施方案是一种治疗癌症的方法，该方法包括向需要其的个人施用治疗有效量的按照式I的化合物。本发明的另一个实施方案是一种治疗以下疾病的方法结直肠癌、乳腺癌、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、胃癌、膀胱癌、卵巢癌、黑素瘤、成神经细胞瘤、宫颈癌、肾脏癌或肾癌，白血病或淋巴瘤，该方法包括向需要其的个人施用治疗有效量的按照式I的化合物。例如通过使用以下方法得到药物制剂1.将4.0g玻璃珠称入定制的4cmGL25管(珠填充半支管)。2.加入50mg化合物，用刮刀(spatulum)分散并涡旋。3.加入2ml明胶溶液(珠:明胶溶液重量比=2:1)并涡旋。4.加盖并用铝箔包封以避光。5.为研磨物制备平衡重。6.在Retsch研磨机中以20/s研磨4小时(对某些物质以30/s研磨达24小时)。7.通过以400g离心2分钟，在与接收小瓶连接的过滤储蓄器上用两层滤膜(IOOpm)从珠上提取混悬剂。8.将提取物移入量筒。9.用小体积反复洗涤(本文为lml步骤)至达到终体积或提取物澄清。10.用明胶填充至终体积并匀化。上述描述的制备方法产生具有110pm颗粒大小的式I化合物的微混悬剂。该混悬剂适合于口服且用于下述体内药动学测试。药理学活性通过使用下列试验证实本发明化合物作为src-家族酪氨酸激酶抑制剂的活性。SRC-抑制剂-试验参数:反应混合物ATP肽(Ro+Jal33-Ro):Jal33-RoRoPT66试验缓冲液l制剂:5)iM10196nM9.8|iM230ng/ml4mMMgC122mMTCEP50mMHEPESO，l%吐温20pH7.32.5U/ml最大值25pM最小值0.42nM材料Eu-标记的磷酸酪氨酸抗体:-LckCisbioMabPT66-K;-SrcEG&GWallacPT66Eu-W1024(均可商购)。肽类:Ro:NH2-A-E-E-E-I-Y-G-E-F-E-A-K-K-K-K-CONH2;和Jal33-Ro:Jal33-G-氨基辛酸-A-E-E-E-I-Y-G-E-F-E陽A-K-K-K-K-CONH2，其中Jal33为LightCyder-Red640-N-羟基琥珀酰亚胺酯；由此通过最优化固相肽合成方案(Merrifield,Fed.Proc.Fed.Amer.Soc.Exp.Biol.21(1962)412)，用ZinsserSMP350肽合成仪合成两种肽类。简单的说，通过反复偶联20倍过量的氨基酸将所述肽组装在160mg(22.8pmol级)Rink-接头改性的聚苯乙烯固相上，其中所述的氨基酸随侧链官能团的不同而各自被临时的哌啶不稳定的Fmoc-和永久的酸不稳定的叔-Bu-、BOC-和O-叔-Bu-基团保护。底物序列AEEEIYGEFEAKKKK在N-末端还固定有间隔基氨基酸，即氨基辛酸和甘氨酸。在裂解N-末端临时保护基后，用1.5倍量的LightCycler-Red640-N-羟基琥珀酰亚胺酯(购自RocheDiagnosticsGmbH)和三乙胺标记仍然连接和被保护的肽。3小时后，用二甲基甲酰胺和异丙醇洗涤树脂，直到蓝色树脂的洗脱液变无色为止。从固相中去除被完全保护和标记的肽，并通过用80%三氟乙酸、10%乙二硫醇、5%硫代茴香醚和5%水的混合物处理使其从永久保护基上释放。最终通过制备型反相HPLC纯化分离底物。该纯化步骤得到12.2mgRP-HPLC单峰的纯蓝色物质(冻干物)。通过MALDI质谱证实同一性[2720.0]。塵UpstateLck(p56lek,活性)、UpstateSrc(p60e-src,部分纯化)购自UBI,UpstateBiotech公司。时间分辨荧光试验:读出器PerkinElmer,WallacViktor1420-040多标记计数器；液相操作系统BeckmanCoulter,Biomek2000。ATP、吐温20、4-(2-羟基乙基)-l-哌嗪乙磺酸(HEPES)购自RocheMolecularBiochemicals;MgC2和MnCl2购自MerckEurolab;三(2-羧基乙基)膦盐酸盐(TCEP)购自Pierce,384孔低体积荧光板购自Falcon。分析描述首先将所述酶在15。C下的含有相应量本发明抑制剂的水溶液中预保温15分钟。然后通过加入含有ATP、肽和PT66的反应混合物且随后进行振摇，启动磷酸化反应。立即使用时间分辨荧光光谱在合适的孔平板读出器上监测反应的进行情况。可以通过使用非线性曲线拟合(XLfit软件(IDBusinessSolutionLtd.,Guilford,Surrey,UK))由反应速率得到ICso值。<table>complextableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>下列实施例是为了帮助理解本发明而提供的，本发明的实际范围由后附权利要求所述。应理解，可以在不偏离本发明精祌的情况下对于所述方法进行修改。实验方法原料2-苯基-3H-咪唑并4，5-bl吡啶-6-基胺a)6-硝基-2-苯基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶将在250mL硝基苯中的14.05g2,3-二氨基-5-硝基吡啶和9.68g苯甲醛加热至140-150。C达15小时。通过真空蒸馏去除溶剂，将残余物分散在乙酸乙酯中，过滤，将过滤残余物用乙酸乙酯充分洗涤。产率16.0gb)2-苯基-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-6-基胺将12.0g6-硝基-2-苯基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶溶解在1L乙酸中。加热18g铁粉，在搅拌下将混合物加热至80。C。在2小时后，将混合物冷却至室温，通过硅藻土过滤。用甲醇洗涤硅藻土垫，蒸发合并的滤液。将残余物溶解在甲醇/二氯甲垸1:1中并通过硅胶过滤。将滤液浓縮至100ml体积，获得的沉淀通过过滤收集并用甲醇洗涤。产率7.68g取代的苯基-乙炔通过US4,162,265A所述的文献方法，通过酰化3-或4-氨基-苯基乙炔，或者通过文献方法将3-或4-羟基苯基乙炔烷基化来制备取代的苯基-乙炔。例如，3-(2-甲氧基乙氧基)苯基乙炔将3-羟基苯基乙炔(237mg，2mmol)与2-溴乙基甲基醚(0.23mL,2.4mmo1)和碳酸钾(322mg,2.4mmo1)在丙酮(5mL)中在微波炉(CEMDiscover)中加热至110。C达45分钟。将水(lmL)加入混合物，整个用二氯甲烷(2x25mL)萃取。合并的有机物通过MgS04干燥，过滤并真空浓缩，获得棕色油。将油通过柱色谱法(Si02,二氯甲烷)纯化，获得3-(2-甲氧基乙氧基)苯基乙炔，为无色油(247mg,70。/。产率)。'H-NMR(400MHz;CDC13):7,23(1H,dd，J8.8，8.0),7.08(1H，dt,J7.6,1.2)，7.04(1H，dd,/1.48,2.7),6.94(1H,ddd,J1.0,2,6,8.3),4.11(2H，f,J4.6),3.74(2H,t,/4.6),3.45(3H,s),3.05(1H,s)。备选地，如在Tsuji,M.,J.Org.Chem.68(2003)9589-9597-辅助信息S.l-36-http:〃pubs.acs.org/subscribe/journals/joceah/suppinfo/jo035090f/jo035090fsi20030918_025110.pdf中关于4-甲氧基苯基乙炔所述，通过Sonogashira偶联，由相应的碘苯和三甲基甲硅烷基乙炔制备4-(2-甲氧基乙氧基)苯基乙炔。3-(乙酰氨基)苯基乙炔将乙酐(13.8mL,144mmol)滴加到3-乙炔苯胺(14.0g，120mmol)禾卩4-(二甲基氨基-)吡啶(DMAP)(1.5g,12mmoI)在四氢呋喃(300mL)中的溶液。将混合物在室温下搅拌2小时，将水(100mL)加入混合物，整个用二氯甲烷(2x250mL)萃取。合并的有机物用10%柠檬酸(100mL)、接着饱和碳酸氢钠溶液(100mL)洗涤，通过MgS04干燥，过滤并真空浓縮，获得3-(乙酰氨基)苯基乙炔，为黄色固体(18.3g,96。/。)。)H-NMR(400MHz;CDCL3):7.62(1H,s)，7.53(1H,d，J7.7)，7.41(1Hbr.s),7.28-7.22(2H,m),3.06(1H，s)，2.17(3H,s)。实施例1-1:(l-苯基-乙基V(2-苯基-3仏咪唑并[4,5-W吡啶-6-基V胺将来自以上b)的100mg2-苯基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-6-基胺溶解在1mL无水二甲基甲酰胺(DMF)中，室温下加入92mg1-苯基乙基溴。搅拌混合物18小时，真空去除DMF，将残余物通过硅胶色谱法纯化，首先用二氯甲烷、然后二氯甲烷/甲醇(60:1)、然后二氯甲烷/甲醇虔(60丄0,2)逐步洗脱。富集含有产物的级分，并通过制备HPLC-MS进一步纯化。产率17，4mg标题产物。化丽R(400MHz,D6-固S0):8.08(d;2H);7.93(s,1H);7.53-7.43(m:6H);7.33(t，2H);7.20(t，1H);6.79(brs,1H);6.40(brs,1H);4.55(brs,1H);1.49Cd，3H)。实施例2-1:苄基42-3-(2-甲氧基-乙氧基V苯基l-m-吡咯并f2，3-bl吡啶-5-基卜胺a)3-[3-(2-甲氧基-乙氧基)-苯基乙炔基]-5-硝基-吡啶-2-基胺将3-(2-甲氧基-乙氧基)-苯基乙炔(6.3g,36mmol)加入2-氨基-3-溴-5-硝基吡啶(4g,18mmol)、PdCl2(PPh3)2(966mg，1.38mmol)和Cul(262mg，1.38mmol)在无水四氢呋喃(80mL)中的在暗处的溶液中。室温下搅拌混合物48小时，然后真空浓縮并再溶剂化在二氯甲烷(150mL)中。用水(25mL)洗涤有机溶液，通过MgS04千燥，过滤并真空浓縮为其20%的原始体积，然后加入庚垸(20mL)。将获得的黄色固体过滤并干燥，获得3-[3-(2-甲氧基-乙氧基)-苯基乙炔基]-5-硝基-卩比啶-2-基胺(4.2g,74%产率)。)H-丽R(400MHz;d6-DMSO):8.89(1H，d,8.34(1H,d，".7)，7.39(1H，m),7.35(1H,d，/8.0),7.30(1H，dt,几O,7.6)，7.04(1H,ddd,J1.0,2.6,8.2)，4.15(2H,t,J4.5),3.69(2H，t,/4.5)，3.34(3H,s)。MS:M=(ES+)314(M+H)，355(M+乙腈)终产物b)2-[3-(2-甲氧基-乙氧基)-苯基]-5-硝基-lH-吡咯并[2，3-b]吡啶将叔丁醇钾(1.18g,10.5mmol)加入3-[3-(2-甲氧基-乙氧基)-苯基乙炔基]-5-硝基-吡啶-2-基胺(1.57g,5mmol)在四氢呋喃和二甲基甲酰胺的2:1混合物(75mL)中的溶液。将混合物加热至70。C达16小时，然后真空去除四氢呋喃。将混合物倒在硅胶垫上，用乙酸乙酯、然后乙酸乙酯中的10%甲醇洗脱。真空浓縮有机物至它们原体积的5%，加入水(30mL)。过滤获得的橙色固体并干燥，获得2-[3-(2-甲氧基-乙氧萄-苯基]-5-硝基-lH-吡咯并[2,3-b]吡啶(1.3g，83%)。'H-NMR(400MHz;d6-DMSO):12.88(1H,s)，9.04(1H，d，/2.6)，8.77(1H，d,J2.6),7.52-7.50(2H,m),7.36(1H，app.t,J8.1,7.8)，7.18(1H,s)，6.95(1H,dd,/1.8,8.1),4.15(2H，t，J4.6),3.65(2H,t,J4.6)，3.25(3H,s)。MS:M=(ES+)314(M+H),355(M+乙腈)c)2-[3-(2-甲氧基-乙氧基)-苯基]-lH-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基胺向2-[3-(2-甲氧基-乙氧基)-苯基]-5-硝基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(7.1mmo1,2.2g)和铁粉(6.7g)在乙醇(50mL)中的混合物加入HC1(浓)(0.7mL)和水(5mL)。将混合物在70°C加热3小时，然后冷却和过滤通过Celite。真空去除溶剂，将残余物再溶剂化在乙酸乙酯(30mL)中，用饱和碳酸氢钠(15mL)洗涤，通过MgS04干燥，过滤和真空浓縮。通过柱色谱法(Si02,乙酸乙酯)纯化粗产物，获得2-[3-(2-甲氧基-乙氧基)-苯基]-lH-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基胺(1.2g，60%)。'H-NMR(400MHz;d6-DMSO):11.62(1H，s),7.78(1H,d，J2.0),7.53-7.50(2H,m),7.38(1H，app.t,J8.0),7.13(1H,d,J"2.3),6,93(1H,dd,J1.7,8.0),6.75(1H,d，/2.0),4.8(2H,br.s),4.24(2H,t,J4.6),3.76(2H,t,J4.6),3.40(3H,s)。MS:M=(ES+)284(M+H)d)苄基-{2-[3-(2-甲氧基-乙氧基)-苯基]-111-吡咯并[2，3七]吡啶-5-基}-胺将聚合物支撑的氢硼化物(706mg，1.8mmol)加入2-[3-(2-甲氧基-乙氧基)-苯基]-lH-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基胺(50mg,0.18mmol)和苯甲醛(18mg,0.18mmol)在甲醇(3mL)中的混合物。搅拌混合物16小时，过滤，真空浓縮并通过制备HPLC纯化，获得苄基-(2-[3-(2陽甲氧基-乙氧基)-苯基]-lH画吡咯并[2,3七]吡啶-5-基}-胺(4.4mg,7%)MS:M=(ES+)374(M+H),415(M+乙腈)，747(2M+H)使用以上报道的实验条件(实施例2-l)和适当的原料，制备下列衍生物<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>在通过环化反应制备实施例2-5至2-8的中间体7V-[3-(5-硝基-lH-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-苯基]-乙酰胺中，需要比实施例2-1所需的更高等摩尔量的碱(叔丁醇钾)。制备N-[3-(5-硝基-lH-吡咯并[2，3-b]吡啶-2-基)-苯基-乙酰胺将叔丁醇钾(2.25g,20mmol)加入W-[4-(2-氨基-5-硝基誦卩比啶-3-胺乙炔基)-苯基]-乙酰胺(1.48g,5mmol)在四氢呋喃和二甲基甲酰胺的2:1混合物(75mL)中的溶液。将混合物在70。C下加热16小时，然后真空去除四氢呋喃。将混合物倒在硅胶垫上，用乙酸乙酯中的10%甲醇洗脱。真空浓縮有机物为它们原体积的5%，加入水(30mL)。过滤并干燥获得的橙色固体，以提供A43-(5-硝基-lH-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-苯基]-乙酰胺(l.Olg,68%)。!H-画R(400MHz;d6-DMSO):12.97(1H，s)，10.17(1H,s)，9.16(1H,d,8.94(1H，d，J2.5),8.24(1H,s),7.70(1H,d,".8),7.63(1H，d，《/8.2),7.50(1H,app.t，J7.9),7.10(1H,s),2.15(3H，s)。MS:M=(ES+)297(M+H)，338(M+乙腈)，593(2M+H),889(3M+H)权利要求1.式I的化合物，其中，R1和R2独立地表示氢，卤素，烷基，烷氧基，烷氧基烷氧基或酰氨基；R3是氢或烷基；R4是氢，卤素，烷氧基或烷基；A是＝CH-或＝N-；及其所有药用盐。2.根据权利要求1的化合物，其中R1是氢，垸氧基烷氧基或酰氨基；R2是氢；和R4是氢或烷基。3.根据权利要求1的化合物，其中R1和R2独立地表示氢或垸基；R3是氢或烷基；R4是氢或烷基；并且A是,-。4.根据权利要求1或2任何一项的化合物，其中R1是氢，垸氧基垸氧基或酰氨基；R2是氢；R3是氢;R4是氢或烷基;并且A是=CH-。5.根据权利要求l的化合物，其选自由下列各项组成的组(1-苯基-乙基)-(2-苯基-3//-咪唑并[4，5-6]吡啶-6-基)-胺；苄基-{2-[3-(2-甲氧基-乙氧基)-苯基]-1//-吡咯射2,3-6]吡啶-5-基}-胺；{2-[3-(2-甲氧基-乙氧基)-苯基]-1//-吡咯并[2，3-6]吡啶-5-基}-(2-甲基-苄基)-胺；苄基-(2-苯基-1//-吡咯并[2，3-6]吡啶-5-基)-胺；(2-甲基-苄基)-(2-苯基-1乐吡咯并[2,3-6]吡啶-5-基)-胺；A43-(5-苄基氨基-1仏吡咯并[2，34]吡啶-2-基)-苯基]-乙酰胺；AL{3—[5_(2—甲基-苄基氨基)-^—吡咯并[2，3-6]吡啶-2-基]-苯基)-乙酰胺；N-[4-(5-苄基氨基-1//-吡咯并[2,3-6]吡啶-2-基)-苯基]-乙酰胺；禾口^-{4-[5-(2-甲基-苄基氨基)-1//-吡咯并[2,3-6]吡啶-2-基]-苯基}-乙酰胺。6.制备按照权利要求1的其中R3是氢的式I的化合物的方法，其中(a)式VI的化合物，<formula>seeoriginaldocumentpage3</formula>式VI,R'其中A,R1和R2具有以上在权利要求1中关于式I给出的含义,与式VIII的化合物反应，<formula>seeoriginaldocumentpage3</formula>式VIII，其中R"具有以上在权利要求l中关于式I给出的含义，以获得权利要求i的各自的式i的化合物，其中R3是氢；(b)从反应混合物中分离所述式I的化合物，和(C)如果需要，转化为药用盐。7.—种药物组合物，其含有根据权利要求1至5的一种或多种化合物作为活性成分、以及药用载体。8.根据权利要求7的药物组合物，用于治疗癌症。9.根据权利要求1至5的一种或多种化合物在治疗癌症中的应用。全文摘要本发明的目的是式(I)的化合物，它们的药用盐，对映体形式，非对映异构体和外消旋物，上述化合物的制备，含有它们的药物组合物和它们的制备，以及上述化合物在控制或预防诸如癌症的疾病中的应用。文档编号C07D471/04GK101208339SQ200680022962公开日2008年6月25日申请日期2006年7月28日优先权日2005年8月1日发明者乔纳森·格里德利,康拉德·霍诺尔德,弗雷德里克·布鲁克菲尔德,斯蒂芬·沙伊布勒赫,爱德华·博伊德,雷蒙德·劳申请人:霍夫曼-拉罗奇有限公司