汇集合成卡奇霉素(calicheamicin)衍生物的方法

专利名称：：汇集合成卡奇霉素(calicheamicin)衍生物的方法
技术领域：
：本发明描述使用双官能和三官能连接子中间体汇集合成卡奇霉素衍生物和类似物的方法。
背景技术：
：美国专利第4,970,198号(1990)揭示总称为卡奇霉素或LL-E33288复合物的抗菌剂和抗肿瘤剂的有效家族。所述化合物含有可与适当硫醇反应以形成二硫化物而同时引入诸如酰肼或类似亲核体的官能基的甲基三硫化物。美国专利第5,053,394号中给出这一与卡奇霉素的反应的实例。美国专利第5,770,701号涉及制备LL-E33288复合物的二硫化物的靶向形式的方法。使连接子4-(4-乙酰基-苯氧基)丁酸与卡奇霉素N-乙酰基Y二甲基酰肼縮合以提供羧酸-腙，将羧酸-腙进一步以N-羟基琥珀酰亚胺处理以获得备用于与所选生物大分子接合的OSu酯(N-琥珀酰亚胺基氧基)。先前描述的用于构建卡奇霉素衍生物的合成方法由于具有低总体产率的多个含卡奇霉素合成步骤而复杂化。卡奇霉素部分具有固有毒性，且当其已成为合成标靶的部分时使在操作和纯化每一合成步骤的产物期间必须观察到的安全防护增加成为必需。所主张的方法提供一种产率增加的具有较少涉及卡奇霉素部分的步骤的方法。
发明内容本文论述制备式(I)卡奇霉素衍生物的方法<formula>formulaseeoriginaldocumentpage24</formula>其中Z选自由以下各基团组成的群组<formula>formulaseeoriginaldocumentpage25</formula>Alk1为2至6个碳原子的支链或非支链亚烷基链；Sp'选自-S-、-O-、-CONH-、-NHCO-和陽NR'隱；Zi为H或l至5个碳原子的垸基；Ar为视情况经一个、两个或三个独立地选自1至6个碳原子的垸基、1至5个碳原子的垸氧基、1至4个碳原子的硫烷氧基、卤素、硝基、-COOR'、-CONHR'、-0(CH2)nCOOR'、-S(CH2)nCOOR'、-0(CH2)nCONHRm-S(CH2)nCONHR，的基团取代的1,2-、1,3-或1,4-亚苯基；或为视情况经一个、两个、三个或四个独立地选自l至6个碳原子的烷基、1至5个碳原子的烷氧基、1至4个碳原子的硫垸氧基、卤素、硝基、-COOR'、-CONHR'、-0(CH2)nCOOR'、-S(CH2)nCOOR'、-0罪2)11(:0丽11'和國80,11'的基团取代的1,2-、1，3-、1,4-、1,5-、1,6-、1,7-、1,8-、2,3-、2,6-或2,7-亚萘基；n为0至5的整数；R'为视情况经-OH、1至4个碳原子的烷氧基、1至4个碳原子的硫垸氧基中的一或两个基团取代的1至5个碳原子的直链或支链烷基；Sp为1至18个碳原子的直链或支链二价或三价烷基、二价或三价芳基或杂芳基、3至18个碳原子的二价或三价环烷基或二价或三价杂环垸基、二价或三价芳基-烷基(d-d8)基团或二价或三价杂芳基-烷基(d-d8)基团、二价或三价环烷基-烷基(d-d8)基团或二价或三价杂环烷基-烷基(d-ds)基团或2至18个碳原子的二价或三价不饱和垸基，其中杂芳基为呋喃基、噻吩基、N-甲基吡咯基、吡啶基、N-甲基咪唑基、噁唑基、嘧啶基、喹啉基、异喹啉基、N-甲基卡唑基(N-methylcarbazoyl)、氨基香豆素基或吩嗪基，且其中如果Sp为三价基团，那么其可另外经1至5个碳原子的二垸基氨基、l至5个碳原子的垸氧基、羟基或1至5个碳原子的垸硫基取代；Re或R,为H或CHR5为-CH3、-C2H5或-CH(CH3)2;X为碘或溴原子；R5'为氢或基团RCO，其中R为氢、1至10个碳原子的支链或非支链烷基、2至10个碳原子的亚烷基、6至11个碳原子的芳基、(C6-Cu)芳基-烷基(CrC5)基团或杂芳基或杂芳基-垸基(CVCs)基团，其中杂芳基定义为2-或3-呋喃基、2-或3-噻吩基、2-或3-(N-甲基吡咯基)、2-、3-或4-吡啶基、2-、4-或5-(N-甲基咪唑基)、2-、4-或5-噁唑基、2-、3-、5-或6-嘧啶基、2-、3-、4-、5-、6-、7-或8-喹啉基、或l-、3-、4-、5-、6-、7-或8-异喹啉基，所有芳基和杂芳基视情况经一或多个羟基、氨基、羧基、卤基、硝基、l至3个碳原子的(CrC3)烷氧基或1至5个碳原子的硫烷氧基取代；且Q选自由-NNHCO陽、陽NNHCS-、-丽HCONH-、-NNHCSNH-和-NO-组成的群组；所述方法包含以下步骤a.使下式的羧酸与下式的巯基化合物H2Q~Sp—SH于醇溶剂中在烷基羧酸alPC02H(其中all^为1至4个碳原子)存在下，在约20°C至70。C下反应约1至24小时，其中Alk1、Sp1、Ar、Z1、Q和Sp如上文所定义，以产生下式的双连接子-羧酸，其中巯基化合物与羧酸以约1.2:1的比率存在；<formula>formulaseeoriginaldocumentpage27</formula>b.分离步骤(a)的双连接子-羧酸；c.使步骤(b)的经分离双连接子-羧酸与至少3倍摩尔(molar)过量的N-羟基琥珀酰亚胺、2,3,5,6-四氟苯酚、五氟苯酚、4-硝基苯酚、2,4-二硝基苯酚或N-羟基磺基琥珀酰亚胺(N-hydroxysulfosuccinimide)在1,3-二环己基碳化二亚胺(DCC)、l-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳化二亚胺(EDCI)或碳酸N,N'-二琥珀酰亚胺基酯存在下，于含有0-50。/。N，N-二甲基甲酰胺(DMF)的惰性溶剂中反应以产生下式的三连接子-活化酯<formula>formulaseeoriginaldocumentpage28</formula>其中Z如上文中所定义；d.使在步骤(C)中所形成的三连接子-活化酯与甲基三硫基抗肿瘤抗生素CH3-S-S-S-W'在碱或有机碱存在下与甲基三硫基抗肿瘤抗生素CH3-S-S-S-W'于惰性有机溶剂中反应以产生下式的活化酯，其中步骤(c)中的三连接子-活化酯与CH3-S-S-S-W'的比率为3.3:1且反应温度S5'C;<formula>formulaseeoriginaldocumentpage28</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage28</formula>e.分离步骤(d)的活化酯且纯化以获得式(I)的抗肿瘤抗生素:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage28</formula>、Alk1、Sp1~-Ar'、-Q-Sp—S-S-W'式(I)所论述的另一方法包括制备式(I)抗肿瘤抗生素的方法:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage28</formula>式(I)其中Z选自由以下各基团组成的群组<formula>formulaseeoriginaldocumentpage28</formula>Alk1为2至6个碳原子的支链或非支链亚烷基链；Sp'选自-S-、-O-、-CONH-、-NHCO-和陽NR'-;Z1为H或1至5个碳原子的垸基；Ar为视情况经一个、两个或三个独立地选自l至6个碳原子的烷基、l至5个碳原子的烷氧基、1至4个碳原子的硫烷氧基、卤素、硝基、-COOR'、-CONHR'、-0(CH2)nCOOR'、-S(CH2)nCOOR'、-O(C恥CONHR'禾口-S(CH2)nCONHR'的基团取代的1，2-、1，3-或1,4-亚苯基；或为视情况经一个、两个、三个或四个独立地选自l至6个碳原子的烷基、1至5个碳原子的垸氧基、1至4个碳原子的硫烷氧基、卤素、硝基、-COOR'、-CONHR'、-0(CH2)nCOOR'、-S(CH2)nCOOR'、-0((3112)11(:0,11'和-3(<:112)11(:(^服'的基团取代的1,2-、1，3-、1,4-、1,5-、1,6-、1,7-、1，8-、2,3-、2,6-或2,7-亚萘基；n为0至5的整数；R'为视情况经-OH、1至4个碳原子的垸氧基、1至4个碳原子的硫垸氧基中的一或两个基团取代的1至5个碳原子的直链或支链烷基；Sp为1至18个碳原子的直链或支链二价或三价烷基、二价或三价芳基或杂芳基、3至18个碳原子的二价或三价环烷基或二价或三价杂环烷基、二价或三价芳基-烷基(d-C,8)基团或二价或三价杂芳基-垸基(C广d8)基团、二价或三价环烷基-垸基(C广d8)基团或二价或三价杂环垸基-烷基(d-ds)基团或2至18个碳原子的二价或三价不饱和垸基，其中杂芳基为呋喃基、噻吩基、N-甲基吡咯基、吡啶基、N-甲基咪唑基、噁唑基、嘧啶基、喹啉基、异喹啉基、N-甲基卡唑基、氨基香豆素基或吩嗪基且其中如果Sp为三价基团，那么其可另外经1至5个碳原子的二垸基氨基、1至5个碳原子的垸氧基、羟基或1至5个碳原子的垸硫基取代；W'为<formula>formulaseeoriginaldocumentpage30</formula>CHR5为-CH3、-C2H5或-CH(CH3)2;X为碘或溴原子；Rs'为氢或基团RCO，其中R为氢、1至10个碳原子的支链或非支链烷基、2至10个碳原子的亚垸基、6至ll个碳原子的芳基、(CVCn)芳基-烷基(CVC5)基团或杂芳基或杂芳基-烷基(CVCs)基团，其中杂芳基定义为2-或3-呋喃基、2-或3-噻吩基、2-或3-(N-甲基吡咯基)、2-、3-或4-吡淀基、2-、4-或5-(N-甲基咪唑基)、2-、4-或5-噁唑基、2-、3-、5-或6-喷啶基、2-、3-、4-、5-、6-、7-或8-喹啉基、或l-、3-、4-、5-、6-、7-或8-异喹啉基，所有芳基和杂芳基视情况经一或多个羟基、氨基、羧基、卤基、硝基、l至3个碳原子的(d-C3)垸氧基或1至5个碳原子的硫垸氧基取代；且Q选自由-NNHCO-、-NNHCS-、-NNHCONH陽、曙NNHCSNH-和-NO-组成的群组；所述方法包含以下步骤a.使下式的羧酸与下式的巯基化合物H2Q~Sp—SH于醇溶剂中在烷基羧酸alPC02H(其中dP为1至4个碳原子)存在下，在约20°C至7(TC下反应约1至24小时，其中Alk1、Sp1、Ar、Z1、Q和Sp如上文所定义，以产生下式的双连接子-羧酸，其中巯基化合物与羧酸以约1.2:1的比率存在；O71b.分离步骤(a)的双连接子-羧酸；c.使步骤(b)的经分离双连接子-羧酸与CHrS-S-S-W'在碱或有机碱存在下与甲基三硫基抗肿瘤抗生素CH3-S-S-S-W'于惰性有机溶剂中反应；d.使步骤(c)的化合物与至少3倍摩尔过量的N-羟基琥珀酰亚胺、2,3,5,6-四氟苯酚、五氟苯酚、4-硝基苯酚、2,4-二硝基苯酚或N-羟基磺基琥珀酰亚胺在1,3-二环己基碳化二亚胺(DCC)、l-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳化二亚胺(EDCI)或碳酸N,N'-二琥珀酰亚胺基酯存在下，于含有0-50%N,N-二甲基甲酰胺(DMF)的惰性溶剂中反应且纯化以获得式(I)的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage32</formula>另一方法包括制备式(I)的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage32</formula>式(I)其中Z选自由以下各基团组成的群组Alk1为2至6个碳原子的支链或非支链亚烷基链；Spi选自-S陽、-O-、-CONH-、-NHCO-和-NR'-;Z'为H或1至5个碳原子的烷基；Ar为视情况经一个、两个或三个独立地选自1至6个碳原子的垸基、1至5个碳原子的垸氧基、1至4个碳原子的硫垸氧基、卤素、硝基、-COOR'、-CONHR'、-0(CH2)nCOOR'、-S(CH2)nCOOR，、-0(CH2)nCONHR，-S(CH2)nCONHR'的基团取代的1，2-、1,3-或1,4-亚苯基；或为视情况经一个、两个、三个或四个独立地选自l至6个碳原子的烷基、1至5个碳原子的垸氧基、1至4个碳原子的硫烷氧基、卤素、硝基、-COOR'、-CONHR'、-0(CH2)nCOOR'、-S(CH2)nCOOR'、-0罪2)11(:0,11'和-3,2)11(:(^服'的基团取代的1,2-、1,3-、1,4-、1,5-、1,6-、1,7-、1,8-、2,3-、2，6-或2,7-亚萘基；n为0至5的整数；R'为视情况经-OH、1至4个碳原子的烷氧基、1至4个碳原子的硫垸氧基中的一或两个基团取代的1至5个碳原子的直链或支链垸基；Sp为1至18个碳原子的直链或支链二价或三价烷基、二价或三价芳基或杂芳基、3至18个碳原子的二价或三价环垸基或二价或三价杂环烷基、二价或三价芳基-垸基(C广d8)基团或二价或三价杂芳基-垸基(d-d8)基团、二价或三价环烷基-烷基(d-d8)基团或二价或三价杂环烷基-烷基(d-C18)基团或2至18个碳原子的二价或三价不饱和烷基，其中杂芳基为呋喃基、噻吩基、N-甲基吡咯基、吡啶基、N-甲基咪唑基、噁唑基、嘧啶基、喹啉基、异喹啉基、N-甲基卡唑基、氨基香豆素基或吩嗪基，其中如果Sp为三价基团，那么其可另外经1至5个碳原子的二垸基氨基、1至5个碳原子的垸氧基、羟基或1至5个碳原子的烷硫基取代；W'为OR<formula>formulaseeoriginaldocumentpage34</formula>Rs或R为H或CHRs为-CH3、-<:2115或-(:1^((:113)2;X为碘或溴原子；Rs'为氢或基团RCO，其中R为氢、1至10个碳原子的支链或非支链烷基、2至10个碳原子的亚烷基、6至11个碳原子的芳基、(C6-Cn)芳基-垸基(d-C5)基团或杂芳基或杂芳基-烷基(d-Cs)基团，其中杂芳基定义为2-或3-呋喃基、2-或3-噻吩基、2-或3-(N-甲基吡咯基)、2-、3-或4-吡啶基、2-、4-或5-(N-甲基咪唑基)、2-、4-或5-噁唑基、2-、3-、5-或6-嘧啶基、2-、3-、4-、5-、6-、7-或8-喹啉基、或l-、3-、4-、5-、6-、7-或8-异喹啉基，所有芳基和杂芳基视情况经一或多个羟基、氨基、羧基、卤基、硝基、l至3个碳原子的(d-C3)烷氧基或1至5个碳原子的硫烷氧基取代；且Q选自由-NNHCO-、-NNHCS-、-丽HCONH-、-NNHCSNH-禾卩-NO-组成的群组；所述方法包含以下步骤a.使下式的羧酸<formula>formulaseeoriginaldocumentpage34</formula>与下式的巯基化合物H2Q~Sp—SH于醇溶剂中在垸基羧酸alPC02H(其中alP为1至4个碳原子)存在下，在约20°C至70。C下反应约1至24小时，其中Alk1、Sp1、Ar、Z1、Q和Sp如上文所定义，以产生下式的双连接子-羧酸；<formula>formulaseeoriginaldocumentpage35</formula>b.分离步骤(a)的双连接子-羧酸；c.使步骤(b)的经分离双连接子-羧酸与N-羟基琥珀酰亚胺、2,3,5,6-四氟苯酚、五氟苯酚、4-硝基苯酚、2,4-二硝基苯酚或N-羟基磺基琥珀酰亚胺中至少一者在1,3-二环己基碳化二亚胺(DCC)、l-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳化二亚胺(EDCI)或碳酸N,N'-二琥珀酰亚胺基酯存在下，于含有0-50%N,N-二甲基甲酰胺(DMF)的惰性溶剂中反应以产生下式的三连接子-活化酯其中Z如上文中所定义；d.使步骤(c)中的三连接子-活化酯与CH3-S-S-S-W'在碱或有机碱存在下，于惰性有机溶剂中反应以产生下式的活化酯；所述方法包括包含使用具有pH值为约7.0至9.0的移动相的逆相高效液相色谱，接着使用正相色谱的纯化步骤。所述方法包括alW为3个碳原子；e.分离步骤(d)的活化酯且纯化以获得式(I)的化合物:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage35</formula>式(I)31为-0-;Z!为甲基;Ar为未经取代的1，4-亚苯基；Sp为4个碳原子；R3为H;Q为NNHC(O)-;Rs为C2H5;Rs'为-C(O)-R;R为甲基；且Z为所述方法包括(但不限于)All^为2至5个碳原子的亚烷基且Sp'为氧原子。所述方法包括(但不限于)AlW为3个碳原子的亚烷基。所述方法包括(但不限于)21为1至3个碳原子的垸基。所述方法包括(但不限于)Ar为l,2-、1，3-或1,4-亚苯基或1,2-、1,3-、1,4-、1，5-、1,6-、1,7-、1,8-、2,3-、2,6-或2，7-亚萘基。所述方法包括(但不限于)Ar为1，4-亚苯基。所述方法包括(但不限于)Q为-NNHCO-。所述方法包括(但不限于)Sp为1至12个碳原子的直链或支链二价或三价烷基。所述方法包括(但不限于)Sp为1至6个碳原子的直链或支链二价或三价垸基。所述方法包括(但不限于)醇溶剂为甲醇。所述方法包括(但不限于)惰性溶剂为乙腈。所述方法包括(但不限于)垸基羧酸为乙酸。所述方法包括(但不限于)惰性有机溶剂为乙腈。所述方法包括(但不限于)Z为<formula>formulaseeoriginaldocumentpage37</formula>本文论述制备下式的三连接子-活化酯的方法:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage37</formula>其中Z选自由以下各基团组成的群组:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage37</formula>Alk1为2至6个碳原子的支链或非支链亚烷基链；81选自-3-、-O-、-CONH-、-NHCO-和-NR'-;Z为H或1至5个碳原子的垸基；Ar为视情况经一个、两个或三个独立地选自l至6个碳原子的垸基、l至5个碳原子的垸氧基、1至4个碳原子的硫垸氧基、卤素、硝基、-COOR'、-CONHR'、-0(CH2)nCOOR，、-S(CH2)nCOOR'、-0(CH2)nCONHR3f]-S(CH2)nCONHR，的基团取代的1,2-、1,3-或1,4-亚苯基；或为视情况经一个、两个、三个或四个独立地选自l至6个碳原子的烷基、1至5个碳原子的烷氧基、1至4个碳原子的硫烷氧基、卤素、硝基、-COOR'、-CONHR'、-0(CH2)nCOOR'、-S(CH2)nCOOR'、-0罪2)11(:0冊11'和-8((:112)11(:0仰11'的基团取代的1,2-、1,3-、1，4-、1,5-、1,6-、1，7-、1,8-、2,3-、2,6-或2,7-亚萘基；n为0至5的整数；R'为视情况经-OH、1至4个碳原子的烷氧基、1至4个碳原子的硫垸氧基中的一或两个基团取代的1至5个碳原子的直链或支链垸基；Sp为1至18个碳原子的直链或支链二价或三价烷基、二价或三价芳基或杂芳基、3至18个碳原子的二价或三价环烷基或二价或三价杂环烷基、二价或三价芳基-烷基(C广d8)基团或二价或三价杂芳基-烷基(d-d8)基团、二价或三价环垸基-烷基(d-d8)基团或二价或三价杂环垸基-垸基(d-ds)基团或2至18个碳原子的二价或三价不饱和烷基，其中杂芳基为呋喃基、噻吩基、N-甲基吡咯基、吡啶基、N-甲基咪唑基、噁唑基、嘧啶基、喹啉基、异喹啉基、N-甲基卡唑基、氨基香豆素基或吩嗪基且其中如果Sp为三价基团，那么其可另外经1至5个碳原子的二垸基氨基、1至5个碳原子的烷氧基、羟基或1至5个碳原子的烷硫基取代；W'为<formula>formulaseeoriginaldocumentpage38</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage39</formula>Rs为-CH3、-。2115或-(:11((:113)2;X为碘或溴原子；R5'为氢或基团RCO，其中R为氢、1至IO个碳原子的支链或非支链烷基、2至10个碳原子的亚烷基、6至11个碳原子的芳基、(C6-Cn)芳基-烷基(d-Cs)基团或杂芳基或杂芳基-烷基(CrCs)基团，其中杂芳基定义为2-或3-呋喃基、2-或3-噻吩基、2-或3-(N-甲基吡咯基)、2-、3-或4-吡啶基、2-、4-或5-(N-甲基咪唑基)、2-、4-或5-噁唑基、2-、3-、5-或6-嘧啶基、2-、3-、4-、5-、6-、7-或8-喹啉基、或l-、3-、4-、5-、6-、7-或8-异喹啉基，所有芳基和杂芳基视情况经一或多个羟基、氨基、羧基、卤基、硝基、l至3个碳原子的(d-C3)烷氧基或1至5个碳原子的硫烷氧基取代；且Q选自由-NNHCO-、-NNHCS-、-NHNCONH-、-NNCSNH-和-NO-组成的群组；所述方法包含以下步骤a.使下式的羧酸<formula>formulaseeoriginaldocumentpage40</formula>与下式的巯基化合物H2Q~Sp—SH于醇溶剂中在垸基羧酸all^C02H(其中all^为1至4个碳原子)存在下，在约20°C至7(TC下反应约1至24小时，其中Alk1、Sp1、Ar、Z1、Q和Sp如上文所定义，以产生下式的双连接子-羧酸O"H0^^AIk1、Sp1、Ar^Q—Sp一SHb.分离步骤(a)的双连接子-羧酸；c.使来自步骤(b)的双连接子-羧酸在碱或有机碱存在下与CH3-S-S-S-W'于惰性有机溶剂中反应以产生下式的双连接子-甲基三硫基化合物HO^^^Mk1、Sp1、Ar^^Q—Sp一S-S-W'd.使步骤(c)的经分离双连接子-甲基三硫基化合物与N-羟基琥珀酰亚胺、2,3,5,6-四氟苯酚、五氟苯酚、4-硝基苯酚、2,4-二硝基苯酚或N-羟基磺基琥珀酰亚胺在1,3-二环己基碳化二亚胺(DCC)、1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳化二亚胺(￡00:1)或碳酸^^-二琥珀酰亚胺基酯存在下，于含有0-50%N,N-二甲基甲酰胺(DMF)的惰性溶剂中反应以产生下式的三连接子-活化酯O71本文提供制备下式的三官能连接子中间体的方法<formula>formulaseeoriginaldocumentpage41</formula>其中Alk1为2至6个碳原子的支链或非支链亚烷基链；Sp!选自-S-、-O-、-CONH-、-NHCO-和-NR'-;Z1为H或1至5个碳原子的烷基；Ar为视情况经一个、两个或三个独立地选自1至6个碳原子的烷基、1至5个碳原子的垸氧基、1至4个碳原子的硫烷氧基、卤素、硝基、-COOR'、-CONHR'、-0(CH2)nCOOR'、-S(CH2)nCOOR，、-0(CH2)nCO-S(CH2)nCONHR'的基团取代的1,2-、1,3-或1,4-亚苯基；或为视情况经一个、两个、三个或四个独立地选自l至6个碳原子的垸基、1至5个碳原子的烷氧基、1至4个碳原子的硫烷氧基、卤素、硝基、-COOR'、-CONHR'、-0(CH2)nCOOR'、-S(CH2)nCOOR'、-0(012)11(:0,11'和-8((^2)11(:0仰11'的基团取代的1,2-、1,3-、1,4-、1,5-、1，6-、1,7-、1,8-、2,3-、2,6-或2,7-亚萘基；n为0至5的整数；R'为视情况经-OH、1至4个碳原子的烷氧基、1至4个碳原子的硫垸氧基中的一或两个基团取代的1至5个碳原子的直链或支链烷基；Sp为1至18个碳原子的直链或支链二价或三价烷基、二价或三价芳基或杂芳基、3至18个碳原子的二价或三价环垸基或二价或三价杂环烷基、二价或三价芳基-垸基(C广d8)基团或二价或三价杂芳基-垸基(d-d8)基团、二价或三价环垸基-垸基(d-d8)基团或二价或三价杂环烷基-烷基(CVC18)基团或2至18个碳原子的二价或三价不饱和垸基，其中杂芳基为呋喃基、噻吩基、N-甲基吡咯基、吡啶基、N-甲基咪唑基、噁唑基、喷啶基、喹啉基、异喹啉基、N-甲基卡唑基、氨基香豆素基或吩嗪基且其中如果Sp为三价基团，那么其可另外经1至5个碳原子的二烷基氨基、1至5个碳原子的垸氧基、羟基或1至5个碳原子的垸硫基取代；Q选自由-NNHCO-、-NNHCS-和-NNHCONH-组成的群组；Z选自由以下各基团组成的群组所述方法包含以下步骤:a.使下式的羧酸<formula>formulaseeoriginaldocumentpage42</formula>与下式的巯基化合物H2Q"Sp—SH于醇溶剂中在垸基羧酸al]^C02H(其中all^为1至4个碳原子)存在下，在约20°C至70。C下反应约1至24小时，其中Alk1、Sp1、Ar、Z1、Q和Sp如上文所定义，以产生下式的双连接子-羧酸；<formula>formulaseeoriginaldocumentpage42</formula>b.分离步骤(a)的双连接子-羧酸；c.使步骤(b)的经分离双连接子-羧酸与N-羟基琥珀酰亚胺、2,3,5,6-四氟苯酚、五氟苯酚、4-硝基苯酚、2,4-二硝基苯酚或N-羟基磺基琥珀酰亚胺在1,3-二环己基碳化二亚胺(DCC)、l-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳化二亚胺(EDCI)或碳酸N,N'-二琥珀酰亚胺基酯存在下，于含有0-50。/。DMF的惰性溶剂中反应以产生下式的三官能连接子中间体0、Alk1、Sp1A「z、Q一sp—SH用于本说明书中的术语在本发明的上下文中和各术语所使用的特定情境中通常具有其在所属领域中的普通含义。某些术语讨论于下文或本说明书中的其他地方以为从业者提供描述本发明的化合物、组合物和方法和如何制造和使用其的额外指南。此外，应了解相同事物可以一种以上方式表示。因此，替代性用语和同义词可用于本文所论述术语中的任一或多者，而对术语是否于本文中加以详述或论述不作任何特殊强调。本说明书中任何地方使用的实例(包括本文所论述的任何术语的实例)仅具有例示性，而决不限制本发明或任何所例示术语的范畴和含义。同样，本发明不局限于所提供的实例。术语"约"或"大致"通常意谓在给定值或范围的20%以内，优选10%以内，且更优选5%以内。如本文所用的术语"垸氧基"是指如上文所定义的烷基具有一个与其连接的氧基。术语"硫烷氧基"是指如所定义的垸氧基具有一个与其连接的硫基。术语"烷基"是指饱和脂族基，包括直链垸基、支链烷基、环烷基(脂环基)、经垸基取代的环垸基和经环烷基取代的烷基。在一个实施例中，直链或支链垸基在其主链中具有6个或6个以下碳原子。术语"垸基"可单独或作为化学名称的部分使用。术语"芳基"定义为芳族碳环部分，且可经取代或未经取代。芳基具有6至14个碳原子，且包括苯基和萘基。术语"芳基"也包括具有两个或两个以上环的多环系统，其中两个或两个以上碳为两个邻接环(所述环"稠合")所共有，其中所述碳环中的至少一者为芳族环，例如其它环可为环垸基、环烯基、环炔基和/或芳基。羧基定义为-C02H基团。术语"卤素"或"卤基"是指氟、氯、溴或碘原子。术语"杂芳基"是指4至IO元环状结构，所述环状结构包括1至4个杂原子。杂芳基包含1至3个稠合环的杂环系统，其中至少一个环可具有芳族特性且含有1至4个选自由S、N和O组成的群组的相同或不同杂原子。环系统的剩余环可完全不饱和、部分饱和或完全饱和。各环包含3至10个成员。如本文所用的术语"杂原子"意谓除碳或氢以外的任何元素的原子，且包括(例如)氮、氧、硫、磷和硒。术语"硝基"意谓-N02。预计术语"经取代"包括有机化合物的所有可允许的取代基。在广泛方面中，有机化合物的可允许取代基包括有机化合物的非环状和环状、支链和非支链、碳环和杂环、芳族和非芳族取代基。对于适当有机化合物来说，可允许取代基可为一或多个且可相同或不同。为达成本发明的目的，诸如氮的杂原子可具有氢取代基和/或本文所描述的有机化合物的任何满足杂原子的原子价的可允许取代基。并不希望本发明以任何方式受有机化合物的可允许取代基限制。术语垸基意谓1至18个碳原子、优选2至5个碳原子、1至4个碳原子或1至3个碳原子的直链或支链烷基。在本发明的一些实施例中，术语垸基为甲基。术语醇溶剂意谓甲醇、乙醇和沸点低于约ioo'c的类似物。亚垸基是指如上文所定义为双基而非单基的烷基。亚垸基可为支链或非支链且可具有2-18个碳。环境温度为约25'C。惰性溶剂或惰性有机溶剂描述将在制备如本文所述的式(I)化合物、三连接子-活化酯或三官能连接子中间体的步骤中既不反应也不形成共价键的溶剂。惰性溶剂或惰性有机溶剂的实例可为混合物，诸如(但不限于)乙腈/乙酸乙酯(1:1)、二氯甲烷、N,N-二甲基甲酰胺、四氢呋喃、二噁烷或乙腈。惰性溶剂可含有0-50。/。N,N-二甲基甲酰胺。惰性有机溶剂为(例如)乙腈、乙酸乙酯或二氯甲烷。有机碱为(例如)烷基胺碱，其包括三乙胺、N,N-二乙基甲胺、N，N-二乙基苯胺、N,N-二乙基亚乙基二胺、N,N-二异丙基乙胺、三丁胺或三丙胺，且进一步包括具有二异丙基乙胺(DIEA)、N-甲基吗啉、N-甲基吡咯啶、2,6-二-叔丁基-4-甲基吡啶或吡啶的二甲胺基吡啶(DMAP)。碱为碱金属氢氧化物、碱金属碳酸盐或碱金属碳酸氢盐。无具体实施例方式在以下反应流程I和II中描述制备式I卡奇霉素衍生物和适用于制备本发明的所述衍生物的三官能和双官能连接子中间体的方法。流程I<table>tableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table>根据流程I，使羧酸i(其中Alk1、Sp1、Ar和Z'如上文所定义)(见于美国专利第5,773,001号，所述专利案据此以引入的方式并入本文中)与巯基化合物2(其中Sp和Q如上文所定义)在沸点低于约IO(TC的醇溶剂中在于约5%乙酸中的垸基羧酸存在下，在约2(TC至约7(TC下縮合约1至约24小时以提供双连接子-羧酸2(其中Alk1、Sp1、Ar、Q、Sp和Z'如上文所定义)。使双连接子-羧酸l与N-羟基琥珀酰亚胺、2，3，5,6-四氟苯酚、五氟苯酚、4-硝基苯酚、2,4-二硝基苯酚或N-羟基磺基琥珀酰亚胺在1,3-二环己基碳化二亚胺(DCC)、1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳化二亚胺(EDCI)或其它碳化二亚胺或碳酸N,N'-二琥珀酰亚胺基酯存在下，于含有0-50。/。DMF的诸如二氯甲烷、四氢呋喃、二噁烷或乙腈的惰性溶剂或DMF中反应以产生三连接子-活化酯4，其中Z选自由以下各基团组成的群组<formula>formulaseeoriginaldocumentpage46</formula>举例来说，使双连接子-羧酸l与诸如1,3-二环己基碳化二亚胺(DCC)或l-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺或其它相当羧基活化基团的偶合剂于诸如N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、四氢呋喃、二噁垸或乙腈的惰性溶剂中反应使得形成三连接子-活化酯4，诸如本文中所述的N-羟基琥珀酰亚胺酯。优选为在环境温度下于二噁烷中的N-羟基琥珀酰亚胺、DCC。优选溶剂混合物为含有0-50%DMF的乙腈。使双连接子-羧酸i与N-羟基琥珀酰亚胺、2,3,5,6-四氟苯酚、五氟苯酚、4-硝基苯酚、2,4-二硝基苯酚或N-羟基磺基琥珀酰亚胺在1，3-二环己基碳化二亚胺(DCC)、l-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳化二亚胺(EDCI)或其它碳化二亚胺存在下，于诸如含有0-50。/。N,N-二甲基甲酰胺(DMF)的二噁垸或乙腈的惰性溶剂中反应使得形成三连接子-活化酯4。三连接子-活化酯￡可通过移除挥发性溶剂来分离且进一步通过于包括硅石-60的惰性载体上进行逆相或正相色谱来纯化。使三连接子-活化酯1_首先与包括(但不限于)碳酸钠的碱金属碳酸盐反应且于乙腈中通过在平缓回流下加热而形成三连接子-活化酯±的钠盐。使三连接子-活化酯±的钠盐与甲基三硫基抗肿瘤抗生素L在约-15'C下于惰性有机溶剂(优选乙腈)中进一步反应得到活化酯f，其中Z、Alk1、Sp1、Ar、Z1、Q、Sp和W'如上文所定义。具体来说，N-乙酰基-LL-E33288Yi1为优选甲基三硫基抗肿瘤抗生素5。反应优选于乙腈中在约O'C下进行。有机碱可视情况于乙腈中在约0。C下替换优选包括三乙胺的碱金属碳酸±卜jm。如流程II中进一步描述，使通过羧酸i(其中Alk1、Sp1、八『和21如上文所定义)与巯基化合物1根据流程I縮合所制备的双连接子-羧酸i与甲基三硫基抗肿瘤抗生素5在三乙胺存在下，于N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中在约-5'C下反应提供中间体2，中间体;L进一步通过与N-羟基琥珀酰亚胺、2,3,5,6-四氟苯酚、五氟苯酚、4-硝基苯酚、2,4-二硝基苯酚或N-羟基磺基琥珀酰亚胺在1,3-二环己基碳化二亚胺(DCC)、l-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳化二亚胺(EDCI)或其它碳化二亚胺或碳酸N，N'-二琥珀酰亚胺基酯存在下，于DMF与乙腈的惰性溶剂混合物中反应而转化成三连接子-活化酯6，三连接子-活化酯l随后优选通过色谱纯化以提供式(I)的抗肿瘤抗生素。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage47</formula>提供以下实例说明本发明的某些实施例，但其不应理解为限制本发明的范畴。所属领域的技术人员将易于了解以下制备程序的条件的已知变化形式可用于制备所述化合物。实例l3-巯基-3-甲基-丁酸2-[(E)-l-[4-(4-羟基-4-氧代丁氧基)苯基l亚乙基l酰肼<formula>formulaseeoriginaldocumentpage48</formula>向0.5g(3.4mmol)3-甲基-3-巯基-丁酸酰肼于5.0ml甲醇中的搅拌混合物中快速添加0.91g(4.1mmol)4-(4-乙酰基苯氧基)-丁酸，接着另外添加10ml甲醇和1.5ml乙酸且持续搅拌24小时。将反应混合物过滤且将固体以100ml甲醇洗漆以获得0.78g呈固体状的标题化合物。实例23-巯基-3-甲基-丁酸2-[(E)-l-[4-(4-羟基-4-氧代丁氧基)苯基]亚乙基酰肼<formula>formulaseeoriginaldocumentpage48</formula>将3-甲基-3-巯基-丁酸酰肼(4.0g，27mmo1)、4-(4-乙酰基苯氧基)-丁酸(5.0g，22.5mmo1)和乙酸(7.5mL)于甲醇(75mL)中的混合物在约45。C下加热约7小时。使混合物冷却至室温。将白色固体(7.12g,90%)收集于布赫纳漏斗(Buchnerfunnel)上且以MeOH(2xl0mL)洗涤。！HNMR(DMSO-d6):S(ppm)12.14(s,1H),10.37和10.21(s,1H),7.74-7.70(m,2H)，6.97-6.95(m,2H)，4.04(t，2H),3.09和3.04(s,2H),2.66(s,1H)2.41-2.37(t,2H),2.22和2.20(s,3H),1.97-1.93(m,2H),1.8(s,3H)，1.47(s,3H)。MS:375(M十+Na)。实例33-巯基-3-甲基-丁酸2-[(E)-l-4-[4-[(2，5-二氧代-l-吡咯啶基)氧基]-4-氧代丁氧基]苯基I亚乙基]酰肼向0.5g(1.42mmol)3-巯基-3-甲基-丁酸2-[(E)-l-[4-(4-羟基-4-氧代丁氧基)苯基]亚乙基]酰肼(实例1或2)与0.22g(1.89mmol)N-羟基琥珀酰亚胺的混合物中添加10mlN,N-二甲基甲酰胺，接着快速添加0.70g(3.65mmol)l-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐且将混合物在室温下搅拌3小时。将反应混合物在真空中浓縮为残余物，将所述残余物于乙酸乙酯与水之间分溶。将经分离的有机层以水、饱和氯化钠洗涤且干燥(MgS04)。将有机层在真空中蒸发以获得油性残余物，将所述残余物从乙酸乙酯-己烷中结晶以提供0.21g呈无色固体状的标题化合物。实例4<formula>formulaseeoriginaldocumentpage49</formula>3-巯基-3-甲基-丁酸2-[(E)-l-[4-[4-[(2，5-二氧代-l-吡咯啶基)氧基]-4-氧代丁氧基苯基l亚乙基l酰肼将3-巯基-3-甲基-丁酸2-[(E)-l-[4-(4-羟基-4-氧代丁氧基)苯基]亚乙基]酰肼(实例1或2)(3.69g，10.48mmol)与N-羟基琥珀酰亚胺(1.386g，12.05mmol)的混合物悬浮于二噁烷(60mL)中，经15分钟逐滴添加于二噁烷(30mL)中的DCC(2.482g，12.05mmol)。将反应混合物于室温下搅拌24小时。将沉淀的二环己基脲滤出且以二噁烷(2xl0mL)洗涤。将滤液浓縮为约50mL且在搅拌下添加水(250mL)。将所得白色固体收集于布赫纳漏斗上，以水(2x50mL)洗涤且在真空中在室温下干燥。向所述白色固体中添加MeCN(60mL)且将混合物在5(TC下加热直至其变成溶液，添加异丙醇(IPA)(400mL)。随后将混合物冷却至0-5。C历时2小时。将固体收集于布赫纳漏斗上，以冷IPA(2x20mL)洗涤且在真空中干燥以提供呈白色固体状的实例产物(3.58g，70%)。MS:450(M++l)。实例5与N-乙酰基-LL-E33288V縮合的3-巯基-3-甲基-丁酸2-(E)-l-[4-[4-[(2，5-二氧代-1-吡咯啶基)氧基-4-氧代丁氧基1苯基1亚乙基]酰肼<formula>formulaseeoriginaldocumentpage50</formula>向0.505g(1.12mmol)3-巯基-3-甲基-丁酸2-[(E)-l-[4-[4-[(2,5-二氧代-l-吡咯啶基)氧基]-4-氧代丁氧基]苯基]亚乙基]酰肼(实例4)于50ml乙腈中的搅拌溶液中添加0.123gU.16mmo1)碳酸钠，接着在平缓回流下加热1小时，冷却至室温且过滤。将滤液冷却至-15。C且经20分钟缓慢逐滴添加1.4969g(1.1mmol)N-乙酰基-LL-E33288Yi1于5ml乙腈中的溶液且持续搅拌约1.5小时。使反应混合物升温至室温且搅拌约3小时。将挥发物在真空中蒸发以获得残余物，将所述残余物储存于冷藏器中。向所述残余物中添加25ml乙酸乙酯，接着储存于冷藏器中历时约1小时。将反应混合物过滤且蒸发乙酸乙酯以获得残余物，将所述残余物溶解于10ml乙酸乙酯中且加样到110g硅胶管柱上。将管柱以1-5%于乙酸乙酯中的甲醇洗脱以获得0.322g如由HPLC所测定具有65.27%纯度的所需产物。实例6与N-乙酰基-LL-E33288y縮合的3-巯基-3-甲基-丁酸2-[(E)-l-[4-4-[(2，5-二氧代-1-吡咯啶基)氧基-4-氧代丁氧基]苯基1亚乙基1酰肼<formula>formulaseeoriginaldocumentpage51</formula>将3-巯基-3-甲基-丁酸2-[(E)-l-[4-[4-[(2,5-二氧代-l-吡咯啶基)氧基]-4-氧代丁氧基]苯基]亚乙基]酰肼(450mg，lmmol)(实例4)于含有Et3N(0.35mL)的CH3CN(100mL)中的溶液以N-乙酰基-LL-E33288yi1(500mg，0.355mmol)于CH3CN(100mL)中的溶液在0-5'C下处理。随后将混合物再搅拌1小时，同时以冰浴冷却。将溶剂移除且将残余物于硅胶管柱上以CH2Cl2-MeOH洗脱纯化以提供呈白色固体状的实例产物(340mg，54%)。MS:1780(M++l)。实例7与N-乙酰基-LL-E33288y卩縮合的3-巯基-3-甲基-丁酸2-[(E)-l-[4-(4-羟基-4-氧代丁氧基)苯基]亚乙基酰肼<formula>formulaseeoriginaldocumentpage51</formula>在-5。c下向N-乙酰基-LL-E33288yi1(200mg，0.142mmol)于10ml乙腈/乙酸乙酯(1:1)中的搅拌溶液中以每10分钟1ml等分试样的速率添加3-巯基-3-甲基-丁酸2-[(E)-l-[4-(4-羟基-4-氧代丁氧基)苯基]亚乙基]酰肼(150mg，0.43mmo1)(实例1或2)于10ml乙腈/乙酸乙酯(1:1)和0.06ml三乙胺中的溶液。最后添加3-巯基-3-甲基-丁酸2-[(E)-l-[4-(4-羟基-4-氧代丁氧基)苯基]亚乙基]酰肼溶液之后，将溶液在-5'C下搅拌两小时。将溶剂在减压下移除且将残余物于硅胶管柱上以CH2Cb-MeOH洗脱纯化以提供呈白色固体状的实例产物。MS1684(M++l)。实例8与N-乙酰基-LL-E33288y縮合的3-巯基-3-甲基-丁酸2-(E)-l-[4-4-[(2，5-二氧代-1-吡咯啶基)氧基]-4-氧代丁氧基苯基亚乙基1酰肼在25'C下向具有N-乙酰基-LL-E33288^的3-巯基-3-甲基-丁酸2-[(E)-l-[4-(4-羟基-4-氧代丁氧基)苯基]亚乙基]酰肼(100mg，0.059mmol)于0.5mLDMF和1.8mL乙腈中的搅拌溶液中添加N-羟基琥珀酰亚胺(236mg，2.05mmol)和l-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基-碳化二亚胺(160mg，0.835mmol)。添加之后，将溶液在25。C下搅拌1小时。将乙腈在减压下移除且将所得DMF溶液添加至3mL搅拌水中以获得沉淀。将沉淀过滤，干燥且于硅胶管柱上以CH2Cl2-异丙醇洗脱纯化以获得呈白色固体状的实例产物(53mg，50%)。MS:1780(M++l)。权利要求1.一种制备式(I)化合物的方法式(I)其中Z选自由以下各基团组成的群组和Alk1为2至6个碳原子的支链或非支链亚烷基链；Sp1选自-S-、-O-、-CONH-、-NHCO-和-NR′-；Z1为H或1至5个碳原子的烷基；Ar为视情况经一个、两个或三个独立地选自1至6个碳原子的烷基、1至5个碳原子的烷氧基、1至4个碳原子的硫烷氧基、卤素、硝基、-COOR′、-CONHR′、-O(CH2)nCOOR′、-S(CH2)nCOOR′、-O(CH2)nCONHR′和-S(CH2)nCONHR′的基团取代的1，2-、1，3-或1，4-亚苯基；或为视情况经一个、两个、三个或四个独立地选自1至6个碳原子的烷基、1至5个碳原子的烷氧基、1至4个碳原子的硫烷氧基、卤素、硝基、-COOR′、-CONHR′、-O(CH2)nCOOR′、-S(CH2)nCOOR′、-O(CH2)nCONHR′和-S(CH2)nCONHR′的基团取代的1，2-、1，3-、1，4-、1，5-、1，6-、1，7-、1，8-、2，3-、2，6-或2，7-亚萘基；n为0至5的整数；R′为视情况经-OH、1至4个碳原子的烷氧基、1至4个碳原子的硫烷氧基中的一或两个基团取代的1至5个碳原子的直链或支链烷基；Sp为1至18个碳原子的直链或支链二价或三价烷基、二价或三价芳基或杂芳基、3至18个碳原子的二价或三价环烷基或二价或三价杂环烷基、二价或三价芳基-烷基(C1-C18)基团或二价或三价杂芳基-烷基(C1-C18)基团、二价或三价环烷基-烷基(C1-C18)基团或二价或三价杂环烷基-烷基(C1-C18)基团或2至18个碳原子的二价或三价不饱和烷基，其中杂芳基为呋喃基、噻吩基、N-甲基吡咯基、吡啶基、N-甲基咪唑基、噁唑基、嘧啶基、喹啉基、异喹啉基、N-甲基卡唑基(N-methylcarbazoyl)、氨基香豆素基或吩嗪基，且其中如果Sp为三价基团，那么其可另外经1至5个碳原子的二烷基氨基、1至5个碳原子的烷氧基、羟基或1至5个碳原子的烷硫基取代；W′为R1为或CH3；R2为或H；R3为或H；R4为或H；R6或R7为H或R5为-CH3、-C2H5或-CH(CH3)2；X为碘或溴原子；R5′为氢或基团RCO，其中R为氢、1至10个碳原子的支链或非支链烷基、2至10个碳原子的亚烷基、6至11个碳原子的芳基、(C6-C11)芳基-烷基(C1-C5)基团或杂芳基或杂芳基-烷基(C1-C5)基团，其中杂芳基定义为2-或3-呋喃基、2-或3-噻吩基、2-或3-(N-甲基吡咯基)、2-、3-或4-吡啶基、2-、4-或5-(N-甲基咪唑基)、2-、4-或5-噁唑基、2-、3-、5-或6-嘧啶基、2-、3-、4-、5-、6-、7-或8-喹啉基、或1-、3-、4-、5-、6-、7-或8-异喹啉基，所有芳基和杂芳基视情况经一或多个羟基、氨基、羧基、卤基、硝基、1至3个碳原子的(C1-C3)烷氧基或1至5个碳原子的硫烷氧基取代；且Q选自由-NNHCO-、-NNHCS-、-NNHCONH-、-NNHCSNH-和-NO-组成的群组；所述方法包含以下步骤a.使下式的羧酸与下式的巯基化合物H2Q—Sp—SH，于醇溶剂中在alk2为1至4个碳原子的烷基羧酸alk2CO2H存在下，在约20℃至70℃下反应约1至24小时，其中Alk1、Sp1、Ar、Z1、Q和Sp如上文所定义，以产生下式的双连接子-羧酸，其中所述巯基化合物与羧酸以约1.21的比率存在b.分离步骤(a)的所述双连接子-羧酸；c.使步骤(b)的所述经分离双连接子-羧酸与至少3倍摩尔过量的N-羟基琥珀酰亚胺、2，3，5，6-四氟苯酚、五氟苯酚、4-硝基苯酚、2，4-二硝基苯酚或N-羟基磺基琥珀酰亚胺在1，3-二环己基碳化二亚胺(DCC)、1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳化二亚胺(EDCI)或碳酸N，N′-二琥珀酰亚胺基酯存在下，于含有0-50％N，N-二甲基甲酰胺(DMF)的惰性溶剂中反应以产生下式的三连接子-活化酯其中Z如上文所定义；d.使步骤c中所形成的所述三连接子-活化酯与甲基三硫基抗肿瘤抗生素CH3-S-S-S-W′在碱或有机碱存在下与甲基三硫基抗肿瘤抗生素CH3-S-S-S-W′在惰性有机溶剂中反应以产生下式的活化酯，其中步骤c中的所述三连接子-活化酯与CH3-S-S-S-W′的比率为3.31且反应温度≤5℃e.分离步骤(d)的所述活化酯且纯化以获得式(I)的抗肿瘤抗生素式(I)2.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(e)的所述纯化包含使用具有pH值为约7.0至9.0的移动相的逆相高效液相色谱，接着使用正相色谱。3.根据权利要求l所述的方法，其中all^为3个碳原子；Sp'为-0-;Z'为甲基;Ar为未经取代的1,4-亚苯基；Sp为4个碳原子；R3为H;Q为<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>Rs为C2H5;Rs'为-C(O)-R;R为甲基;且Z为<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>4.一种制备式(I)的抗肿瘤抗生素的方法:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>式(I)其中Z选自由以下各基团组成的群组Alk1为2至6个碳原子的支链或非支链亚烷基链；8"1选自-3-、-O-、-CONH-、-NHCO-和-NR'-;Z1为H或1至5个碳原子的烷基；Ar为视情况经一个、两个或三个独立地选自l至6个碳原子的垸基、l至5个碳原子的烷氧基、l至4个碳原子的硫烷氧基、卤素、硝基、-COOR'、-CONHR'、-0(CH2)nCOOR'、-S(CH2)nCOOR，、-0(CH2)nCONHR，-S(CH2)nCONHR'的基团取代的1,2-、1,3-或1,4-亚苯基；或为视情况经一个、两个、三个或四个独立地选自l至6个碳原子的烷基、l至5个碳原子的烷氧基、1至4个碳原子的硫垸氧基、卣素、石肖基、陽COOR'、-CONHR'、-0(CH2)nCOOR'、-S(CH2)nCOOR'、-0(CH2)nCONHR'和-S(CH2)。CONHR'的基团取代的1,2-、1,3-、1,4-、1,5-、1,6-、1,7-、1,8-、2,3-、2,6-或2,7-亚萘基；n为0至5的整数；R'为视情况经-OH、l至4个碳原子的垸氧基、1至4个碳原子的硫烷氧基中的一或两个基团取代的1至5个碳原子的直链或支链烷基；Sp为1至18个碳原子的直链或支链二价或三价垸基、二价或三价芳基或杂芳基、3至18个碳原子的二价或三价环烷基或二价或三价杂环烷基、二价或三价芳基-烷基(C广ds)基团或二价或三价杂芳基-烷基(Ci-C18)基团、二价或三价环烷基-烷基(C,-ds)基团或二价或三价杂环烷基-烷基(Q-d8)基团或2至18个碳原子的二价或三价不饱和垸基，其中杂芳基为呋喃基、噻吩基、N-甲基吡咯基、吡啶基、N-甲基咪唑基、噁唑基、嘧啶基、喹啉基、异喹啉基、N-甲基卡唑基、氨基香豆素基或吩嗪基，且其中如果Sp为三价基团，那么其可另外经1至5个碳原子的二烷基氨基、1至5个碳原子的烷氧基、羟基或1至5个碳原子的烷硫基取代；W'为<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>Re或R,为H或CH々R5为-CH3、-C2H5或-CH(CH3)2;X为碘或溴原子；Rs'为氢或基团RCO，其中R为氢、1至IO个碳原子的支链或非支链垸基、2至IO个碳原子的亚垸基、6至11个碳原子的芳基、(Cs-Cn)芳基-烷基(d-Cs)基团或杂芳基或杂芳基-烷基(Q-C5)基团，其中杂芳基定义为2-或3-呋喃基、2-或3-噻吩基、2-或3-(N-甲基吡咯基)、2-、3-或4-吡啶基、2-、4-或5-(N-甲基咪唑基)、2-、4-或5-噁唑基、2-、3-、5-或6-嘧啶基、2-、3-、4-、5-、6-、7-或8-喹啉基、或l-、3-、4-、5-、6-、7-或8-异喹啉基，所有芳基和杂芳基视情况经一或多个羟基、氨基、羧基、卤基、硝基、1至3个碳原子的(d-C3)垸氧基或1至5个碳原子的硫烷氧基取代；且Q选自由-NNHCO-、-NNHCS隱、-NNHCONH-、-NNHCSNH-和-NO-组成的群组；所述方法包含以下步骤a.使下式的羧酸与下式的巯基化合物H2Q~Sp—SH，于醇溶剂中在alk2为1至4个碳原子的垸基羧酸alk2C02H存在下，在约2(TC至70。C下反应约1至24小时，其中Alk1、Sp1、Ar、Z1、Q和Sp如上文所定义，以产生下式的双连接子-羧酸，其中所述巯基化合物与羧酸以约1.2:1的比率存在:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>b.分离步骤(a)的所述双连接子-羧酸；c.使步骤(b)的所述经分离双连接子-羧酸与甲基三硫基抗肿瘤抗生素CH3-S-S-S-W'在碱或有机碱存在下与甲基三硫基抗肿瘤抗生素CH3-S-S-S-W'于惰性有机溶剂中反应；d.使步骤(c)的所述化合物与至少3倍摩尔过量的N-羟基琥珀酰亚胺、2,3,5,6-四氟苯酚、五氟苯酚、4-硝基苯酚、2,4-二硝基苯酚或N-羟基磺基琥珀酰亚胺在1,3-二环己基碳化二亚胺(DCC)、l-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳化二亚胺(EDCI)或碳酸N,N'-二琥珀酰亚胺基酯存在下，于含有0-50。/。N，N-二甲基甲酰胺(DMF)的惰性溶剂中反应且纯化以获得式(I)的抗肿瘤抗生素<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>5.根据权利要求4所述的方法，其中步骤(e)的所述纯化包含使用具有pH值为约7.0至9.0的移动相的逆相高效液相色谱，接着使用正相色谱。6.根据权利要求4所述的方法，其中alk1为3个碳原子；Sp1为-0-;Z'为甲基;Ar为未经取代的1,4-亚苯基；Sp为4个碳原子；R3为H;Q为NNHC(O)-;<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>7.—种制备式(I)的抗肿瘤抗生素的方法:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>式(I)其中Z选自由以下各基团组成的群组<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>Alk1为2至6个碳原子的支链或非支链亚垸基链；Sp'选自-S-、-O-、-CONH-、-NHCO-和-NR'-;21为11或1至5个碳原子的垸基；Ar为视情况经一个、两个或三个独立地选自1至6个碳原子的烷基、1至5个碳原子的烷氧基、1至4个碳原子的硫烷氧基、卤素、硝基、-COOR'、-CONHR'、-0(CH2)nCOOR，、-S(CH2)nCOOR，、-0(CH2)nCONHRm-S(CH2)nCONHR'的基团取代的l，2-、1，3-或1，4-亚苯基；或为视情况经一个、两个、三个或四个独立地选自l至6个碳原子的垸基、l至5个碳原子的烷氧基、1至4个碳原子的硫烷氧基、卣素、石肖基、-COOR'、-CONHR'、-0(CH2)nCOOR'、-S(CH2)nCOOR'、-0(CH2)nCONHR，和-S(CH2)nCONHR'的基团取代的1,2-、1,3國、1,4國、1，5-、1,6-、1,7-、1,8-、2，3-、2,6-或2,7-亚萘基；n为0至5的整数；R'为视情况经-OH、l至4个碳原子的烷氧基、1至4个碳原子的硫垸氧基中的一或两个基团取代的1至5个碳原子的直链或支链烷基；Sp为1至18个碳原子的直链或支链二价或三价烷基、二价或三价芳基或杂芳基、3至18个碳原子的二价或三价环烷基或二价或三价杂环烷基、二价或三价芳基-烷基(d-C18)基团或二价或三价杂芳基-烷基(d-d"基团、二价或三价环烷基-垸基(d-ds)基团或二价或三价杂环烷基-垸基(CrC18)或2至18个碳原子的二价或三价不饱和垸基，其中杂芳基为呋喃基、噻吩基、N-甲基吡咯基、吡啶基、N-甲基咪唑基、噁唑基、喷啶基、喹啉基、异喹啉基、N-甲基卡唑基、氨基香豆素基或吩嗪基，且其中如果Sp为三价基团，那么其可另外经1至5个碳原子的二垸基氨基、l至5个碳原子的烷氧基、羟基或1至5个碳原子的垸硫基取代；W'为CHRs为-CH3、-<:2115或-(:11(013)2;X为碘或溴原子；Rs'为氢或基团RCO，其中R为氢、l至IO个碳原子的支链或非支链烷基、2至IO个碳原子的亚垸基、6至11个碳原子的芳基、(C6-C)芳基-垸基(d-Cs)基团或杂芳基或杂芳基-垸基(C,-Cs)基团，其中杂芳基定义为2-或3-呋喃基、2-或3-噻吩基、2-或3-(N-甲基吡咯基)、2-、3-或4-吡啶基、2-、4-或5-(N-甲基咪唑基)、2-、4-或5-噁唑基、2-、3-、5-或6-嘧啶基、2-、3-、4-、5-、6-、7-或8-喹啉基、或l-、3-、4-、5-、6-、7-或8-异喹啉基，所有芳基和杂芳基视情况经一或多个羟基、氨基、羧基、卤基、硝基、1至3个碳原子的(d-C3)垸氧基或1至5个碳原子的硫烷氧基取代；且Q选自由-NNHCO-、-NNHCS-、-NNHCONH-、-NNHCSNH-和-NO-组成的群组；所述方法包含以下步骤a.使下式的羧酸与下式的巯基化合物H2Q~Sp—SH，于醇溶剂中在alk2为1至4个碳原子的垸基羧酸alk2C02H存在下，在约20'C至70。C下反应约1至24小时，其中Alk1、Sp1、Ar、Z1、Q和Sp如上文所定义，以产生下式的双连接子-羧酸H0^^AIk1、SP1Ar^Q_Sp—SH;b.分离步骤(a)的所述双连接子-羧酸；c.使步骤(b)的所述经分离双连接子-羧酸与N-羟基琥珀酰亚胺、2,3,5，6-四氟苯酚、五氟苯酚、4-硝基苯酚、2，4-二硝基苯酚或N-羟基磺基琥珀酰亚胺中至少一者在1,3-二环己基碳化二亚胺(DCC)、l-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳化二亚胺(EDCI)或碳酸N,N'-二琥珀酰亚胺基酯存在下，于含有0-50。/。N,N-二甲基甲酰胺(DMF)的惰性溶剂中反应以产生下式的三连接子-活化酯<formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula>其中Z如上文所定义；d.使步骤C中的所述三连接子-活化酯在碱或有机碱存在下与甲基三硫基抗肿瘤抗生素CH3-S-S-S-W'于惰性有机溶剂中反应以产生下式的活化酯e.分离步骤(d)的所述活化酯且纯化以获得式(I)的抗肿瘤抗生素:8.根据权利要求l所述的方法，其中:alk'为3个碳原子；Sp!为-0-;Zi为甲基;Ar为未经取代的1,4-亚苯基；Sp为4个碳原子；R3为H;Q为丽HC(O)-;式(I)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula>Rs为C2H5;Rs'为-C(0)-R;R为甲基；且Z为9.根据权利要求1所述的方法，其中Alk1为2至5个碳原子的亚烷基，且Sp1为氧原子。10.根据权利要求9所述的方法，其中Alk'为3个碳原子的亚烷基。11.根据权利要求l所述的方法，其中Z'为l至3个碳原子的垸基。12.根据权利要求1所述的方法，其中Ar为1,2-、1,3-或1,4-亚苯基或1,2-、1,3-、1,4-、1,5-、1,6-、1,7-、1,8-、2,3-、2,6-或2,7-亚萘基。13.根据权利要求12所述的方法，其中Ar为1,4-亚苯基。14.根据权利要求1所述的方法，其中Q为-NNHCO-。15.根据权利要求1所述的方法，其中Sp为1至12个碳原子的直链或支链二价或三价垸基。16.根据权利要求15所述的方法，其中Sp为1至6个碳原子的直链或支链二价或三价垸基。17.根据权利要求1所述的方法，其中所述醇溶剂为甲醇。18.根据权利要求l所述的方法，其中所述惰性溶剂为乙腈。19.根据权利要求1所述的方法，其中烷基羧酸为乙酸。20.根据权利要求1所述的方法，其中所述惰性有机溶剂为乙腈。21.根据权利要求1所述的方法，其中Z为<formula>formulaseeoriginaldocumentpage17</formula>22.—种制备下式的三连接子-活化酯的方法:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage17</formula>其中Z选自由以下各基团组成的群组:Alk1为2至6个碳原子的支链或非支链亚垸基链；Sp!选自墨S陽、-O-、隱CONH-、-NHCO陽和-NR'-;Z1为H或1至5个碳原子的垸基；Ar为视情况经一个、两个或三个独立地选自1至6个碳原子的垸基、l至5个碳原子的烷氧基、1至4个碳原子的硫垸氧基、卤素、硝基、-COOR'、-CONHR'、-0(CH2)nCOOR'、-S(CH2)nCOOR'、-0(CH2)nCONHR，-S(CH2)nCONHR'的基团取代的1，2-、1，3-或1，4-亚苯基；或为视情况经一个、两个、三个或四个独立地选自l至6个碳原子的烷基、l至5个碳原子的烷氧基、1至4个碳原子的硫烷氧基、卤素、石肖基、-COOR'、-CONHR'、-0(CH2)nCOOR'、-S(CH2)nCOOR'、-0(CH2)nCONHR'和-S(CH2)nCONHR'的基团取代的1,2-、1,3-、1,4-、1,5-、1,6-、1,7-、1,8-、2,3-、2，6-或2,7-亚萘基；n为0至5的整数；R'为视情况经-OH、l至4个碳原子的垸氧基、1至4个碳原子的硫垸氧基中的一或两个基团取代的1至5个碳原子的直链或支链烷基；Sp为1至18个碳原子的直链或支链二价或三价烷基、二价或三价芳基或杂芳基、3至18个碳原子的二价或三价环垸基或二价或三价杂环垸基、二价或三价芳基-垸基(CVC18)基团或二价或三价杂芳基-烷基(C广ds)基团、二价或三价环烷基-垸基(Q-d8)基团或二价或三价杂环垸基-垸基(d-C18)基团或2至18个碳原子的二价或三价不饱和垸基，其中杂芳基为呋喃基、噻吩基、N-甲基吡咯基、吡啶基、N-甲基咪唑基、噁唑基、嘧啶基、喹啉基、异喹啉基、N-甲基卡唑基、氨基香豆素基或吩嗪基，且其中如果Sp为三价基团，那么其可另外经1至5个碳原子的二烷基氨基、1至5个碳原子的烷氧基、羟基或1至5个碳原子的烷硫基取代；W'为<formula>formulaseeoriginaldocumentpage18</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage19</formula>R5为-CH3、-C2H5或-CH(CH3)2;X为碘或溴原子；R5'为氢或基团RCO，其中R为氢、1至IO个碳原子的支链或非支链烷基、2至IO个碳原子的亚垸基、6至11个碳原子的芳基、(C6-C")芳基-垸基(d-Cs)基团或杂芳基或杂芳基-垸基(CrC5)基团，其中杂芳基定义为2-或3-呋喃基、2-或3-噻吩基、2-或3-(N-甲基吡咯基)、2-、3-或4-吡啶基、2-、4-或5-(N-甲基咪唑基)、2-、4-或5-噁唑基、2-、3-、5-或6-瞎、啶基、2-、3-、4-、5-、6-、7-或8-喹啉基、或l-、3-、4-、5-、6-、7-或8-异喹啉基，所有芳基和杂芳基视情况经一或多个羟基、氨基、羧基、卤基、硝基、1至3个碳原子的(d-C3)烷氧基或1至5个碳原子的硫烷氧基取代；且Q选自由-NNHCO-、-NNHCS-、-NHNCONH-、-NNCSNH-禾卩-NO-组成的群组；所述方法包含以下步骤a.使下式的羧酸<formula>formulaseeoriginaldocumentpage19</formula>与下式的巯基化合物:H2Q~Sp—SH，于醇溶剂中在al]^为1至4个碳原子的垸基羧酸all^C02H存在下，在约2(TC至7CTC下反应约1至24小时，其中Alk1、Sp1、Ar、Z1、Q和Sp如上文所定义，以产生下式的双连接子-羧酸-<formula>formulaseeoriginaldocumentpage20</formula>b.分离步骤(a)的所述双连接子-羧酸；c.使来自步骤(b)的所述双连接子-羧酸在碱或有机碱存在下与甲基三硫基抗肿瘤抗生素CH3-S-S-S-W'于惰性有机溶剂中反应以产生下式的双连接子-甲基三硫基抗肿瘤抗生素d.使步骤(c)的所述经分离双连接子-甲基三硫基抗肿瘤抗生素与N-羟基琥珀酰亚胺、2,3,5,6-四氟苯酚、五氟苯酚、4-硝基苯酚、2,4-二硝基苯酚或N-羟基磺基琥珀酰亚胺在1,3-二环己基碳化二亚胺(DCC)、l-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳化二亚胺(EDCI)或碳酸N,N'-二琥珀酰亚胺基酯存在下，于含有0-50%N,N-二甲基甲酰胺(DMF)的惰性溶剂中反应以产生下式的三连接子-活化酯<formula>formulaseeoriginaldocumentpage20</formula>23.根据权利要求17所述的方法，其中Alk1为2至5个碳原子的亚烷基，且Sp1为氧,^^Alk，、Sp，、ArQ—Sp—SH原子。24.—种制备下式的三官能连接子中间体的方法:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage21</formula>其中Alk1为2至6个碳原子的支链或非支链亚烷基链；Sp!选自-S國、-O-、-CONH-、-NHCO-和-NR'-;Z'为H或1至5个碳原子的垸基；Ar为视情况经一个、两个或三个独立地选自1至6个碳原子的烷基、l至5个碳原子的垸氧基、1至4个碳原子的硫烷氧基、卤素、硝基、-COOR'、-CONHR'、-0(CH2)nCOOR'、-S(CH2)nCOOR'、-0(CH2)nCONHR^P-S(CH2)nCONHR'的基团取代的1，2-、1，3-或1,4-亚苯基；或为视情况经一个、两个、三个或四个独立地选自l至6个碳原子的烷基、l至5个碳原子的烷氧基、l至4个碳原子的硫垸氧基、卣素、石肖基、-COOR'、隱CONHR'、-0(CH2)nCOOR'、-S(CH2)nCOOR'、-0(CH2)nCONHR'和-S(CH2)nCONHR'的基团取代的1,2-、1，3-、1，4-、1,5-、1，6-、1，7-、1,8-、2,3-、2，6-或2，7-亚萘基；n为0至5的整数；R'为视情况经-OH、l至4个碳原子的烷氧基、1至4个碳原子的硫烷氧基中的一或两个基团取代的1至5个碳原子的直链或支链烷基；Sp为1至18个碳原子的直链或支链二价或三价烷基、二价或三价芳基或杂芳基、3至18个碳原子的二价或三价环烷基或二价或三价杂环烷基、二价或三价芳基-烷基(CrC18)基团或二价或三价杂芳基-垸基(C广ds)基团、二价或三价环垸基-烷基(d-ds)基团或二价或三价杂环烷基-烷基(d-ds)基团或2至18个碳原子的二价或三价不饱和烷基，其中杂芳基为呋喃基、噻吩基、N-甲基吡咯基、吡啶基、N-甲基咪唑基、噁唑基、嘧啶基、喹啉基、异喹啉基、N-甲基卡唑基、氨基香豆素基或吩嗪基，且其中如果Sp为三价基团，那么其可另外经1至5个碳原子的二垸基氨基、1至5个碳原子的烷氧基、羟基或1至5个碳原子的垸硫基取代；Q选自由-NNHCO-、-NNHCS-和-NNHCONH-组成的群组；Z选自由以下各基团组成的群组<formula>formulaseeoriginaldocumentpage22</formula>禾口<formula>formulaseeoriginaldocumentpage22</formula>所述方法包含以下步骤a.使下式的羧酸-<formula>formulaseeoriginaldocumentpage22</formula>与下式的巯基化合物H2Q~Sp—SH，于醇溶剂中在alk2为1至4个碳原子的垸基羧酸alk2C02H存在下，在约2(TC至70。C下反应约1至24小时，其中Alk1、Sp1、Ar、Z1、Q和Sp如上文所定义，以产生下式的双连接子-羧酸<formula>formulaseeoriginaldocumentpage22</formula>b.分离步骤(a)的所述双连接子-羧酸；c.使步骤(b)的所述经分离双连接子-羧酸与N-羟基琥珀酰亚胺、2,3,5,6-四氟苯酚、五氟苯酚、4-硝基苯酚、2,4-二硝基苯酚或N-羟基磺基琥珀酰亚胺在1,3-二环己基碳化二亚胺(DCC)、l-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳化二亚胺(EDCI)或碳酸N,N'-二琥珀酰亚胺基酯存在下，于含有0-50%DMF的惰性溶剂中反应以产生下式的三官能连接子中间体<formula>formulaseeoriginaldocumentpage23</formula>全文摘要本发明描述使用双官能和三官能连接子(linker)中间体汇集合成式(I)1卡奇霉素(calicheamicin)衍生物和类似物的方法。文档编号C07H15/203GK101389639SQ200780006202公开日2009年3月18日申请日期2007年2月16日优先权日2006年2月21日发明者古简欣,贾斯廷·基思·莫兰申请人:惠氏公司