用于治疗杜兴氏肌营养不良症的化合物的多晶型体的制作方法

专利名称：：用于治疗杜兴氏肌营养不良症的化合物的多晶型体的制作方法
技术领域：
：本发明提供了用于治疗杜兴氏肌营养不良症的化合物的多晶型形式。
背景技术：
：杜兴氏肌营养不良症(DMD)是一种常见的遗传性神经肌肉疾病，其与肌肉功能的渐进性退化有关，该疾病在150年前由法国神经病学家杜兴氏deBoulogne首次描述，并以他命名。DMD的特征为X连锁隐性障碍，其通过抗肌萎缩蛋白基因中的突变引起，每3500男性中便影响1人。该基因是人类基因组中最大的，具有260万个DNA碱基对并包含79个外显子。大约60%的抗肌萎缩蛋白基因突变是导致下游移码错误的较大插入或删除，而大约40%为点突变或较小的移码重排。绝大部分DMD患者缺乏抗肌萎缩蛋白。Becker肌营养不良症由抗肌萎缩蛋白的数量减少或大小改变引起的DMD中较为温和的形式。DMD较高的发病率(每10000个精子或卵子中有1个)表示遗传筛选绝对无法消除该疾病，因此极度需要有效的疗法。现有许多天然或工程改造的DMD动物模型，并为临床前研究提供了支樹Allamand,V.&Campbell,K.P.Animalmodelsformusculardystrophy:valuabletoolsforthedevelopmentoftherapies.Tf謹.Mo/.9，2459-2467(2000)。尽管小鼠、猫和狗模型均具有DMD基因突变并显示了与人类中所见类似的生物化学肌营养不良，它们在表型上具有令人惊奇的较大变化。与人类似，犬(金毛猎犬肌营养不良症和德国短毛指示犬)模型具有严重的表型；这些狗通常死于心力衰竭。狗提供了对人类疾病最佳的表型模拟，并被认为是临床前研究的高基准。不幸的是，饲养这类动物较为昂贵和困难，且仔畜之间的临床时间进程可能不同。w血小鼠由于其可得性、妊娠时间短、成熟快以及相对较低的成本而成为最广泛使用的模型(Bulfield，G.,Siller，W.G.，Wight,P.A.&Moore，K.J.Xchromosome-linkedmusculardystrophy(w血)inthemouse./Voc.7VaZ/Jo^.1189-1192(1984))。由于20年前对DMD基因的发现，在临床前动物研究中对DMD的治疗已经取得了不同程度的成功，部分已经进入人体阶段。目前的治疗策略可大致分为三类第一，基因疗法；第二，细胞疗法；最后，药物疗法。基于基因和细胞的疗法(特别是在疾病早期时)的主要优点是能免除对对继发性缺陷/病理(例如，挛缩)单独纠正的需求。不幸的是，这些方法面临着一系列技术障碍。已报道了对病毒载体、成肌细胞和新合成的抗肌萎缩蛋白的免疫应答，除了毒性外，还缺乏稳定表达，且递送困难。治疗肌营养不良症的药物方法与基于基因和细胞的方法的不同之处在于并非被设计来传递缺失的基因和/或蛋白。一般而言，药物策略使用药物/分子以通过例如减少炎症、增加钙体内平衡和增加肌肉祖细胞(progenitor)增殖和定向等手段来尝试改善表型。该种策略提供的优势在于，它们易于全身递送，并能防止与载体和基于细胞的疗法相关的免疫和/或毒性问题。尽管用皮质类固醇和色甘酸钠减少炎症、用硝苯呋海因维持钙稳态以及用氨哮素提高肌肉强度的考察均产生了较理想的结果，但这些潜在疗法均未显示能有效治疗DMD。一种替代性的药物疗法是上调疗法(upregulationtherapy)。上调疗法基于提高替代基因的表达以替换缺陷基因，并在免疫应答针对之前缺失的蛋白时特别有益。上调肌营养相关蛋白(utrophin)，一种抗肌萎缩蛋白的常染色体同种异性基因，已被提议作为DMD的潜在疗法(Perkins&Davies,Ne扁musculDisord，SI:S78-S89(2002),Khurana&Davies，NatRevDrugDiscov2:379-390(2003))。当肌营养相关蛋白在转基因m血小鼠中过量表达时，它定位在肌肉细胞的肌纤维膜上，并恢复抗肌萎缩蛋白相关的蛋白络合物(DAPC)的組分，DAPC可防止营养不良的形成并由此导致骨骼肌肉的功能改善。已表明在狗中用腺病毒递送肌营养相关蛋白可防止发病。在小鼠模型中，出生后肌营养相关蛋白表达立即上升是有效的，且当肌营养相关蛋白普遍表达时未观察到毒性，这为将该疗法转用至人体提供了前景。将内源性肌营养相关蛋白的上调至充分的水平以减少发病可通过微小的可扩散化合物的递送得以实现。发明详述已发现式I的化合物(5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑)在治疗杜兴氏肌营养不良症中具有优异的性能(参见，例如，国际专利申请公布WO2007/091106)。式I的化合物$=5-乙基磺酰基；119=2-萘-2-基)可根据如下步骤合成如WO2007/091106(第51页)所示微波，二噁烷21<FC,rOH，(方法IB)錢t"『^",，f*0、X=OH或CI方法IB在第67-68页中针对2-千基-5-硝基苯并[d]噁唑具体描述如下"方法1B(化合物1)2-千基-5-硝基苯并[d]噁唑向含于二噁烷(2.5mL)的2-氨基-4-硝基苯酚(300mg，1.95mmo1)在室温下添加2-苯基乙酰氯(290pL，2.15mmo1)。将反应容器在微波中210。C加热15分钟。冷却后，将该混合物緩慢注入1M氢氧化钠水溶液(50mL)，过滤所得的沉淀并用水洗涤。通过柱层析以梯度洗脱(乙酸乙酯/己烷1:7v/v至乙酸乙酯/己烷1:5v/v)纯化所得的固体，以得到165mg(33。/o)标题化合物(LCMSRT二6.47min,MH+255.2)。'H匪R(DMSO):8.60(1H，d，J2.4Hz)，8.30(1H，dd，J9.02.4Hz),7.95(1H，d，J9.0Hz),7.43-7.27(5H,m)，4.44(2H,s)"可以用于上述方法以合成5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑(化合物l)的等同试剂为2-氨基-4-乙基磺酰基苯酚(而非2-氨基-4-硝基苯酚)和2-萘甲酰氯(而非2-苯基乙酰氯)。该合成教导本领域技术人员通过柱层析(乙酸乙酯/己烷1:7v/v至乙酸乙酯/己烷1:5v/v)纯化产物。这种纯化提供了主要由晶体形式II(对该晶体形式的定义参见下文)组成的晶体不纯状态的式I的化合物。药物管理部门对有关药物候选物的多晶型形式信息的需求日益增加。因此，本领域中存在对于将药物候选物制备为单一多晶型形式的方法的需求，以及对于具有有利特征的新型多晶形体形式药物的需求。相应地，本发明提供了具有有利特征的式I的化合物的多晶型以及制备所述多晶型的方法。在以下描迷中，X射线粉末衍射图型峰以。20表示，而拉曼光谱峰以cm"表示。在第一实施方案中提供了化合物5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑的多晶型形式(多晶型形式1)，其特征在于它才是^^包含在14.5±0.2处的峰的X射线粉末衍射图型。同样在第一实施方案中提供了化合物5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑的多晶型形式(多晶型形式1)，其特征在于它提供包含在16.7士0.2处的峰的X射线粉末衍射图型。同样在第一实施方案中提供了化合物5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噪唑的多晶型形式(多晶型形式1),其特征在于它提供包含在19.1±0.2处的峰的X射线粉末衍射图型。同样在第一实施方案中提供了化合物5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噪唑的多晶型形式(多晶型形式1)，其特征在于它提供包含在24.0±0.2处的峰的X射线粉末衍射图型。在该第一实施方案中的一个方面提供了化合物5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑的多晶型形式(多晶型形式1)，其特征在于它提供包含在14.5±0.2、16.7±0.2、19.1±0.2和24.0±0.2处的峰的X射线粉末衍射图型。在第二实施方案中提供了化合物5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑的多晶型形式(多晶型形式2)，其特征在于它提供包含在15.9±0.2、18.5±0.2和23.3士0.2处的峰的X射线粉末衍射图型。在第三实施方案中提供了化合物5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑的多晶型形式(多晶型形式3)，其特征在于它提供包含在12.1±0.2、17.4±0.2、22.7±0.2、25.0±0.2和26.5±0.2处的峰的X射线粉末衍射图型。在第四实施方案中提供了化合物5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑的多晶型形式(多晶型形式4)，其特征在于它提供包含在14.6±0.2、16.1±0.2、17.0士0.2、19.3±0.2和29.2士0.2处的峰的X射线粉末衍射图型。本公开将在这里参考附图进行具体描述，其中图1显示了多晶型形式l的X射线粉末衍射图型；图2显示了多晶型形式1的差示扫描量热图形；图3显示了多晶型形式1的热重量分析图形；图4显示了多晶型形式1的拉曼光谱；图5显示了多晶型形式1的光学显微镜图像；图6显示了多晶型形式2的X射线粉末衍射图型;图7显示了多晶型形式2的差示扫描量热图形；图8显示了多晶型形式2的热重量分析图形；图9显示了多晶型形式2的拉曼光谱；图10显示了多晶型形式2的光学显微镜图像；图11显示了多晶型形式3的X射线粉末衍射图型；图12显示了多晶型形式3的差示扫描量热图形；图13显示了多晶型形式3的热重量分析图形；图14显示了多晶型形式3的拉曼光谱；图15显示了多晶型形式3的光学显微镜图像；图16显示了多晶型形式4的X射线粉末衍射图型；图17显示了多晶型形式4的差示扫描量热图形；图18显示了多晶型形式4的热重量分析图形；图19显示了多晶型形式4的拉曼光谱；图20显示了多晶型形式4的光学显微镜图像；图21显示了多晶型形式l、2、3和4的X射线粉末衍射图型比较；图22显示了多晶型形式l、2、3和4的拉曼光谱比较；图23显示了多晶型形式1在甲醇中浆化之前和之后的X射线粉末衍射图型；图24显示了多晶型形式2在甲醇中浆化之前和之后的X射线粉末衍射图型；以及图25显示了多晶型形式1、2和3的混合物在甲醇中浆化之后的X射线粉末衍射图型；图26显示了萤光素酶报告体测定(鼠H2K细胞)。图27显示了剂量依赖型萤光素酶诱导。图28显示了用特异性针对小鼠肌营养相关蛋白抗体染色的TA肌肉切片的示例。图29显示暴露于CPD-A(V2和V3)的小鼠相对对照表现了上升的肌营养相关蛋白表达水平。在一个实施方案中4是供了多晶型形式1，其具有基本如图1所示的X射线粉末衍射图型。在另一实施方案中提供了多晶型形式1，其具有基本如图2所示的差示扫描量热图形。在另一实施方案中^是供了多晶型形式1，其具有基本如图3所示的热重量分析图形。在另一实施方案中提供了多晶型形式1，其具有基本如图4所示的拉曼光谱o在另一实施方案中4是供了多晶型形式2，其具有基本如图6所示的X射线粉末衍射图型。在另一实施方案中拔J共了多晶型形式2，其具有基本如图7所示的差示扫描量热图形。在另一实施方案中提供了多晶型形式2，其具有基本如图8所示的热重量分析图形。在另一实施方案中提供了多晶型形式2，其具有基本如图9所示的拉曼光谱。在另一实施方案中拔:供了多晶型形式3，其具有基本如图11所示的X射线粉末衍射图型。在另一实施方案中提供了多晶型形式3，其具有基本如图12所示的差示扫描量热图形。在另一实施方案中提供了多晶型形式3，其具有基本如图13所示的热重量分析图形。在另一实施方案中提供了多晶型形式3，其具有基本如图14所示的拉曼光谱。在另一实施方案中提供了多晶型形式4，其具有基本如图16所示的X射线粉末衍射图型。在另一实施方案中提供了多晶型形式4，其具有基本如图17所示的差示扫描量热图形。在另一实施方案中提供了多晶型形式4，其具有基本如图18所示的热重量分析图形。在另一实施方案中提供了多晶型形式4，其具有基本如图19所示的拉曼光谱。在一个实施方案中提供了式5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑的化合物，其具有包含60%以上的多晶型形式1、在另一实施方案中包含80%以上的多晶型形式1、且在另一实施方案中包含95%以上的多晶型形式1的结构。在一个实施方案中提供了式5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑的化合物，其具有仅包含多晶型形式1为唯一多晶型形式的结构。在一个实施方案中提供了式5-(乙基磧酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑的化合物，其具有包含60%以上的多晶型形式2、在另一实施方案中包含80%以上的多晶型形式2、且在另一实施方案中包含95%以上的多晶型形式2的结构。17在一个实施方案中提供了式5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑的化合物，其具有仅包含多晶型形式2为唯一多晶型形式的结构。在一个实施方案中提供了式5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑的化合物，其具有包含60°/。以上的多晶型形式3、在另一实施方案中包含80%以上的多晶型形式3、且在另一实施方案中包含95%以上的多晶型形式3的结构。在一个实施方案中提供了式5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑的化合物，其具有仅包含多晶型形式3为唯一多晶型形式的结构。在一个实施方案中提供了式5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑的化合物，其具有包含60%以上的多晶型形式4、在另一实施方案中包含80%以上的多晶型形式4、且在另一实施方案中包含95%以上的多晶型形式4的结构。在一个实施方案中提供了式5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑的化合物，其具有仅包含多晶型形式4为唯一多晶型形式的结构。还提^^了分别制备多晶型形式1、2、3和4的方法。在一个实施方案中提供了合成多晶型形式1的方法，其包括如下步骤(i)将5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑溶解于丙酮，然后添加异丙醇，直至形成固体产物，其中丙酮异丙醇的比例为20:80;或者将5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑溶解于乙酸乙酯，然后添加异丙醇，直至形成固体产物，其中乙酸乙酯异丙醇的比例为40:60;或者将5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噪唑溶解于二曱基甲酰胺，然后添加异丙醇，直至形成固体产物，其中二甲基甲酰胺异丙醇的比例为40:60;或者将5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑溶解于丙酮，然后添加乙醇，直至形成固体产物，其中丙酮乙醇的比例为40:60;或者将5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑在回流下溶解于丙酮，然后使溶液冷却到-10。C至-15。C，直至形成固体产物；然后(ii)分离该固体产物。在一个实施方案中提供了合成多晶型形式2的方法，其包括如下步骤(i)将5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑溶解于二甲苯，然后添加异丙醇，直至形成固体产物，其中二甲苯异丙醇的比例为20:80或80:20;然后(ii)分离该固体产物。在一个实施方案中提供了合成多晶型形式3的方法，其包括如下步骤(i)将5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑溶解于二甲苯，然后添加异丙醇，直至形成固体产物，其中二甲苯异丙醇的比例为60:40;然后(ii)分离该固体产物。在一个实施方案中提供了合成多晶型形式4的方法，其包括如下步骤(i)将5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑溶解于二甲基甲酰胺；然后(ii)蒸发去除二甲基甲酰胺以形成固体产物。5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑的各种固体形式的稳定性可通过将各种固体的样本及其混合物在甲醇中搅拌指定时间进行考察。已经发现，多晶型形式1相对5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑的已知形式具有更高的稳定性。多晶型形式l的这种特性有意义，因为以已知形式供应药物产品是非常重要的。因此，如果药物被提供为最稳定的多晶型体，它可保持所供应的该种形式并被患者摄入。就此而言，已经发现多晶型形式1在甲醇中25t:下浆化四天之前和之后保持了它的结构。相反地，以类似方式在甲醇中浆化后多晶型形式2转化成为多晶型形式l，而多晶型形式l、2和3的混合物同样转化为多晶型形式l。用于治疗DMD的式I的化合物的多晶型形式通常以药物組合物的形式被施用。因此，根据其它方面提供了药物組合物，其包含了与药学可接受的稀释剂或载体混合的少于80%w/w、在另一实施方案中少于50%w/w(例如0.1至20%)的式I的化合物的多晶型形式。还提供了生产该种药物组合物的方法，该方法包括将这些成分混合。可供使用的药物制剂、以及合适的稀释剂或载体的示例如下对于吸入组合物一4a乳H;对于片剂、胶囊和糖衣药丸一微晶纤维素、磷酸钙、硅藻土、糖(如乳糖、葡聚糖或甘露糖醇)、滑石、硬脂酸、淀粉、重碳酸钠和/或凝胶；对于检剂一天然或硬化的油或蜡。20式I的化合物的多晶型形式在一个实施方案中为具有0.01至10pm的质量中位直径的形式。该組合物还可包含合适的防腐剂、稳定剂和润湿剂、助溶剂(例如，水溶性纤维素聚合物如羟丙基甲基纤维，或者水溶性二醇如丙二醇)、甜味剂、着色剂以及调味剂。适当时，该组合物可制成緩释形式。药物组合物中式I的化合物的多晶型形式的含量通常为整个制剂的约0.01-约99.9wt%,在一个实施方案中为约0.1-约50wt%。式I的化合物的多晶型形式的剂量可根据年龄、体重、一般健康条件、饮食、施用时间、施用方法、清除率、药物組合、该患者治疗的疾病的水平以及其它因素加以确定。同时剂量随着l巴标疾病、病症、施用对象、施用方法等而变化，在作为在患有杜兴氏肌营养不良症的患者中治疗该疾病的治疗剂用于口服施用时，在特定的实施方案中每天以单剂量或分2或3次施用0.01mg-10g，在一个实施方案中为0.1-100mg。式I的化合物在治疗DMD中的潜在活性可通过以下预测性测定和筛选得到证实。1.萤光素酶报告体测定(鼠H2K细胞)该筛选所用的细胞系为永生化的w血小鼠H2K细胞系，该细胞系被稳定转染了质粒，且该质粒包含了具有与萤光素酶报告基因连接的第一未翻译外显子的肌营养相关蛋白A启动子的约5kb片段(参见图26)。在低温和含干扰素培养基的条件下，将所述细胞保持为成肌细胞。将它们涂布在96孔板上，并在化合物的存在下培养三天。然后通过细胞溶解和用平板光度计读取表达的萤光素酶基因的光输出来测定萤光素酶的水平在该测定中化合物的药物剂量应答的示例显示于图27中。2.附血小鼠从ADMET数据获得的数据按优先顺序排序，并将具有最佳体外萤光素酶活性和合理ADMET数据的化合物优先在w血概念验证研究中进行测试，其中该结果被用于鉴定与仅施用运载体的对照动物相比能够提高抗肌萎缩蛋白缺陷肌肉中的肌营养相关蛋白水平的任意化合物。在28天中向两只动物每天腹膜内(i.p.)施用10mg/kg化合物，并采用年龄匹配的对照。采集肌肉样本，并进行切片(以识别肌营养相关蛋白的肌纤维膜染色的增加)和Western印迹(以识别肌营养相关蛋白水平的总体增加)。图28显示了用特异性针对小鼠肌营养相关蛋白的抗体染色的TA肌肉切片的示例。与仅注射运载体的附血肌肉比较，显示肌纤维膜结合肌营养相关蛋白数量的上升。来自上述处理小鼠的肌肉还被切除和处理以进行Western印迹并用特定的抗体染色(参见图29)。还是使用施用了CPD-A的肌肉，显示TA腿部肌肉和隔膜中都存在总体肌营养相关蛋白水平明显上升。与对照相比，暴露至CPD-A(V2和V3)的小鼠显示肌营养相关蛋白表达水平上升。来自第一个28天研究的阳性上调数据随后在另两只小鼠的28天研究中重现。总计三种不同的化合物在两次重复实验中显示通过腹膜内施用28天时增加m血小鼠中的肌营养相关蛋白表达水平的能力。该数据证实了所述化合物在腹膜内注射递送时引起m血小鼠中肌营养相关蛋白表达水平明显上升的能力，因此使我们有信心该种方法会緩解所述疾病，因为目前为止所有公开的数据证实了肌营养相关蛋白水平上升超过三倍对于抗肌萎缩蛋白缺陷型肌肉具有明显的功能性效果。H2K/mdx/UtroA报告体细胞系的维持该H2K/mdx/UtroA才艮告体细胞系每周传代两次直至^30%汇合。该细胞在10。/。C02存在下于33。C下生长。为了去除成肌细胞以进行铺板，将它们与胰蛋白酶/EDTA—起孵育直至该单层细胞开始脱落。生长培养基画EMGibco4196620%FCS1%Pen/Strep1%谷氨酰胺10ml鸡胚纟是耳又物干扰素(1276905Roche)10|il/50ml培养基，新鲜添加96孔板萤光素酶测定将所述H2K/mdx/UtroA报告体细胞系在WOfil普if生长培养基中以大约5000细胞/孔的密度涂布96孔板(Falcon353296,白色尔透明)。将平板在10。/。C02存在下于33t下孵育24小时。-通过向每个孔添加10|il的稀释化合物至10的终浓度来施用化合物。然后将该平板继续孵育48小时。参照生产商的方案(PromegaSteady-Glo萤光素酶测定系统(E2520))将细胞原位裂解，然后使用平板光度计计数(Victor1420)10秒钟。化合物储存用于筛选的化合物作为含于100%DMSO的10mM储液在-20°C下储存至使用。用化合物对m血小鼠的注射选才奪来自繁殖族群(breedingcolony)的w血进行测试。每天用运载体或最多50mg/kg化合物通过腹膜内途径(i.p.)注射小鼠。对小鼠称重，并将化合物稀释于5%DMSO、含于PBS的0.1%tween中。在所需的时间点通过颈脱位法处死小鼠，并切除肌肉进行分析。月/l肉分析免疫組织化学切除用于切片的組织，浸入OCT中(BrightCryo-M-Bed)并在液氮冷却的异戊烷上冷冻。在Bright恒冷切片机上进行未固定的8|iM冷冻切片，并贮存在-80。C下。在染色准备过程中，将切片在含于PBS的5%胎牛血清中封闭30分钟。将一级抗体稀释于封闭试剂中，并在湿润室中与切片孵育1.5小时，然后在PBS中洗涤三次共5分钟。次级抗体同样稀释于封闭试剂中，并在湿润室内暗处孵育l小时。最终在PBS中将切片洗涤三次共5分钟，并通过液封固定盖玻片。使用Leica荧光显微镜分析玻片。结果生物活性可通过萤光素酶报告体测定在小鼠H2K细胞中评估，并分类如下+最高为对照的200%++介于对照的201%至300%之间+++介于对照的301%至400%之间++++在对照的401%以上5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁。坐实验5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并fdl噁唑的合成使用以下物质<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>步骤所用容器配备有后掠式叶片搅拌器和向下泵送涡轮、五口法兰盖、密封和夹钳、搅拌器压盖和高架式搅拌器、温度计插套、Dean-Stark捕集器、滴液漏斗和冷凝器。然后打开通往冷凝器的水。然后混合氢氧化钠和0.80L的7jc(同时在水浴中冷却，直至所有的氢氧化钠溶解-小心放热)。然后将所得的溶液转移至与该容器适当连接的涤气器(scrubber)。然后将2-氨基-4-(乙基磺酰基)苯酚和2.00L二甲苯(混合物)转移至所述容器，并将该试剂和溶剂在100rpm下搅拌。然后将2-萘甲酰氯溶解于2.00L二甲苯(混合物)并转移至所述容器。将搅拌速率上升至150rpm。溶液的温度在不少于30分钟的时间内逐渐上升至100°C，然后在该水平下维持10分钟。(注意在该过程中HC1气体通过该气体涤气器放出)。然后将搅拌速度增加至315rpm，然后在30分钟内将温度逐渐提高至回流(155°C)，在该水平下维持90分钟。(注意在该过程中HC1气体通过该气体涤气器放出)。然后在30分钟内逐滴添加甲磺酸，并保持回流至Dean-Stark装置不再收集到水(约15分钟)。移除热源，并断开Dean-Stark装置的管路接头。将所得的溶液冷却至90°C,然后使用Whatman1过滤纸进行过滤。将所得的溶液在环境温度下放置18小时，在这段时间之后产物结晶，使用Whatman1过滤纸过滤分离该产物。随后用1x1.0L叔丁基甲基醚(TBME)洗涤该产物。将所述产物在65。C和10mbar压强下的真空炉中干燥，直至达到恒重(以至少l小时的间隔连续称量质量，所得的差异小于0.5g)。所得的产物为沙状的米黄色粉末，产率为80%。表征5-(乙純酰基)-2-(务2-基)苯并[d]噁唑LCMSRT-6.94min，Mf338.1;iH醒R(DMSO):8.90(1H,br),8.34(1H,d，几4Hz)，8.30(1H,dd，《/8.61.7Hz)，8.24-8.05(4H，m)，7.99(1H，dd,J8.51.8Hz),7.73-7.64(2H，m)，3.41(2H，q，J7.3Hz)，U5(3H，t，J7.3Hz);MP=160-161°C.多晶型形式的合成1.方法将大约100mg式I的化合物溶解于最少量的良溶剂中，然后加入抗溶剂以诱导结晶。然后移除上清液，并真空干燥所得的固体12小时。2.热力学稳定性测试浆化实-睑(单种形式)将10mg的两种多晶型形式在0.25ml甲醇中在室温下或60°C下浆化4天。然后移除上清液并真空干燥所得的固体24小时。浆化实验(混合形式)将大约10mg的多晶型形式混合物在0.25ml甲醇中在室温下或60t下浆化1天。通过注射器移除上清液，并将所得的固体真空干燥24小时，并通过粉末X射线衍射进行分析。3.分析技术3.1X射线粉末衍射(XRPD)将大约2mg样品轻轻压在XRPD零背景单斜切硅样品架上。然后将该样品加载到PhilipsX-PertMPD衍射仪上，并使用如下实验条件进行分析管阳极Cu发电机电压40kV管电流40mA波长alphal:1.5406A波长alpha2:1.5444A初始角度[20]:5终止角度[20]:35每步时间2.5秒扫描步长0.063.2差示扫描量热法将大约2mg的样品称重放入铝DSC盘，并用非密盖进行封盖。然后将该样品加载至Perkin-ElmerDiamondDSC(配备了液氮冷却单元)，冷却并维持在0°C。一旦观察到稳定的热流响应，将样品由0°C加热至200°C,扫描速率为200°C/min，并监测所得的热流响应。以20ml/min通氦气以防止加热过程中对该样品的热诱导氧化，以及减少由该样品引起的热延迟以提高仪器灵敏度。在分析之前，使用铟参考标准对仪器进行温度和热流校正。3.3重量蒸气吸附将大约15mg的样品放入线网吸附平衡盘上并加载至"IgaSorp"蒸气吸附天平(HidenAnalyticalInstruments)。然后通过保持0%的湿度环境干燥该样品，直至不再记录到进一步的重量变化。然后，将该样品以10%朋增量进行0-90%RH斜坡曲线，在每一步中保持该样品，直至达到平衡(99.5%步骤完成)。达到平衡后，该装置内的Q/。RH被渐变为下一步骤，并重复平衡步骤。当吸附循环完成后，使用相同的步骤干燥该样品。监测在吸附/脱附循环中的重量变化，从而可以确定样品的吸湿性。3.4热重量分析将大约5mg的样品准确称量至铂TGA盘，然后加载至保持在室温下的TGA7重量分析4义。然后以10°C/min的速率将该样品从20°C加热至250°C，在该过程中监测重量变化。以20ml/min流速的氮气作为净化气体。在分析前使用lOOmg参考重量对仪器进行重量校正，并使用镍铝锰合金参考标准对仪器进行温度校正。结果多晶型形式1多晶型形式l可在上述条件下采用以下溶剂组合制备:<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>多晶型形式1得到了具有如下峰的如图1所示的X射线粉末衍射图型:编号位置『。2Th.1d-间隔[Al相对强度「％1多晶型形式1得到了如图2所示的差示扫描量热图形。多晶型形式1得到了如图3所示的热重量分析图形。多晶型形式1得到了具有如下峰的如图4所示的拉曼光谙:l兩4，0J隱2,22S63氛扁5S415.345317婦S16週65,308256〗,535S717房914.92841819,靜54锡術9緣55394,5，310议9,4.4橋5!！20,7!144,2證3!220邻514,B測〗3.，M51424,01083,706361524雄8M3磁163.44154!72禱娜3J4魏8!8〖920212223242526272S29303!3221權28,譜629意230細03t,4蘭33.250735.535037,2鄉緣，扁42眉0043.麵45.0卿45.77043,24細2》37552厕W2,694532.52638馬ns2,43912.24訓2.0糊52'01綱1,9824.22.612.72〖3.842,951L飼0211，i211，，達li冀7j4<i*(!2JJ名7屮2ll复复11zi，x-K编号位置「cm一126:83d121纖571011.2，1508,12雨雄13:62,1.41237J31.跳9392固图5显示了多晶型形式1的光学显微镜图像。多晶型形式2多晶型形式2可在上述条件下采用以下溶剂組合制备:良溶剂抗溶剂良溶剂抗溶剂比例二甲苯异丙醇20:80二甲苯异丙醇80:200多晶型形式2得到了具有如下峰的如图6所示的X射线粉末衍射图型编号位置「2Th.1d-间隔「Al相对强度『％1細346,375296,123295扁22SJI1305.5鄉85,204《観814.62:2004.434394,2,53,謂243J!雄3扁5714講1，禱2，2,6柳03B普H414眉5751S細3615,15777，5,2柳8，S.懇3916J2衡，17.03231218,512813;9'2033!42ft02402畅縣420.707922J4923.3湖25,6no34.1327,9333.4412,S5，3,8!歸4l画l働,OO79加氛i^^1氛氛L^l良溶剂抗溶剂良溶剂抗溶剂比例二甲苯异丙醇60:403226細33,424762g,6i27,45303,2麵171727.画》3,1画15,3728細83,1謂13,563雄御2画3緣M2,頻2！23,503氛85472細08，，3《柳02J測53眉36.柳02.4624238J3纏2J雷Ii5S40.,2.22麵26.9344,緒52,画l45,67IJ,722.,l細l2l浅多晶型形式2得到了如图7所示的差示扫描量热图形。多晶型形式2得到了如图8所示的热重量分析图形。多晶型形式2得到了具有如下峰的如图9所示的拉曼光谱:编号位置「cm—'1!画,？423i557,0741S訓051426,4861393,5571262.5581237.649则.M图10显示了多晶型形式2的光学显徵镜图像。多晶型形式3多晶型形式3可在上述条件下采用以下溶剂組合制备:多晶型形式3得到了具有如下峰的如图11所示的X射线粉末衍射图型编号位菱「2Th.1d-间隔『Al相对强度「％1直i2,麵7,2鹏6掘26.963076,44313眉節氛4翻氛3！4'!5，95!6.06005,5,2.B6J6J0405,,3!脇7〗7.35374:L6'8汰3鄉2.幼18J糾34.823438.3119扁04,52，2丄；ii:202訓4,3漏i54亂222.0370;322.7,3,915621424,奶？3,5纖29.2'1525.6麵3,4垂35,6，26-51343,3931,1727.糊1254S836.921827,湖3,2画32.38，912訓3.〗55婦雄2CI2画衡3,(薩S3,31多晶型形式3得到了如图12所示的差示扫描量热图形。多晶型形式3得到了如图13所示的热重量分析图形。多晶型形式3得到了具有如下峰的如图14所示的拉曼光谱:编号位置「cm.i1632,82!61130154譜41456.0351426.77:6隱J!1*U教25l亂簡畫239J210!1訓51112〗3粉.9214纖M15860.57图15显示了多晶型形式3的光学显微镜图像。多晶型形式4多晶型形式4可通过将100mg的式I的化合物溶解于二甲基甲酰胺后蒸发去除该溶剂获得。良溶剂抗溶剂良溶剂抗溶剂比例二甲基甲酰胺--多晶型形式4得到了具有如下峰的如图16所示的X射线粉末衍射图型编号位置「2Th.1d-间隔「Al相对强度「％1多晶型形式4得到了如图17所示的差示扫描量热图形。7.!32625,細6S5.505625,2藤,5344眉輔4,2麵1959443J糊S3.穆7雄楊3.44謂'2,绍满2:2,麵72,S3纖2.333742,2,2,麵？1邻326，.89,1J調!豫2眉00214,細0315,2274416.09895歸5i36则WSi謹2S:92众M30i02輔,，i22.4S54!223.4,13:23雄824,續29,薩3謂6，34,14知35.410040J鄉43,雄4SJ鄉47J8544鏡S922.302S,542(4817.33〗3,，緣，l2，3S.7!147011,862016451，0S94s6789247232J.一<4jI.i134多晶型形式4得到了如图18所示的热重量分析图形。多晶型形式4得到了具有如下峰的如图19所示的拉曼光谱:编号位置[cm—'111611.74■21556,664，455.2151426.266,.,71344,56拿z.Jl91187.491.0U醇8〖〖圆>0612，16.21图20显示了多晶型形式4的光学显微镜图像。浆化实验1.多晶型形式l将多晶型形式1在甲醇中浆化，然后采用上述浆化实验分离固体产物(单独形式)。获取该固体产物的X射线粉末衍射图型。该实验进行两次，所得的图型显示于图23。可看到该衍射图型在浆化前后相同，显示该多晶型形式没有变化。2.多晶型形式2将多晶型形式2在甲醇中浆化，然后采用上述浆化实验分离固体产物(单独形式)。获取该固体产物的X射线粉末衍射图型。该实验进行两次，所得的图型与多晶型形式l的衍射图型一起显示于图24。可以看到浆化后产物的衍射图型与多晶型形式1的图型相同，显示浆化后多晶型形式2转化为多晶型形式l。3.混合多晶型形式l、2和3在60°C和25°C下参照上述浆化实验(混合形式)在甲醇中浆化以下多晶型形式的混合物形式1和2形式1和3形式2和3获取上述固体产物浆化后的X射线粉末衍射图型。该谱图在图25中显示。可以看到，在25。C下，浆化后所有的混合物转化为多晶型形式1。然后，在60。C下浆化后，谱图显示仅部分转化为多晶型形式1，表示在60。C而不是25°C下，所述多晶型形式之间的自由能差异得到了更好的平衡。权利要求1.化合物5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑的多晶型形式(多晶型形式1)，其特征在于它提供包含在14.5±0.2处的峰的X射线粉末衍射图型。2.化合物5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑的多晶型形式(多晶型形式1)，其特征在于它提供包含在16.7±0.2处的峰的X射线粉末衍射图型。3.化合物5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑的多晶型形式(多晶型形式l)，其特征在于它提供包含在19.1±0.2处的峰的X射线粉末衍射图型。4.化合物5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑的多晶型形式(多晶型形式1)，其特征在于它提供包含在24.0±0.2处的峰的X射线粉末衍射图型。5.化合物5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑的多晶型形式(多晶型形式l)，其特征在于它提供包含在14.5±0.2、16.7±0.2、19.1士0.2和24.0±0.2处的峰的X射线粉末衍射图型。6.如权利要求1-5任意一项所述的多晶型形式，其具有基本如图1所示的X射线粉末衍射图型。7.如权利要求1-6任意一项所述的多晶型形式，其具有基本如图2所示的差示扫描量热图形。8.如权利要求1-7任意一项所述的多晶型形式，其具有基本如图3所示的热重量分析图形。9.如权利要求1-8任意一项所述的多晶型形式，其具有基本如图4所示的拉曼光谱。10.包含式5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑的化合物的药物组合物，其中该式5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑的化合物具有包含60%以上的如权利要求1-9任意一项所述的多晶型形式的结构。11.包含式5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑的化合物的药物组合物，其中该式5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑的化合物具有包含以权利要求1-9任意一项所述的多晶型形式为唯一多晶型形式的结构。12.化合物5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑的多晶型形式(多晶型形式2)，其特征在于它提供包含在15.9±0.2、18.5±0.2和23.3士0.2处的峰的X射线粉末衍射图型。13.如权利要求12所述的多晶型形式，其具有基本如图6所示的X射线粉末衍射图型。14.如权利要求12或13所述的多晶型形式，其具有基本如图7所示的差示扫描量热图形。15.如权利要求12-14任意一项所述的多晶型形式，其具有基本如图8所示的热重量分析图形。16.如权利要求12-15任意一项所述的多晶型形式，其具有基本如图9所示的拉曼光谱。17.包含式5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑的化合物的药物组合物，其中该式5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁口i^化合物具有包含60%以上的如权利要求12-16任意一项所述的多晶型形式的结构。18.包含式5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噪唑的化合物的药物组合物，其中该式5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑的化合物具有包含以权利要求12-16任意一项所述的多晶型形式为唯一多晶型形式的结构。19.化合物5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑的多晶型形式(多晶型形式3)，其特征在于它提供包含在12.1±0.2、17.4±0.2、22.7±`0.2、25.0±0.2和26.5±0.2处的峰的X射线粉末衍射图型。20.如权利要求19所述的多晶型形式，其具有基本如图11所示的X射线粉末衍射图型。21.如权利要求19或20所述的多晶型形式，其具有基本如图12所示的差示扫描量热图形。22.如权利要求19-21任意一项所述的多晶型形式，其具有基本如图13所示的热重量分析图形。23.如权利要求19-22任意一项所述的多晶型形式，其具有基本如图14戶斤示的4立曼光i普。24.包含式5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑的化合物的药物組合物，其中该式5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑的化合物具有包含60%以上的如权利要求19-23任意一项所述的多晶型形式的结构。25.包含式5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑的化合物的药物組合物，其中该式5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑的化合物具有包含以权利要求19-23任意一项所述的多晶型形式为唯一多晶型形式的结构。26.化合物5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑的多晶型形式(多晶型形式4)，其特征在于它提供包含在14.6±0.2、16.1±0.2、17.0±0.2、19.3土0.2和29.2±0.2处的峰的X射线粉末衍射图型。27.如权利要求26所述的多晶型形式，其具有基本如图16所示的X射线粉末衍射图型。28.如权利要求26或27所述的多晶型形式，其具有基本如图17所示的差示扫描量热图形。29.如权利要求26-28任意一项所述的多晶型形式，其具有基本如图18所示的热重量分析图形。30.如权利要求26-29任意一项所述的多晶型形式，其具有基本如图19所示的4立曼光i普。31.包含式5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑的化合物的药物组合物，其中该式5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑的化合物具有包含60%以上的如权利要求26-30任意一项所述的多晶型形式的结构。32.包含式5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑的化合物的药物组合物，其中该式5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑的化合物具有包含以权利要求26-30任意一项所述的多晶型形式为唯一多晶型形式的结构。33.合成如权利要求1-9任意一项所述的化合物5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑的多晶型形式的方法，其包括如下步骤(i)将5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑溶解于丙酮，然后添加异丙醇，直至形成固体产物，其中丙酮异丙醇的比例为20:80;或者将5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑溶解于乙酸乙酯，然后添加异丙醇，直至形成固体产物，其中乙酸乙酯异丙醇的比例为40:60;或者将5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑溶解于二甲基甲酰胺，然后添加异丙醇，直至形成固体产物，其中二甲基甲酰胺异丙醇的比例为40:60;或者将5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑溶解于丙酮，然后添加乙醇，直至形成固体产物，其中丙酮乙醇的比例为40:60;或者将5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑在回流下溶解于丙酮，然后冷却到-10。C至-15。C，直至形成固体产物；然后(ii)分离该固体产物。34.合成如权利要求12-16任意一项所述的化合物5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑的多晶型形式的方法，其包括如下步骤(i)将5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑溶解于二甲苯，然后添加异丙醇，直至形成固体产物，其中二甲苯异丙醇的比例为20:80或80:20;然后(ii)分离该固体产物。35.合成如权利要求19-23任意一项所述的化合物5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑的多晶型形式的方法，其包括如下步骤(i)将5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑溶解于二甲苯，然后添加异丙醇，直至形成固体产物，其中二甲苯异丙醇的比例为60:40;然后(ii)分离该固体产物。36.合成如权利要求26-30任意一项所述的化合物5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑的多晶型形式的方法，其包括如下步骤(i)将5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑溶解于二甲基甲酰胺；然后(ii)蒸发去除该二甲基甲酰胺以形成固体产物。全文摘要本发明提供了可用于治疗杜兴氏肌营养不良症的5-(乙基磺酰基)-2-(萘-2-基)苯并[d]噁唑的多晶型形式。文档编号C07D263/57GK101679323SQ200880015864公开日2010年3月24日申请日期2008年8月14日优先权日2007年8月15日发明者亚历山大·查尔斯·韦茅斯-威尔逊,凯伦·琼·埃瑟林顿,莎芭娜·艾哈迈德,马克·威廉·霍珀申请人:萨米特公开有限公司