专利名称：一种适用于柠檬黄的人工抗原的制备方法
技术领域：
一种适用于柠檬黄的人工抗原的制备方法，属于生物化工技术领域。
背景技术：
朽1檬黄，英文名Tartrazine, Acid Yellow 23 ;化学名也叫酒石黄，肼黄，C. I.酸性黄23 ;CAS号1934-21-0 ;分子式是C16H9N4Na3O9S215柠檬黄色素(Tar)是目前我国批准使用的六种食用合成色素之一，其分子结构为偶氮化合物，在体内代谢的产物对人体具有潜在危害一芳香类化合物。因此，我国对在食品中添加柠檬黄色素有严格限制。凡是肉类及其加工品，鱼类及其加工品等都不能使用人工合成色素，即使在适用的品种和范围内，使用剂量也有严格规定，决不允许过量使用。但实际上，我国食品中普遍存在柠檬黄色素的超标、超范围使用现象屡禁不止。如果人们长期或一次性大量食用柠檬黄含量超标的食品，可能会引起过敏、腹泻等症状，当摄入量过大，超过肝脏负荷时会在体内蓄积，对肾脏、肝脏 产生一定伤害。目前，柠檬黄检测采取的方法是薄层分析及分光光度计法。近年来，我国科研工作者在柠檬黄检测方面做了大量的工作，但都主要集中在理化检测方面，但这些方法不仅需要昂贵的仪器设备，专业的操作人员，对检材的要求也比较高，并且需要进一步的样本前处理才能进行。这已经不能达到现代检测对快速、方便、准确的要求。近年来，国内外已经开展了对色素类免疫分析方法的研究，但国内外尚比较少发展出针对柠檬黄的酶联免疫检测方法，为了更好地检测柠檬黄，有必要制备开发出能针对柠檬黄更高灵敏度和更好特异性抗体的柠檬黄人工抗原。
发明内容
本发明的目的是提供一种适用于柠檬黄的人工抗原的制备方法。所制备的产品用于柠檬黄的免疫分析方法研究，为今后人们的研究提供了必需的人工抗原。本发明的技术方案一种适用于柠檬黄的人工抗原的制备方法，以丁二酸单乙酯酰氯和2，2- 二甲基-1，2- 二噁烷-4，6- 二酮为原料，经过4步化学反应，制得柠檬黄衍生物TAR，以TAR为半抗原用活性酯法将其与载体蛋白BSA或OVA偶联，制备柠檬黄的人工抗原，从而免疫产生针对柠檬黄的特异性抗体，用于建立酶联免疫检测方法；
(I)柠檬黄衍生物TAR的合成TAR化学名称为I-苯基-3-丙酸-4-苯偶氮基_5_吡唑啉酮，其化学结构和合成路线如下
权利要求
1.一种适用于柠檬黄的人工抗原的制备方法，其特征在于以丁二酸单乙酯酰氯和2，2- 二甲基-1，2- 二噁烷-4，6- 二酮为原料，经过4步化学反应，制得柠檬黄衍生物TAR，以TAR为半抗原用活性酯法将其与载体蛋白BSA或OVA偶联，制备柠檬黄的人工抗原，从而免疫产生针对柠檬黄的特异性抗体，用于建立酶联免疫检测方法； (1)柠檬黄衍生物TAR的合成TAR化学名称为I-苯基-3-丙酸-4-苯偶氮基_5_吡唑啉酮，其化学结构和合成路线如下
全文摘要
一种适用于柠檬黄的人工抗原的制备方法，属于生物化工技术领域。本发明以丁二酸单乙酯酰氯和2,2-二甲基-1,2-二噁烷-4,6-二酮为原料，经过4步化学反应，制得柠檬黄的衍生物TAR；并以该没含有磺酸基团的柠檬黄衍生物TAR为半抗原，用活性酯法将其与载体蛋白BSA或OVA偶联，制备柠檬黄的人工抗原，用分光光度法测定偶联物的偶联比，并免疫产生针对柠檬黄的特异性抗体，同时建立酶联免疫检测方法。本发明成功合成了柠檬黄的人工抗原，合成步骤简洁，有效，完全可用于免疫分析中，为以后人们的研究提供了必需的柠檬黄人工抗原，可以满足国内对柠檬黄研究的需要。
文档编号C07K14/765GK102924590SQ20121047748
公开日2013年2月13日 申请日期2012年11月22日 优先权日2012年11月22日
发明者胥传来, 李灼坤, 尹玉云, 刘利强, 胡拥明, 林菲 申请人:江南大学