一种小麦胚芽细胞活性蛋白的制备方法
【专利摘要】本发明涉及活性蛋白制备领域，特别涉及一种小麦胚芽细胞活性蛋白的制备方法，包括以下步骤：采用35％的硫酸铵溶液对小麦胚芽蛋白溶液进行预沉淀，然后离心，得到上清液；采用饱和硫酸铵溶液对上清液充分沉淀，离心，得到沉淀和上清液；将沉淀溶解于PBS溶液后透析，去除硫酸铵，即得。该制备方法先选用特定浓度的硫酸铵溶液将小麦胚芽蛋白溶液中的杂蛋白如纤维蛋白、一部分糖蛋白以及一部分其它蛋白沉淀，通过离心将其去除；然后再用饱和硫酸铵溶液将上清液中的糖蛋白、糖蛋白肽以及部分生长因子沉淀，得到的沉淀即为小麦胚芽细胞活性蛋白；最后采用透析的方式将沉淀中的硫酸铵去除，即得到纯净的小麦胚芽细胞活性蛋白。
【专利说明】一种小麦胚芽细胞活性蛋白的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及活性蛋白制备领域，具体而言，涉及一种小麦胚芽细胞活性蛋白的制 备方法。
【背景技术】
[0002] 小麦胚芽含有黄酮类化合物，如：山柰酚、杨梅树皮素、木犀草素等、儿茶精类物 质、苦味萜、17种氨基酸以及钾、锰、磷、钙、铁等25种元素，在抗衰老、抗氧化等方便效果显 著。
[0003] 以往的小麦胚芽蛋白的提取主要采用盐溶碱提酸沉法，然而这种方法需要大量酸 和碱，并且排出大量含糖等营养物质以及酸碱废水，从而造成后处理困难，严重污染环境， 而且在提取过程中很容易使蛋白质发生变性；现有的小麦胚芽蛋白的提取采用反胶束法， 是以副产品小麦胚芽为原料，包括前萃和后萃。前萃由琥珀酸二（2-乙基己基）酯璜酸钠 (AOT)-异辛烷-氯化钾缓冲溶液组成的反胶束体系从小麦胚芽中提取蛋白；后萃先回收异 辛烷，少量KCl的缓冲溶液溶解剩余的固形物，最后用丙酮沉淀得小麦胚芽蛋白。该方法步 骤复杂，且提取得到的小麦胚芽蛋白的分子量较大。
[0004] 目前蛋白酶的提取方法有多种，但主要有丙酮有机溶剂提取法、乙醇提取法，超滤 法，但这些并不适合小麦胚芽细胞活性蛋白的提取。
[0005] 小麦胚芽细胞活性蛋白是由小麦胚芽细胞培养后萃取第99段的活性蛋白。小麦 胚芽细胞活性蛋白能极大促进细胞间质生成，激发细胞活性。细胞培养基既是培养细胞中 供给细胞营养和促使细胞生殖、增殖的基础物质，也是培养细胞生长和繁殖的生存环境。小 麦胚芽细胞活性蛋白含有丰富的天然植物基酸、植物生长素和生长因子，如：表皮生长因 子、皮纤维细胞生长因子、角质生长因子等，是常用的天然培养基，可用于许多细胞和细胞 的培养。
[0006] 此外，小麦蛋白活性分子化妆品在消费者使用过程中，产品主要作用是迅速补充 细胞营养，调节细胞代谢正常，让活力弱的细胞变强，让细胞恢复增长，达到新生细胞和代 谢掉的细胞平衡。在产品研发和生产过程中，是根据氧化还原理论，吸收途径主要是通过汗 腺和细胞体液交换吸收。皮肤不管是松驰、绉纹、眼袋、眼纹等各种衰老问题，都是皮肤细胞 缺乏营养，造成细胞干瘪踏陷，同时新生细胞减少，代谢掉的细胞大于新生细胞。在去斑应 用中，目前市场产品都是脱色类，这只是解决了表面问题，过一段时间黑色素又聚集，去掉 的斑又反弹了。去斑效果好，不反弹，去除中不是去掉黑色素，而是让黑色素细胞代谢恢复 正常，这样斑会因为正常黑色素细胞代谢慢慢消除，皮肤代谢正常后，不会产生新的多余的 黑色素细胞，斑就消除了。因此，小麦胚芽细胞活性蛋白具有滋养细胞，促进新陈代谢，有效 改善细纹，美白和细嫩肌肤的作用，能够解决肌肤大多数问题。
[0007] 而现有的小麦胚芽蛋白溶液含有一些杂蛋白，如纤维蛋白、部分糖蛋白等，阻碍小 麦胚芽蛋白溶液的使用效果。
[0008] 有鉴于此，特提出本发明。
【发明内容】
[0009] 本发明的目的在于提供一种小麦胚芽细胞活性蛋白的制备方法，该制备方法简单 易行，得到的小麦胚芽细胞活性蛋白含量高，且活性高。
[0010] 为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
[0011] 一种小麦胚芽细胞活性蛋白的制备方法，包括以下步骤：
[0012] (a)、采用35%的硫酸铵溶液对小麦胚芽蛋白溶液进行预沉淀，然后离心，得到上 清液；
[0013] (b)、采用饱和硫酸铵溶液对上清液充分沉淀，离心，得到沉淀和上清液；
[0014] (c)、将沉淀溶解于PBS溶液后透析，去除硫酸铵，即得。
[0015] 本发明提供的小麦胚芽细胞活性蛋白的制备方法，先选用特定浓度的硫酸铵溶液 将小麦胚芽蛋白溶液中的杂蛋白如纤维蛋白、一部分糖蛋白以及一部分其它蛋白沉淀，通 过离心将其去除；然后再用饱和硫酸铵溶液将上清液中的糖蛋白、糖蛋白肽以及部分生长 因子沉淀，得到的沉淀即为小麦胚芽细胞活性蛋白；最后采用透析的方式将沉淀中的硫酸 铵去除，即得到纯净的小麦胚芽细胞活性蛋白。
[0016] 小麦胚芽蛋白溶液可采用现有的方法制备，如：碱溶液沉淀法、α-淀粉酶法、木 瓜蛋白酶法、超声波法、反胶团萃取法等等。
[0017] 其中，饱和硫酸铵溶液采用以下方式配置：
[0018] 边搅拌边慢慢将767g(NH4)2S04加到1升蒸馏水中，用氨水或硫酸调到至pH为 7. 0,即得到饱和硫酸铵溶液。
[0019] 35%的硫酸铵溶液即将配好的饱和硫酸铵溶液进行稀释至相应的饱和度即可，即 35 %的硫酸铵溶液是将饱和硫酸铵与水以体积比为35:65的比例进行混合。
[0020] 步骤（C)中，通过透析去除硫酸铵，查看硫酸铵是否去除彻底，采用氯化钡溶液进 行验证，具体为：将透析液与质量百分数为10%的氯化钡溶液等体积混合，看是否有白色 沉淀，若没有，则去除彻底。
[0021] 为了使小麦胚芽蛋白溶液中的杂蛋白去除的更充分，经验证，优选地，在步骤（a) 中，所述硫酸铵溶液的体积与所述小麦胚芽蛋白溶液的体积为〇. 4-0. 8:1。
[0022] 更优选地，在步骤（a)中，所述硫酸铵溶液的体积与所述小麦胚芽蛋白溶液的体 积为〇. 5:1。
[0023] 优选地，在步骤（a)中，所述离心为：在0-6°C条件下，以转速为5000r/min，离心 20min。经验证，该转速以及离心时间条件下，能够充分的将杂蛋白与活性蛋白分离开，得到 的上清液中基本无杂蛋白残留；同时在低温下进行离心以保持蛋白的活性。
[0024] 为了将第一上清液中的活性蛋白充分的沉淀，经验证，优选地，在步骤（b)中，所 述饱和硫酸铵溶液与所述第一上清溶液的体积比为1-1. 2 :1 ;
[0025] 更了更充分的将第一上清液中的活性蛋白沉淀，且利于复性以保持很好的活性， 优选地，所述饱和硫酸铵溶液与所述第一上清溶液的体积比为1:1。
[0026] 具体地，所述充分沉淀为：
[0027] 在搅拌速度为180r/min条件下，将饱和硫酸铵添加到上清液中，添加完毕后混 匀，得到混合液；
[0028] 将得到的混合液于0-6°C条件下静置IOh。
[0029] 添加完毕后混匀即添加完毕后继续搅拌至完全混匀，然后再进行静置，以使上清 液中的活性蛋白充分沉淀；同时在低温下以保持蛋白的活性。
[0030] 进一步地，在步骤（b)中，所述离心为：在〇-6°C条件下，以转速为10000r/min，离 心35min。经验证，该转速条件下，能够充分的将呈絮凝状的活性蛋白沉淀，得到沉淀物即为 变性的活性蛋白；同时在低温下以保持蛋白的活性。
[0031] 试验验证，只进行步骤（b)，上清液中仍残留20% -30%的活性蛋白，为了将活性 蛋白充分分离收集，防止浪费，优选地，重复步骤（b)l次，收集沉淀。重复步骤（b)l次即 将步骤（b)中得到的上清液，再采用饱和硫酸铵溶液进行充分沉淀，离心，得到沉淀和上清 液，将得到的沉淀于PBS溶液中溶解后透析。经过沉淀和分离，得到的活性蛋白的收集率达 到95%以上。
[0032] 进一步地，在步骤（c)中，所述透析在0_6°C进行；
[0033] 所述透析采用3500道尔顿的透析膜进行。
[0034] 在低温下透析保持蛋白的活性，同时选用3500道尔顿的透析膜进行透析，以进一 步去除分子量较大的蛋白，保证得到的活性蛋白的分子量较小，得到的活性蛋白的平均分 子量在2000道尔顿左右，得到的活性蛋白可以直接在化妆品中应用。
[0035] 为了将小麦胚芽蛋白溶液中的杂蛋白充分的絮凝，进一步地，步骤（a)具体为：
[0036] 在搅拌速度为180r/min条件下，将35%的硫酸铵溶液添加到小麦胚芽蛋白溶液 中，添加完毕后混匀，得到混合液；
[0037] 将得到的混合液于0_6°C条件下静置4_6h。
[0038] 优选地，所述小麦胚芽蛋白溶液通过以下方法制备：
[0039] (a)、将小麦子粒浸泡于蒸馏水中，28-35 °C下培养，培养的空气湿度为 80 % -85 %，培养2-3d，粉碎至80-100目，得到粉碎混合物；
[0040] (b)、将所述粉碎混合物以5000r/min的转速离心，得到第一上清液；
[0041] (c)、将所述第一上清液以8000r/min的转速离心，得到含有胚芽细胞的第二上清 液；
[0042] ⑷、将所述第二上清液酶解，酶解的温度为25_27°C，时间为l_2h ;
[0043] 其中，所述酶解采用的酶解液含有糖酶、蛋白酶、脂肪酶、3-肌醇六磷酸酶；
[0044] 所述糖酶的添加量为所述第二上清液重量的0. 8% -1. 2% ;所述蛋白酶的添加量 为所述第二上清液重量的〇. 05% -0. 1% ;所述脂肪酶的添加量为所述第二上清液重量的 0. 4% -0. 5% ;所述3-肌醇六磷酸酶的添加量为所述第二上清液重量的0. 05% -0. 15% ;
[0045] (e)、在0-6°C的条件下，将酶解完成的混合物于18000r/min离心35min，得到的上 清液即为小麦胚芽蛋白溶液。
[0046] 采用该方法制得的小麦胚芽蛋白溶液，是将小麦子粒培养后提取而得，小麦子粒 经过培养，得到的小麦胚芽活性成分含量高，即其中的活性蛋白含量高，且活性高；并且该 方法制得的小麦胚芽蛋白溶液不含有有机溶剂，绿色安全。
[0047] 与现有技术相比，本发明的有益效果为：
[0048] (1)本发明提供的小麦胚芽细胞活性蛋白的制备方法，通过选用不同浓度的硫酸 铵溶液对小麦胚芽蛋白溶液进行逐步分离，以获得小麦胚芽细胞活性蛋白，使用安全，并且 该方法简便；
[0049] (2)为了充分的将小麦胚芽蛋白溶液的杂蛋白去除，本发明不仅选用了特定浓度 的硫酸铵溶液，还限制了硫酸铵溶液与小麦胚芽蛋白溶液的体积比，并且限定了具体的添 加步骤、静置时间以及离心的参数；
[0050] (3)为了更充分的获得小麦胚芽细胞活性蛋白，本发明不仅选用了特定浓度的硫 酸铵溶液，还限制了硫酸铵溶液与上清液的体积比，并且限定了具体的添加步骤、静置时间 以及离心的参数；
[0051 ] (4)本发明提供的制备小麦胚芽蛋白溶液的方法，得到的小麦胚芽蛋白溶液中的 活性蛋白含量高，且活性高；并且不含有有机溶剂，得到的小麦胚芽蛋白溶液安全可靠。
【具体实施方式】
[0052] 下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会 理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体 条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为 可以通过市售获得的常规产品。
[0053] 实施例1
[0054] 将小麦子粒浸泡于蒸馏水中，28°C下培养，培养的空气湿度为80%，培养3d，粉碎 至100目，得到粉碎混合物；
[0055] 将粉碎混合物以5000r/min的转速离心，得到第一上清液；
[0056] 将第一上清液以8000r/min的转速离心，得到含有胚芽细胞的第二上清液；
[0057] 将第二上清液酶解，酶解的温度为27°C，时间为Ih ;
[0058] 其中，酶解采用的酶解液含有糖酶、蛋白酶、脂肪酶、3-肌醇六磷酸酶；
[0059] 糖酶的添加量为第二上清液重量的1. 2% ;蛋白酶的添加量为第二上清液重量的 0. 1% ;脂肪酶的添加量为第二上清液重量的0.5% ;3_肌醇六磷酸酶的添加量为第二上清 液重量的〇. 15% ;
[0060] 在0°C的条件下，将酶解完成的混合物于18000r/min离心35min，得到的上清液即 为小麦胚芽蛋白溶液，以每千克小麦子粒计，小麦胚芽蛋白溶液中蛋白含量为0. 4g/kg ;
[0061] 在搅拌速度为180r/min条件下，将35%的硫酸铵溶液添加到小麦胚芽蛋白溶液 中，硫酸铵溶液的体积与小麦胚芽蛋白溶液的体积为0.8:1，添加完毕后混匀，得到混合 液；
[0062] 将得到的混合液于6°C条件下静置4h ;
[0063] 然后在6°C条件下，以转速为5000r/min，离心20min，得到上清液；
[0064] 在搅拌速度为180r/min条件下，将饱和硫酸铵添加到上清液中，饱和硫酸铵溶液 与所述第一上清溶液的体积比为1. 2 :1，添加完毕后混匀，得到混合液；
[0065] 将得到的混合液于6°C条件下静置10h，然后在6°C条件下，以转速为10000r/min， 离心35min得到沉淀和上清液；
[0066] 对得到的上清液在搅拌速度为180r/min条件下，添加饱和硫酸铵，饱和硫酸铵溶 液与所述第一上清溶液的体积比为1. 2 :1，添加完毕后混匀，得到混合液；
[0067] 将得到的混合液于6°C条件下静置10h，然后在6°C条件下，以转速为10000r/min， 离心35min得到沉淀；
[0068] 将经饱和硫酸铵溶液沉淀得到的沉淀溶解于PBS溶液后于0°C进行透析，透析采 用3500道尔顿的透析膜进行，去除硫酸铵，即得小麦胚芽细胞活性蛋白；
[0069] 以每千克小麦子粒计，小麦胚芽细胞活性蛋白的得率为0. 06g/kg。
[0070] 实施例2
[0071] 将小麦子粒浸泡于蒸馏水中，35°C下培养，培养的空气湿度为85%，培养2d，粉碎 至80目，得到粉碎混合物；
[0072] 将粉碎混合物以5000r/min的转速离心，得到第一上清液；
[0073] 将第一上清液以8000r/min的转速离心，得到含有胚芽细胞的第二上清液；
[0074] 将第二上清液酶解，酶解的温度为25°C，时间为2h ;
[0075] 其中，酶解采用的酶解液含有糖酶、蛋白酶、脂肪酶、3-肌醇六磷酸酶；
[0076] 糖酶的添加量为第二上清液重量的0. 8% ;蛋白酶的添加量为第二上清液重量的 0. 05%;脂肪酶的添加量为第二上清液重量的0. 4% ;3_肌醇六磷酸酶的添加量为第二上清 液重量的0.05% ;
[0077] 在6°C的条件下，将酶解完成的混合物于18000r/min离心35min，得到的上清液即 为小麦胚芽蛋白溶液，以每千克小麦子粒计，小麦胚芽蛋白溶液中蛋白含量为0. 5g/kg ;
[0078] 在搅拌速度为180r/min条件下，将35%的硫酸铵溶液添加到小麦胚芽蛋白溶液 中，硫酸铵溶液的体积与小麦胚芽蛋白溶液的体积为0.4:1，添加完毕后混匀，得到混合 液；
[0079] 将得到的混合液于0°C条件下静置6h ;
[0080] 然后在0°C条件下，以转速为5000r/min，离心20min，得到上清液；
[0081] 在搅拌速度为180r/min条件下，将饱和硫酸铵添加到上清液中，饱和硫酸铵溶液 与第一上清溶液的体积比为1 :1，添加完毕后混匀，得到混合液；
[0082] 将得到的混合液于(TC条件下静置10h，然后在(TC条件下，以转速为10000r/min， 离心35min得到沉淀和上清液；
[0083] 对得到的上清液在搅拌速度为180r/min条件下，添加饱和硫酸铵，饱和硫酸铵溶 液与所述第一上清溶液的体积比为1:1，添加完毕后混匀，得到混合液；
[0084] 将得到的混合液于(TC条件下静置10h，然后在(TC条件下，以转速为10000r/min， 离心35min得到沉淀；
[0085] 将经饱和硫酸铵溶液沉淀得到的沉淀溶解于PBS溶液后于6°C进行透析，透析采 用3500道尔顿的透析膜进行，去除硫酸铵，即得小麦胚芽细胞活性蛋白；
[0086] 以每千克小麦子粒计，小麦胚芽细胞活性蛋白的得率为0. 08g/kg。
[0087] 实施例3
[0088] 将小麦子粒浸泡于蒸馏水中，30°C下培养，培养的空气湿度为85 %，培养60h，粉 碎至100目，得到粉碎混合物；
[0089] 将所述粉碎混合物以5000r/min的转速离心，得到第一上清液；
[0090] 将所述第一上清液以8000r/min的转速离心，得到含有胚芽细胞的第二上清液；
[0091] 将第二上清液酶解，酶解的温度为26°C，时间为I. 5h ;
[0092] 其中，酶解采用的酶解液含有糖酶、蛋白酶、脂肪酶、3-肌醇六磷酸酶；
[0093] 糖酶的添加量为第二上清液重量的1% ;蛋白酶的添加量为第二上清液重量的 0. 05%;脂肪酶的添加量为第二上清液重量的0. 5% ;3_肌醇六磷酸酶的添加量为第二上清 液重量的〇. 1% ;
[0094] 在4°C的条件下，将酶解完成的混合物于18000r/min离心35min，得到的上清液即 为小麦胚芽蛋白溶液，以每千克小麦子粒计，小麦胚芽蛋白溶液中蛋白含量为0. 45g/kg ;
[0095] 在搅拌速度为180r/min条件下，将35%的硫酸铵溶液添加到小麦胚芽蛋白溶液 中，硫酸铵溶液的体积与小麦胚芽蛋白溶液的体积为0.5:1 ;添加完毕后混匀，得到混合 液；将得到的混合液于4°C条件下静置5h ;
[0096] 然后在4°C条件下，以转速为5000r/min，离心20min，得到上清液；
[0097] 在搅拌速度为180r/min条件下，将饱和硫酸铵添加到上清液中，饱和硫酸铵溶液 与第一上清溶液的体积比为1:1，添加完毕后混匀，得到混合液；
[0098] 将得到的混合液于4°C条件下静置10h，然后在4°C条件下，以转速为10000r/min， 离心35min得到沉淀和上清液；
[0099] 对得到的上清液在搅拌速度为180r/min条件下，添加饱和硫酸铵，饱和硫酸铵溶 液与第一上清溶液的体积比为1:1，添加完毕后混匀，得到混合液；
[0100] 将得到的混合液于4°c条件下静置10h，然后在4°C条件下，以转速为10000r/min， 离心35min得到沉淀；
[0101] 将经饱和硫酸铵溶液沉淀得到的沉淀溶解于PBS溶液后于4°C进行透析，透析采 用3500道尔顿的透析膜进行，去除硫酸铵，即得小麦胚芽细胞活性蛋白；
[0102] 以每千克小麦子粒计，小麦胚芽细胞活性蛋白的得率为0. 07g/kg。
[0103] 此外，本 申请人:参照《粮食与油脂》2008年第11期出版的《小麦胚芽蛋白制备及 其应用》中涉及的碱法、蛋白酶解法以及超声波法提取了小麦胚芽蛋白溶液，以每千克小麦 子粒计，得到的蛋白分别为〇. lg/kg、0. 2g/kg、0. 25g/kg。接着采用本申请的方法提取小麦 胚芽细胞活性蛋白，以每千克小麦子粒计，得到的小麦胚芽细胞活性蛋白分别为〇. 〇lg/kg、 0.012g/kg、0. 017g/kg。
[0104] 可以看出，本申请提供的小麦胚芽蛋白溶液的制备方法以及小麦胚芽细胞活性蛋 白的制备方法通过采用不同的原材料，得到的小麦胚芽蛋白溶液以及小麦胚芽细胞活性蛋 白中的含量均有较大提升。
[0105] 实验例1
[0106] 对本发明实施例1-3制得的小麦胚芽细胞活性蛋白进行安全性检测。同时以碱法 (对照组1)、蛋白酶解法（对照组2)以及超声波法（对照组3)提取的小麦胚芽蛋白溶液 制得的小麦胚芽细胞活性蛋白作为对照进行检测安全性。按照化妆品卫生规范2007年版 进行检测，包括以下方面：
[0107] 1、微生物检测
[0108] 得到的结果如表1所示。
[0109] 表1微生物检测结果
[0110]
【权利要求】
1. 一种小麦胚芽细胞活性蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： (a) 、采用35%的硫酸铵溶液对小麦胚芽蛋白溶液进行预沉淀，然后离心，得到上清 液； (b) 、采用饱和硫酸铵溶液对上清液充分沉淀，离心，得到沉淀和上清液； (c) 、将沉淀溶解于PBS溶液后透析，去除硫酸铵，即得。
2. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤（a)中，所述硫酸铵溶液的体 积与所述小麦胚芽蛋白溶液的体积为〇. 4-0. 8:1，优选为0. 5:1。
3. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤（a)中，所述离心为：在0-6°C 条件下，以转速为5000r/min，离心20min。
4. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤（b)中，所述饱和硫酸铵溶液 与所述第一上清溶液的体积比为1-1. 2 :1，优选为1:1。
5. 根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，在步骤（b)中，所述充分沉淀为： 在搅拌速度为180r/min条件下，将饱和硫酸铵添加到上清液中，添加完毕后混匀，得 到混合液； 将得到的混合液于0-6°C条件下静置10h。
6. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤（b)中，所述离心为：在0-6°C 条件下，以转速为l〇〇〇〇r/min，离心35min。
7. 根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，重复步骤（b) 1次，收集沉淀。
8. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤（c)中，所述透析在0_6°C进 行； 所述透析采用3500道尔顿的透析膜进行。
9. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（a)具体为： 在搅拌速度为180r/min条件下，将35 %的硫酸铵溶液添加到小麦胚芽蛋白溶液中，添 加完毕后混匀，得到混合液； 将得到的混合液于〇_6°C条件下静置4-6h。
10. 根据权利要求1-9任一项所述的制备方法，其特征在于，所述小麦胚芽蛋白溶液通 过以下方法制备： (a) 、将小麦子粒浸泡于蒸馏水中，28-35°C下培养，培养的空气湿度为80 % -85 %，培 养2-3d，粉碎至80-100目，得到粉碎混合物； (b) 、将所述粉碎混合物以5000r/min的转速离心，得到第一上清液； (c) 、将所述第一上清液以8000r/min的转速离心，得到含有胚芽细胞的第二上清液； (d) 、将所述第二上清液酶解，酶解的温度为25-27°C，时间为l_2h ; 其中，所述酶解采用的酶解液含有糖酶、蛋白酶、脂肪酶、3-肌醇六磷酸酶； 所述糖酶的添加量为所述第二上清液重量的〇. 8% -1. 2% ;所述蛋白酶的添加量为 所述第二上清液重量的〇. 05% -0. 1% ;所述脂肪酶的添加量为所述第二上清液重量的 0. 4% -0. 5% ;所述3-肌醇六磷酸酶的添加量为所述第二上清液重量的0. 05% -0. 15% ; (e) 、在0-6°C的条件下，将酶解完成的混合物于18000r/min离心35min，得到的上清液 即为小麦胚芽蛋白溶液。
【文档编号】C07K1/34GK104497101SQ201510024169
【公开日】2015年4月8日 申请日期:2015年1月16日 优先权日:2015年1月16日
【发明者】黄海军 申请人:北京七秀时代科技有限公司