一种利用共固定化酶合成D-丙氨酸的方法与流程

文档序号:11936866阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种利用共固定化酶合成d-丙氨酸的方法,其特点在于,包括以下步骤:(1)将一定比例的meso-二氨基庚二酸脱氢酶突变体酶液和甲酸脱氢酶酶液混 合,加入环氧基树脂或者活化后的氨基树脂,室温下搅拌15-30小时,取出载体,用缓冲液洗至无游离蛋白,将载体加入到一定浓度的封闭剂溶液中25°C搅拌6-10小时,取出载体后将其用缓冲液洗三遍,4°C保存备用;(2)α-酮酸、α-酮酸盐和氨基化合物作为底物与溶剂构成的反应体系中加入共固定化酶和少量辅酶进行催化还原胺化反应,反应温度20~60 °C,反应pH值为6~11,反应时间4~72小时,制得光学纯度>98% d-氨基酸;(3)将反应液直接滤除,共固定化酶回收重复使用,得到的反应液通过酸性离子树脂吸附分离得到d-丙氨酸。

2.如权利要求1一种利用共固定化酶合成d-丙氨酸的方法,其特征在于,来源于嗜热共生杆菌(Symbiobacterium thermophilum)meso-二氨基庚二酸脱氢酶突变体的突变位点为第35位精氨酸(R)替换为谷氨酸(E),即R35E。

3.如权利要求1一种利用共固定化酶合成d-丙氨酸的方法,其特征在于,来源于嗜热共生杆菌(Symbiobacterium thermophilum)meso-二氨基庚二酸脱氢酶突变体的第35位精氨酸(R)替换为谷氨酸(E);将第36位精氨酸(R)替换为缬氨酸(V),即R35E/R36V。

4.如权利要求1一种利用共固定化酶合成d-丙氨酸的方法,其特征在于,来源于嗜热共生杆菌(Symbiobacterium thermophilum)meso-二氨基庚二酸脱氢酶突变体的第35位精氨酸(R)替换为天冬氨酸(D);将第36位精氨酸(R)替换为缬氨酸(V),即R35D/R36V。

5.如权利要求1一种利用共固定化酶合成d-丙氨酸的方法,其特征在于,来源于嗜热共生杆菌(Symbiobacterium thermophilum)meso-二氨基庚二酸脱氢酶突变体的第35位精氨酸(R)替换为天冬氨酸(D);第36位精氨酸(R)替换为谷氨酰胺(Q),即R35D/R36Q。

6.如权利要求1一种利用共固定化酶合成d-丙氨酸的方法,其特征在于,来源于嗜热共生杆菌(Symbiobacterium thermophilum)meso-二氨基庚二酸脱氢酶突变体的第35位精氨酸(R)替换为谷氨酸(E);将第36位精氨酸(R)替换为缬氨酸(V);将第76位酪氨酸(Y)替换为缬氨酸(V),即R35E/R36V/Y76V。

7.如权利要求1一种利用共固定化酶合成d-丙氨酸的方法,其特征在于,来源于嗜热共生杆菌(Symbiobacterium thermophilum)meso-二氨基庚二酸脱氢酶突变体为权利要求2、3、4、5、6所述突变的任何一种,或者与其氨基酸序列相似度不低于80%酶。

8.如权利要求1一种利用共固定化酶合成d-丙氨酸的方法,其特征在于,所述共固定酶所用载体为表面含有环氧基或者氨基的树脂,如ES-1,ES-101,ES-102,ES-103,ESR-1,ESR-2, ESR-3, ESQ-1。

9.如权利要求1一种利用共固定化酶合成d-丙氨酸的方法,其特征在于,共固定酶中meso-二氨基庚二酸脱氢酶突变体酶液和甲酸脱氢酶两种酶的酶量比例在1:1-1:5之间,所选封闭剂包括盐酸乙二胺、二乙胺和α-甲基苄胺,乙醇胺等,封闭剂浓度在0.1mmol/g载体-3mmol/g载体。

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