DNA甲基化检测的制作方法

文档序号:12743889阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种检测靶寡核苷酸分子的甲基化的方法,其包含获得由于带电甲基化检测分子与所述靶寡核苷酸分子的结合而出现的电性变化;其中所述带电甲基化检测分子具有与甲基化胞嘧啶核苷酸的亲和力。

2.根据权利要求1所述的方法,其中所述带电甲基化检测分子选自由以下组成的群组:抗甲基胞嘧啶抗体、甲基结合域蛋白质和限制酶。

3.根据权利要求1所述的方法,其中所述电性变化为阈值电压位移变化。

4.根据权利要求1所述的方法,其中所述靶寡核苷酸分子具有具有至少一个甲基化胞嘧啶核苷酸的靶序列,且所述方法包含:

通过识别单链寡核苷酸分子捕获所述靶寡核苷酸分子的单链以根据碱基互补性形成双螺旋;

提供所述带电甲基化检测分子;和

将所述双螺旋与所述带电甲基化检测分子结合且检测由所述结合所致的电性变化。

5.根据权利要求4所述的方法,其中由所述靶寡核苷酸分子的单链和所述识别单链寡核苷酸分子形成的所述双螺旋包含凸出部分且所述甲基化胞嘧啶核苷酸安置于所述凸出部分中。

6.根据权利要求4所述的方法,其中所述识别单链寡核苷酸分子附接到固体表面或所述识别单链寡核苷酸分子与所述固体表面间隔开一定距离。

7.根据权利要求6所述的方法,其中所述固体表面为场效应晶体管FET的晶体管表面或表面等离子体共振SPR的金属表面。

8.根据权利要求6所述的方法,其中所述固体表面的材料为多晶硅或单晶硅。

9.根据权利要求6所述的方法,其中所述固体表面与检测所述电性变化的电性变化检测元件耦接。

10.根据权利要求9所述的方法,其中所述电性变化检测元件为场效应晶体管或表面等离子体共振。

11.根据权利要求4所述的方法,其中所述识别单链寡核苷酸分子为包含至少一个电中性核苷酸和至少一个带负电核苷酸的部分中性单链寡核苷酸。

12.根据权利要求11所述的方法,其中所述电中性核苷酸包含经C1-C6烷基取代的磷酸酯基。

13.根据权利要求11所述的方法,其中所述带负电核苷酸包含未经取代的磷酸酯基。

14.根据权利要求11所述的方法,其中所述识别单链寡核苷酸分子附接到固体表面,且所述部分中性单链寡核苷酸包含附接到所述固体表面的第一部分;所述第一部分的长度为所述部分中性单链寡核苷酸的总长度的约50%;且所述第一部分包含至少一个电中性核苷酸和至少一个带负电核苷酸。

15.根据权利要求1所述的方法,其包含以下步骤:

(a)提供

所述靶寡核苷酸分子的单链;

所述识别单链寡核苷酸分子;

具有无甲基化胞嘧啶核苷酸的靶序列的参考单链寡核苷酸分子;和

所述带电甲基化检测分子;

(b)分别用所述识别单链寡核苷酸分子捕获所述靶寡核苷酸分子的单链以形成靶双螺旋,且用所述识别单链寡核苷酸分子捕获所述参考单链寡核苷酸分子以形成参考双螺旋;

(c)分别使所述带电甲基化检测分子与所述靶双螺旋接触以形成靶复合物,且使所述带电甲基化检测分子与所述参考双螺旋接触;且去除自由形式的所述带电甲基化检测分子;且

(d)监测所述靶复合物与所述参考双螺旋之间的电性变化。

16.一种用于检测靶寡核苷酸分子的甲基化的试剂盒,其包含:

具有与甲基化胞嘧啶核苷酸的亲和力的带电甲基化检测分子;和

用于检测电性变化的电性变化检测元件。

17.根据权利要求16所述的试剂盒,其中所述带电甲基化检测分子选自由以下组成的群组:抗甲基胞嘧啶抗体、甲基结合域蛋白质和限制酶。

18.根据权利要求16所述的试剂盒,其进一步包含识别单链寡核苷酸分子,所述分子能够捕获所述靶寡核苷酸分子的单链以根据碱基互补性形成双螺旋。

19.根据权利要求18所述的试剂盒,其中所述识别单链寡核苷酸分子能够与所述靶寡核苷酸分子的单链形成包含凸出部分的双螺旋,且所述甲基化胞嘧啶核苷酸安置于所述凸出部分中。

20.根据权利要求19所述的试剂盒,其中所述识别单链寡核苷酸分子附接到固体表面或所述识别单链寡核苷酸分子与所述固体表面间隔开一定距离。

21.根据权利要求20所述的试剂盒,其中所述固体表面为场效应晶体管的晶体管表面或表面等离子体共振的金属表面。

22.根据权利要求20所述的试剂盒,其中所述固体表面的材料为多晶硅或单晶硅。

23.根据权利要求16所述的试剂盒,其中所述电性变化检测元件为场效应晶体管或表面等离子体共振。

24.根据权利要求17所述的试剂盒,其中所述识别单链DNA分子为包含至少一个电中性核苷酸和至少一个带负电核苷酸的部分中性单链寡核苷酸。

25.根据权利要求24所述的试剂盒,其中所述电中性核苷酸包含经C1-C6烷基取代的磷酸酯基。

26.根据权利要求24所述的试剂盒,其中所述带负电核苷酸包含未经取代的磷酸酯基。

27.根据权利要求24所述的试剂盒,其中所述识别单链寡核苷酸分子附接到固体表面,且所述部分中性单链寡核苷酸包含附接到所述固体表面的第一部分;所述第一部分的长度为所述部分中性单链寡核苷酸的总长度的约50%;且所述第一部分包含至少一个电中性核苷酸和至少一个带负电核苷酸。

28.根据权利要求16所述的试剂盒,其进一步包含具有无甲基化胞嘧啶核苷酸的靶序列的参考单链寡核苷酸分子。

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