用于表达EGFR的单细胞分选和多基因位点检测的微流控芯片的制作方法

文档序号:11808351阅读:来源:国知局

技术特征:

1.用于表达EGFR的单细胞分选和多基因位点检测的微流控芯片,其特征在于,所述微流控芯片包括依次叠放在一起并相互密封的四层结构,由上至下分别为顶盖、微流体通道层、带有微柱和微孔阵列的基板以及带有腔体组的底板;

所述顶盖上设有一个样品入口、一个样品出口以及一个废液口;所述样品入口与微流体通道层的U形主流道上的样品进入口连通,所述样品出口与微流体通道层的U形主流道上的样品流出口连通,所述废液出口与微流体通道层的分支流道上的废液口连通;

所述微流体通道层上设有一条U形主流道,U形主流道的一端设有样品进入口,另一端设有样品流出口;带有样品进入口一侧的主流道的前段较宽,设有过滤区,用于过滤样品,除去较大杂质;主流道的中段是分选区,用于分离肿瘤细胞;带有样品流出口一侧的主流道的后段较窄,设有捕获区,用于限定液体流动进行单细胞捕获;主流道上还设有一条与分选区垂直设置的分支流道,分支流道的另一端设有废液口,其与顶盖上的废液出口连通,用于废液的流出;所述主流道的过滤区,分选区以及捕获区分别位于基板上的过滤区、分选区和捕获区上方;

所述带有微柱和微孔阵列的基板上设有过滤区、分选区和捕获区;过滤区由间距渐变的排状分布的微柱阵列组成;分选区由大小和间距统一的微柱阵列组成;捕获区带有微孔阵列,所有的微柱和微孔设置在相应的微流体通道层下方,微孔的内部设有电极,阴极和阳极成对设置在微孔侧壁上;每个微孔具有与下层底板相连通的通道;

所述带有腔体组的底板上设有多个腔体,每个腔体由收集腔和扩增腔组成,收集腔通过连通孔与基板捕获区对应的微孔相连,用于分开收集不同微孔中的细胞裂解液;收集腔和扩增腔之间用微阀连接;扩增腔内预置有多重置换扩增试剂和/或PCR扩增试剂,用于扩增细胞裂解液中的DNA以及检测EGFR基因上的多个突变位点。

2.根据权利要求1所述的微流控芯片,其特征在于,所述微流体通道层上设有的通道深度为10~200微米,主流道过滤区宽度为1~10毫米;主流道分选区宽度为1~10毫米,主流道捕获区宽度为10~5000微米。

3.根据权利要求1或2所述的微流控芯片,其特征在于,所述带有微柱和微孔阵列的基板,其每个微孔中的电极可以分别控制其是否通电。

4.根据权利要求1-3任一项所述的微流控芯片,其特征在于,所述带有微柱和微孔阵列的基板,过滤区的微柱阵列由直径为5~200微米,高为10~200微米的圆柱排状分布组成,其微柱阵列的间距渐变,为50~500微米;分选区的微柱阵列由直径为5~50微米,高为10~200微米的圆柱排状分布组成,微柱间距为10~200微米;捕获区的微孔深度为5~100微米,是边长为5~100微米的正方形或长方形,或直径为5~100微米的圆形。

5.根据权利要求1-4任一项所述的微流控芯片,其特征在于,所述带有腔体组的底板,其腔体组数量可变,可以多个微孔对应一个腔体,也可以每个腔体对应一个微孔,从而分别收集不同微孔中的细胞裂解液。

6.根据权利要求1-5任一项所述的微流控芯片,其特征在于,所述顶盖是透明的;所述顶盖、微流体通道层、带有微孔阵列的基板以及带有腔体组的底板由绝缘材料制成,或者由绝缘材料包裹着非绝缘材料制成。

7.根据权利要求1-6任一项所述的微流控芯片,其特征在于,所述样品是来自于活体组织、血液或体外培养的细胞悬液。

8.根据权利要求1-7任一项所述的微流控芯片,其特征在于,所述带有腔体组的底板,其扩增腔内所含PCR扩增试剂中包含EGFR基因第18、19、20和/或21外显子特异性PCR扩增引物。

9.用于EGFR基因多个突变位点单细胞水平检测的系统,其特征在于,所述系统包括权利要求1-8任一项所述的微流控芯片,荧光探针,荧光显微镜,图像处理设备,注射泵,微阀控制器,恒温水浴箱,电压发生器和PCR扩增仪。

10.根据权利要求9所述的系统,其特征在于,所述荧光探针是指标记了荧光分子的抗体或多肽,可以单独使用一种荧光探针来实现对单一蛋白EGFR的鉴定,也可以同时使用多种荧光探针来实现对多种目的蛋白的鉴定。

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