重组酶聚合酶扩增试剂盒、扩增方法及扩增试剂与流程

本发明涉及一种恒温扩增技术，更具体地说，涉及一种重组酶聚合酶扩增（rpa）试剂盒、扩增方法及扩增试剂。

背景技术：

传统的体外dna扩增主要是采用聚合酶链式反应（pcr）的方法，目前已经广泛应用于生物医学等领域。pcr由变性—退火—延伸三个基本反应步骤构成：（1）模板dna的变性，模板dna经加热至90-95℃一定时间后，使模板dna双链或经pcr扩增形成的双链dna解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；（2）模板dna与引物的退火，模板dna经加热变性成单链后，温度降至55-60℃，引物与模板dna单链的互补序列配对结合；（3）引物的延伸，dna模板—引物结合物在dna聚合酶的作用下，于70-75℃条件下，以dntp为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板dna链互补的半保留复制链，重复循环变性—退火—延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2-4分钟，2-3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。pcr技术的优点显而易见，但由于其需要精密的温度循环仪器才能完成扩增过程，对仪器的依赖程度较高，加之成本高、反应耗时长，这些局限性使其应用大多限制于条件良好的实验室内，难以广泛应用于现场检测。

因此，需要一种提供不依赖于pcr仪等温度循环仪器的扩增方法。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种重组酶聚合酶扩增试剂盒、扩增方法及扩增试剂，在恒温条件下实现对特定核酸序列的高效扩增，使得核酸扩增的过程可以直接在无需pcr仪等温度循环仪器的条件下完成。

本发明提供了一种重组酶聚合酶扩增试剂盒，所述试剂盒包括以下组分：ecolireca蛋白、λphageorf蛋白、ecolissb蛋白及dna聚合酶。

优选的，所述试剂盒还包括扩增反应缓冲液，所述扩增反应缓冲液包括tris缓冲液，所述扩增反应缓冲液还包括聚乙二醇、二硫苏糖醇、磷酸肌酸和肌酸激酶中的一种或多种。

优选的，所述试剂盒还包括镁离子制剂。

本发明还提供了一种重组酶聚合酶扩增方法，所述方法包括以下步骤：

a、配置反应体系，所述反应体系包括：模板核酸分子、引物组、ecolireca蛋白、λphageorf蛋白、ecolissb蛋白、dna聚合酶、dntp、atp及扩增反应缓冲液，所述扩增反应缓冲液包括tris缓冲液；

b、向所述反应体系中加入镁离子制剂；

c、在20至65℃条件下进行扩增反应。

优选的，所述扩增反应缓冲液还包括聚乙二醇、二硫苏糖醇、磷酸肌酸和肌酸激酶中的一种或多种。

优选的，所述引物组包括一对引物，所述引物的长度为30至65bp。

优选的，所述ecolireca蛋白浓度为20至250ng/μl；所述λphageorf蛋白浓度为20至80ng/μl；所述ecolissb蛋白的浓度为200至1000ng/μl。

本发明还提供了一种重组酶聚合酶扩增试剂，所述试剂包括：ecolireca蛋白、λphageorf蛋白、ecolissb蛋白及dna聚合酶。

优选的，所述扩增试剂还包括扩增反应缓冲液，所述扩增反应缓冲液包括tris缓冲液；所述扩增反应缓冲液还包括聚乙二醇、二硫苏糖醇、磷酸肌酸和肌酸激酶中的一种或多种。

优选的，所述ecolireca蛋白浓度为20至250ng/μl；所述ecolissb蛋白浓度为200至1000ng/μl；所述λphageorf蛋白浓度为20至80ng/μl。

本发明的重组酶聚合酶扩增试剂盒，采用ecolireca蛋白、ecolissb蛋白及λphageorf蛋白协同作用的扩增体系，扩展了重组酶聚合酶扩增的应用范围；与传统pcr技术相比，本发明的重组酶聚合酶扩增反应在恒温条件下即可进行，无需pcr仪等温度循环仪器，不受实验空间限制；本发明的扩增反应在10至60分钟即可完成，远快于pcr技术或其他等温扩增技术。

附图说明

图1是第一具体实施例中重组酶聚合酶扩增及对照pcr扩增的琼脂糖凝胶电泳检测图。

图2是第二具体实施例中重组酶聚合酶扩增的毛细管电泳检测图。

图3是第三具体实施例中重组酶聚合酶扩增的琼脂糖凝胶电泳检测图。

图4是第四具体实施例中重组酶聚合酶扩增的琼脂糖凝胶电泳检测图。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。

本发明提出第一实施例，一种重组酶聚合酶扩增试剂盒，包括以下组分：ecolireca蛋白、λphageorf蛋白、ecolissb蛋白及dna聚合酶。

需要说明的是，本发明的重组酶聚合酶扩增是基于生物体内同源重组原理的恒温扩增技术：在适宜温度下，重组酶ecolireca蛋白和λphageorf蛋白共同作用，与引物结合形成酶和引物的复合体，复合体定位到模板核酸分子同源靶序列上并形成链置换；单链结合蛋白与被置换的核苷酸链结合，防止进一步置换；在dna聚合酶的作用下启动dna链合成，对模板核酸分子上的目标区域进行扩增。

本发明重组酶聚合酶扩增试剂盒中，所述ecolireca蛋白和ecolissb蛋白来源于大肠杆菌，λphageorf蛋白来源于λ噬菌体。本发明的λphageorf蛋白与ecolireca蛋白和ecolissb蛋白的种属来源不同，但可以在同一体系中共同作用并实现重组酶聚合酶扩增，从而大大扩展了重组酶聚合酶扩增技术的应用范围。需要说明的是，本文所称的“来源”仅指其种类，而不是指蛋白的制备来源。

本发明一实施方式中，所述dna聚合酶优选为在20至65℃条件下有链置换活性的dna聚合酶。

本发明一实施方式中，所述dna聚合酶优选为saudna聚合酶、bsudna聚合酶或bstdna聚合酶。

本发明一实施方式中，所述试剂盒还包括dntp，所述dntp为dttp、datp、dgtp和dctp的等摩尔比混合液；在扩增过程中，所述dntp用作dna链合成的底物。

本发明一实施方式中，所述试剂盒还包括atp；在扩增过程中，所述atp为模板核酸分子和复合体之间的链置换过程提供能量。

本发明一实施方式中，所述试剂盒还包括扩增反应缓冲液，所述扩增反应缓冲液包括tris缓冲液；所述tris缓冲液用于维持反应体系的ph值。

本发明一实施方式中，所述扩增反应缓冲液还包括聚乙二醇；向反应体系中加入聚乙二醇后，聚乙二醇作为高分子物质，占据了反应体系中体积的很大部分，同时排斥其他组分进入此空间，从而使得扩增体系中其他组分更充分地接触，进而提高扩增效率。

本发明一实施方式中，所述聚乙二醇的平均分子量为3000至20000；该分子量范围内的聚乙二醇，对反应体系中其他组分的排斥作用更明显。

本发明一实施方式中，所述扩增反应缓冲液还包括二硫苏糖醇；所述二硫苏糖醇可以有效防止ecolireca蛋白和dna聚合酶被氧化。

本发明一实施方式中，所述扩增反应缓冲液还包括磷酸肌酸和肌酸激酶；所述磷酸肌酸和肌酸激酶用于催化atp再生，这一过程可以不断重复，从而可以保证高效扩增。

需要说明的是，本发明试剂盒中tris缓冲液、聚乙二醇、二硫苏糖醇、磷酸肌酸和肌酸激酶还可以分开储存，在试剂盒使用时再加以混合。

本发明一实施方式中，所述试剂盒还包括镁离子制剂，所述镁离子制剂用于激活dna聚合酶，从而缩短反应时间。

需要说明的是，试剂盒中镁离子制剂与其他组分分开储存，试剂盒使用过程中，将试剂盒中其他组分充分混合后，再向其中加入镁离子制剂，能够避免出现非特异性扩增。

本发明一实施方式中，所述镁离子制剂为醋酸镁或氯化镁。

本发明提出了第二实施例，一种重组酶聚合酶扩增方法，包括以下步骤：

a、配置反应体系，所述反应体系包括：模板核酸分子，引物组，ecolireca蛋白，λphageorf蛋白，ecolissb蛋白，dna聚合酶，dntp、atp及扩增反应缓冲液，所述扩增反应缓冲液包括tris缓冲液；

b、向所述反应体系中加入镁离子制剂。

c、在20至65℃条件下进行扩增反应。

所述模板核酸分子可以是双链dna分子、也可以是由rna反转录合成的cdna分子。

本发明所述tris缓冲液用于维持反应体系的ph值，本实施例的ph范围在7.0至8.0。

本发明一实施方式中，所述扩增反应缓冲液还包括聚乙二醇；向反应体系中加入聚乙二醇后，聚乙二醇作为高分子物质，占据了反应体系中体积的很大部分，同时排斥其他组分进入此空间，从而使得扩增体系中其他组分更充分地接触，进而提高扩增效率。

本发明一实施方式中，所述聚乙二醇的平均分子量为3000至20000；该分子量范围内的聚乙二醇，对反应体系中其他组分的排斥作用更明显。

本发明一实施方式中，所述扩增反应缓冲液还包括二硫苏糖醇；所述二硫苏糖醇可以有效防止混合液中的ecolireca蛋白和dna聚合酶被氧化。

本发明一实施方式中，所述扩增反应缓冲液还包括磷酸肌酸和肌酸激酶；所述磷酸肌酸和肌酸激酶用于催化atp再生，这一过程可以不断重复，从而可以保证核酸分子的高效扩增。

所述镁离子制剂用于激活dna聚合酶，从而缩短反应时间，所述反应体系制备完成后再向其中加入镁离子制剂，能够避免出现非特异性扩增。本发明一实施方式中，所述镁离子制剂为醋酸镁或氯化镁。

本发明一实施方式中，所述模板核酸分子为双链dna分子。

本发明一实施方式中，以人类全血dna作为模板核酸分子。

本发明一实施方式中，所述引物组包括一对引物；所述引物的长度30至65bp，本方案能够保证链置换过程中识别的特异性。

本发明一实施方式中，分别以actinrpa-0_f（seqidno:1）、actinrpa-0_r（seqidno:2）；actinrpa-1_f（seqidno:3）、actinrpa-1_r（seqidno:4）；actinrpa-2_f（seqidno:5）、actinrpa-2_r（seqidno:6）；或actinrpa-3_f（seqidno:7）、actinrpa-3_r（seqidno:8）作为引物组，对所述模板核酸分子进行重组酶聚合酶扩增。

本发明一实施方式中，所述dna聚合酶为在20至65℃条件下有链置换活性的dna聚合酶，本方案的dna聚合酶应用于重组酶聚合酶扩增过程中，使得扩增反应在常温下能够快速进行。

本发明一实施方式中，所述dna聚合酶为saudna聚合酶、bsudna聚合酶或bstdna聚合酶。

本发明一实施方式中，所述模板核酸分子的浓度为10pg/μl至100ng/μl；在本方案的浓度范围内，模板核酸分子的扩增反应能够高效进行。

本发明一实施方式中，所述引物组中每种引物的浓度为0.1至1.0μm；在本方案的浓度范围内，模板核酸分子的扩增反应能够高效进行。

本发明一实施方式中，所述ecolireca蛋白浓度为20至250ng/μl；所述λphageorf蛋白浓度为20至80ng/μl；所述ecolissb蛋白浓度为200至1000ng/μl；在本方案的浓度范围内，ecolireca蛋白、ecolissb蛋白和λphageorf蛋白能够更好地发挥协同作用，从而使得扩增效率更高。

本发明一实施方式中，所述dna聚合酶浓度为5至120ng/μl；在本方案的浓度范围内，模板核酸分子的聚合反应能够高效进行。

本发明一实施方式中，所述dntp为dttp、datp、dgtp和dctp的等摩尔比混合液；所述dntp的浓度优选为0.1至3mm；所述dntp用作聚合反应合成dna链的底物。

本发明一实施方式中，所述atp的浓度为1至10mm；在扩增过程中，所述atp为模板核酸分子和复合体之间的链置换过程提供能量，在本方案的浓度范围内，有利于促进扩增反应的进行。

本发明一实施方式中，所述tris缓冲液浓度为20至500mm；本方案的ph范围在7.0至8.0；本方案有利于扩增反应的进行。

本发明一实施方式中，所述聚乙二醇的浓度为2.5至10mm；在本方案的浓度范围内，有利于扩增反应的进行。

本发明一实施方式中，所述磷酸肌酸浓度为20至100mm；所述肌酸激酶浓度为10至1000ng/μl；在本方案的浓度范围内，有利于促进atp的再生。

本发明一实施方式中，所述二硫苏糖醇的浓度为2.5至10mm；在本方案的浓度范围内，有利于避免ecolireca蛋白和dna聚合酶被氧化。

优选的，所述镁离子制剂在反应混合液中的浓度为5至30mm；在本方案的浓度范围内，有利于激活dna聚合酶作用。

本发明提出了第三实施例，一种重组酶聚合酶扩增试剂，包括以下组分：ecolireca蛋白；λphageorf蛋白；ecolissb蛋白；dna聚合酶。

本发明一实施方式中，所述试剂还包括dntp；所述dntp为dttp、datp、dgtp和dctp的等摩尔比混合液，所述dntp用作dna链合成的底物。本发明一实施方式中，所述试剂还包括atp；所述atp为模板核酸分子和复合体之间的链置换过程提供能量。

本发明一实施方式中，所述试剂还包括扩增反应缓冲液，所述扩增反应缓冲液包括tris缓冲液；所述tris缓冲液用于维持反应体系的ph值，本实施例的ph范围在7.0至8.0。

本发明一实施方式中，所述扩增反应缓冲液还包括磷酸肌酸和肌酸激酶；所述磷酸肌酸和肌酸激酶用于催化atp再生，这一过程可以不断重复，从而可以保证核酸分子的高效扩增。

本发明一实施方式中，所述扩增反应缓冲液还包括聚乙二醇；向反应体系中加入聚乙二醇后，聚乙二醇作为高分子物质，占据了反应体系中体积的很大部分，同时排斥其他组分进入此空间，从而使得扩增体系中其他组分更充分地接触，进而提高扩增效率。

本发明一实施方式中，所述聚乙二醇的平均分子量为3000至20000；该分子量范围内的聚乙二醇，对反应体系中其他组分的排斥作用更明显。

本发明一实施方式中，所述扩增反应缓冲液还包括二硫苏糖醇；所述二硫苏糖醇可以有效防止ecolireca和dna聚合酶被氧化。

本发明一实施方式中，所述试剂还包括引物组，所述引物组包括一对引物；所述引物的长度为30至65bp，本方案能够保证链置换过程中识别的特异性。

本发明一实施方式中，所述ecolireca蛋白浓度为20至250ng/μl；所述λphageorf蛋白浓度为20至80ng/μl；所述ecolissb蛋白浓度为200至1000ng/μl。

本发明一实施方式中，所述dna聚合酶浓度为5至120ng/μl。

本发明一实施方式中，所述引物组中每种引物的浓度为0.1至1.0μm。

本发明一实施方式中，所述dntp的浓度范围为0.1至3mm。

本发明一实施方式中，所述atp的浓度为1至10mm。

本发明一实施方式中，所述tris缓冲液浓度为20至500mm。

本发明一实施方式中，所述聚乙二醇的浓度为2.5至10mm。

本发明一实施方式中，所述磷酸肌酸浓度为20至100mm；所述肌酸激酶浓度为10至1000ng/μl。

本发明一实施方式中，所述二硫苏糖醇的浓度为2.5至10mm。

以下通过具体实施例对本发明进行进一步的详细说明。

本发明第一具体实施例，提供了一种重组酶聚合酶扩增方法，本实施例在配置反应体系之前还包括提取核酸分子的步骤a0，扩增步骤如下：

a0、提取核酸分子，本实施例按血液基因组提取试剂盒的方法提取人类全血dna分子；

a、配置反应体系：模板核酸分子、引物组、ecolireca蛋白、λphageorf蛋白、ecolissb蛋白、dna聚合酶、dntp、atp及tris缓冲液。具体的，本实施例中配置以下浓度的2×预混液：200ng/μlecolireca蛋白、50ng/μlλphageorf蛋白、508ng/μlecolissb蛋白、160ng/μlbsu蛋白、5mmatp、4mmdntp、100mmtris缓冲液（ph7.5）、10mm二硫苏糖醇、100mm磷酸肌酸、200ng/μl肌酸激酶、10.92%(w/v)聚乙二醇。

在200μl离心管中分别加入：1μl浓度为9μg/μl的人类全血dna；上述引物组：5μl浓度为10μm的上游引物actinrpa-4_f（seqidno:9）、5μl浓度为10μm的下游引物actinrpa-4_r（seqidno:10）；25μl2×预混液；9μl去离子水；混匀并离心。

b、向上述反应体系中加入镁离子制剂：具体的，本实施例中向步骤a的反应体系中加入5μl浓度为140mm的醋酸镁溶液，充分混匀并离心。

c、在20至65℃条件下进行扩增反应：本实施例将离心管置于37℃的恒温金属浴中保温4min；取出反应管，充分地上下颠倒4-5次，混匀并离心，再进行同样条件的孵育，保温20min。

反应结束后，取出离心管，取样并进行琼脂糖凝胶电泳检测，检测结果如图1中5-8泳道所示。

作为对照实验，本发明还对人类全血dna分子进行了pcr扩增，扩增步骤如下：

a’、按血液基因组提取试剂盒的方法提取人类全血dna分子；

b’、在200μl离心管中分别加入：1μl浓度为9μg/μl的人类全血dna；5μl浓度为10μm的上游引物actinrpa-4_f（seqidno:9）；5μl浓度为10μm的下游引物actinrpa-4_r（seqidno:10）；和9μl去离子水；25μl2×taqmix，混匀并离心；

c’、将离心管置于pcr仪中，设置反应程序：95℃条件下持续1分钟，60℃条件下持续30秒，72℃条件下持续30秒，一共30个循环，开始pcr反应；

反应结束后，取出反应管，取样并进行琼脂糖凝胶电泳检测，检测结果如图1中1-4泳道所示。

图1中泳道1-3为pcr扩增情况，泳道4为pcr扩增的阴性对照，泳道5为重组酶聚合酶扩增的阴性对照，泳道6-8为重组酶聚合酶扩增情况，0为分子大小标记物。从实验结果中可以看出，本实施例的重组酶聚合酶扩增与pcr扩增所获得的产量相差不大。这说明本实施例的重组酶聚合酶扩增方法能够有效对模板核酸分子进行扩增；但与常规pcr技术相比，操作简便，大大缩短了扩增时间，不需要精密的温度仪器即可实现。

本发明第二具体实施例，与第一具体实施例的区别在于，本实施例分别以上游引物actinrpa-0_f（seqidno:1）和下游引物actinrpa-0_r（seqidno:2）；上游引物actinrpa-1_f（seqidno:3）和下游引物actinrpa-1_r（seqidno:4）；上游引物actinrpa-2_f（seqidno:5）和下游引物actinrpa-2_r（seqidno:6）；上游引物actinrpa-3_f（seqidno:7）和下游引物actinrpa-3_r（seqidno:8）作为引物组，构成四个反应体系。对人类全血dna进行重组酶聚合酶扩增。扩增反应结束后取样并进行第二毛细管电泳检测，结果如图2所示。

图2中泳道1-3为actinrpa-0为引物的扩增情况，泳道4-6为actinrpa-01为引物的扩增情况，泳道7-9为actinrpa-02为引物的扩增情况，泳道10-12为actinrpa-03为引物的扩增情况。结果表明，本实施例actinrpa-0、actinrpa-01、actinrpa-02、actinrpa-03均能顺利扩增，获得目的产物。本实施例说明本实施例的重组酶聚合酶扩增方法能够有效对人类全血dna分子进行扩增。

本发明第三具体实施例，扩增步骤如下：

a0、提取核酸分子，本实施例按血液基因组提取试剂盒的方法提取人类全血dna分子；

a、配置三个包括不同引物组的反应体系：模板核酸分子、引物组、ecolireca蛋白、λphageorf蛋白、ecolissb蛋白、dna聚合酶、dntp、atp及tris缓冲液。具体的，本实施例中配置以下浓度的2×预混液：40ng/μlecolireca蛋白、160ng/μlλphageorf蛋白、400ng/μlecolissb蛋白、10ng/μlsau蛋白、0.2mmdntp、2mmatp、40mmtris缓冲液、40mm磷酸肌酸、20ng/μl肌酸激酶、4%(w/v)聚乙二醇。

在200μl离心管中分别加入：1μl浓度为0.45pg/μl的人类全血dna；上述不同引物组：5μl浓度为0.9μm的上游引物、5μl浓度为0.9μm的下游引物；25μl2×预混液；9μl去离子水，混匀并离心；

上述不同引物组分别为上游引物cftrrpa-5_f（seqidno:11）和下游引物cftrrpa-5_r（seqidno:12）；上游引物cftrrpa-6_f（seqidno:13）和下游引物cftrrpa-6_r（seqidno:14）；上游引物cftrrpa-7_f（seqidno:15）和下游引物cftrrpa-7_r（seqidno:16）。

b、向上述反应体系中加入镁离子制剂：具体的，本实施例中向步骤a的反应体系中加入5μl浓度为270mm的氯化镁溶液，充分混匀并离心。

c、在20至65℃条件下进行扩增反应：将离心管置于20℃的恒温金属浴中保温4min；取出反应管，充分地上下颠倒4-5次，混匀并离心，再进行同样条件的孵育，保温20min。

反应结束后，取出离心管，取样并进行琼脂糖凝胶电泳检测。

琼脂糖凝胶电泳检测如图3所示，图3中泳道0为分子大小标记物，泳道1-2为cftrrpa-5为引物的扩增情况，泳道3-4为cftrrpa-6为引物的扩增情况，泳道5-6为cftrrpa-7为引物的扩增情况。结果表明，本实施例的重组酶聚合酶扩增方法能够有效对人类全血dna分子进行扩增。

本发明第四具体实施例，提供了一种重组酶聚合酶扩增方法，扩增步骤如下：

a0、提取核酸分子，本实施例按血液基因组提取试剂盒的方法提取人类全血dna；

a、配置六个包括不同引物组的反应体系：模板核酸分子、引物组、ecolireca蛋白、λphageorf蛋白、ecolissb蛋白、dna聚合酶、dntp、atp及tris缓冲液。具体的，本实施例中配置以下浓度的2×预混液：500ng/μlecolireca蛋白；40ng/μlλphageorf蛋白；2000ng/μlecolissb蛋白；240ng/μlbst蛋白；6mmdntp；20mmatp；1000mmtris缓冲液；40mm磷酸肌酸；2000ng/μl肌酸激酶；20%(w/v)聚乙二醇。

在200μl离心管中分别加入：1μl浓度为4.5mg/μl的人类全血dna；上述不同引物组：5μl浓度为0.9μm的上游引物、5μl浓度为0.9μm的下游引物；25μl2×预混液；9μl去离子水，混匀并离心。

其中上述不同引物组分别为上游引物lambdarpa-8_f（seqidno:17）和下游引物lambdarpa-8_r（seqidno:18）；上游引物lambdarpa-9_f（seqidno:19）和下游引物lambdarpa-9_r（seqidno:20）；上游引物lambdarpa-10_f（seqidno:21）和下游引物lambdarpa-10_r（seqidno:22）；上游引物lambdarpa-11_f（seqidno:23）和下游引物lambdarpa-11_r（seqidno:24）；上游引物lambdarpa-12_f（seqidno:25）和下游引物lambdarpa-12_r（seqidno:26）；上游引物lambdarpa-13_f（seqidno:27）和下游引物lambdarpa-13_r（seqidno:28）。

b、向上述反应体系中加入镁离子制剂：具体的，本实施例向步骤a的反应体系中加入5μl浓度为45mm的氯化镁溶液，充分混匀并离心。

c、在20至65℃条件下进行扩增反应：将离心管置于65℃的恒温金属浴中保温4min；取出反应管，充分地上下颠倒4-5次，混匀并离心，再进行同样条件的孵育，保温20min。

反应结束后，取出离心管，取样并进行琼脂糖凝胶电泳检测。

琼脂糖凝胶电泳检测如图4所示，图4中泳道0为分子大小标记物，泳道1-2为lambdarpa-8为引物的扩增情况，泳道3-4为lambdarpa-9为引物的扩增情况，泳道5-6为lambdarpa-10为引物的扩增情况，泳道7-8为lambdarpa-11为引物的扩增情况，泳道9-10为lambdarpa-12为引物的扩增情况，泳道11-12为lambdarpa-13为引物的扩增情况。结果表明，本实施例的重组酶聚合酶扩增方法能够有效对人类全血dna分子进行扩增。

结果表明本实施例的重组酶聚合酶扩增方法能够有效对人类全血dna分子进行扩增。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

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<110>广州康昕瑞基因健康科技有限公司

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<210>8

<211>63

<212>dna

<213>人工序列

<400>8

cagcacggcctggatggccacgtacatggcgggcacgttgaaggtctcaaacatgatctg60

ggt63

<210>9

<211>30

<212>dna

<213>人工序列

<400>9

tacatggcgggcacgttgaaggtctcaaac30

<210>10

<211>30

<212>dna

<213>人工序列

<400>10

cctacgtgggcgacgaggctcagagcaaga30

<210>11

<211>45

<212>dna

<213>人工序列

<400>11

cctactacagggcagtatcttttgtaagttcttagatattagcac45

<210>12

<211>43

<212>dna

<213>人工序列

<400>12

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<210>13

<211>42

<212>dna

<213>人工序列

<400>13

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<210>14

<211>42

<212>dna

<213>人工序列

<400>14

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<210>15

<211>44

<212>dna

<213>人工序列

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<210>16

<211>40

<212>dna

<213>人工序列

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<212>dna

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<212>dna

<213>人工序列

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<212>dna

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<212>dna

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<212>dna

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<212>dna

<213>人工序列

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<212>dna

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<212>dna

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<400>28

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