1.一种肠膜明串珠菌肠膜亚种不同菌株的甄别方法,其特征在于,该方法包括以下步骤:
(1)提取待测的肠膜明串珠菌肠膜亚种不同菌株的基因组DNA;
(2)以菌株样品的基因组DNA为模板,使用SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2所示的引物进行PCR扩增,得到PCR扩增产物;
(3)将PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳,根据电泳结果实现待测肠膜明串珠菌肠膜亚种不同菌株的甄别。
2.根据权利要求1所述的肠膜明串珠菌肠膜亚种不同菌株的甄别方法,其特征在于,步骤(2)中使用的引物是根据GH70糖基转移酶编码基因设计得到的。
3.根据权利要求1所述的肠膜明串珠菌肠膜亚种不同菌株的甄别方法,其特征在于,步骤(2)中,PCR扩增的反应体系为:2ng/μl DNA模板2μl、0.5μmol/L引物1μl、0.2mmol/L dNTP 2μl、1.5mmol/L的MgSO4 1μl、10×PCR反应缓冲液2μl、5U/μl rTaq DNA聚合酶0.5μl,加水至20μl。
4.根据权利要求1所述的肠膜明串珠菌肠膜亚种不同菌株的甄别方法,其特征在于,步骤(2)中,PCR扩增的反应程序为:95℃预变性10min;95℃变性30s、48℃退火30s、72℃延伸120s,35个循环;72℃延伸10min。
5.根据权利要求1所述的肠膜明串珠菌肠膜亚种不同菌株的甄别方法,其特征在于,步骤(3)中,取PCR扩增产物5μL在1%琼脂糖凝胶中以5V/cm的电压,电泳20-30min,使用EB染色,电泳结果在紫外凝胶成像系统上拍照。
6.根据权利要求1所述的肠膜明串珠菌肠膜亚种不同菌株的甄别方法,其特征在于,该方法还包括以下步骤:对PCR扩增产物进行双向测序,获得整个扩增片段的序列。
7.根据权利要求6所述的肠膜明串珠菌肠膜亚种不同菌株的甄别方法,其特征在于,双向测序所用的引物序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2所示,将两条引物测序结果进行拼接后,获得整个扩增片段的序列。
8.根据权利要求6所述的肠膜明串珠菌肠膜亚种不同菌株的甄别方法,其特征在于,对扩增片段的序列进行BLAST分析,将待测的肠膜明串珠菌肠膜亚种不同菌株甄别出来。