双芘修饰苝酰亚胺衍生物荧光探针及其合成方法和应用与流程

技术特征：

1.一种双芘修饰苝酰亚胺衍生物荧光探针，其特征在于，该荧光探针的结构式如下：

式中，n＝2、3或4。

2.一种双芘修饰苝酰亚胺衍生物荧光探针的合成方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)首先在保护气氛下，将芘磺酰基衍生物的N-甲基吡咯烷酮溶液加入到苝酐的N-甲基吡咯烷酮溶液中，再加入无水醋酸锌，得到混合溶液；其中芘磺酰基衍生物和苝酐的摩尔比为(2～4):1；

2)步骤1)得到的混合溶液在搅拌条件下并在150～200℃下加热回流10～15h，待加热回流得到的反应液冷却到室温后，过滤得滤液；滤液经酸洗出现沉淀，抽滤得到滤饼，将滤饼洗涤干燥后，得到双芘修饰苝酰亚胺衍生物荧光探针。

3.根据权利要求2所述的双芘修饰苝酰亚胺衍生物荧光探针的合成方法，其特征在于，芘磺酰基衍生物的制备步骤具体包括：

a)在保护气氛及冰浴条件下，将芘磺酰氯的三氯甲烷溶液滴加到二氨基含氧烷烃的三氯甲烷溶液中，滴加完毕后，室温搅拌反应2～8h；

b)反应结束后，将反应液洗涤并干燥，再依次酸洗、碱洗和萃取，得到有机层，旋干，制得结构式如下的芘磺酰基衍生物：

式中，n＝2、3或4。

4.根据权利要求3所述的双芘修饰苝酰亚胺衍生物荧光探针的合成方法，其特征在于，步骤a)中芘磺酰氯与二氨基含氧烷烃的摩尔比为1:(5～10)，二氨基含氧烷烃为1,8-二氨基-3,6-二氧辛烷、3,6,9-三氧杂十一烷-1,11-二胺或3,6,9,12-四氧杂十六烷-1,16-二胺；步骤b)中的洗涤是用饱和食盐水洗6～7次，干燥是用无水硫酸钠干燥过夜，酸洗是采用1mol/L盐酸洗涤，碱洗是采用3mol/L氢氧化钠水溶液进行洗涤。

5.根据权利要求3所述的双芘修饰苝酰亚胺衍生物荧光探针的合成方法，其特征在于，步骤a)中，调节滴加速度为5～8s/滴。

6.根据权利要求3所述的双芘修饰苝酰亚胺衍生物荧光探针的合成方法，其特征在于，保护气氛采用氮气、氩气或氖气，保护气氛的流速为0.5～0.8mL/s。

7.根据权利要求2所述的双芘修饰苝酰亚胺衍生物荧光探针的合成方法，其特征在于，步骤1)中，无水醋酸锌的添加量为苝酐摩尔量的0.65～2倍。

8.根据权利要求2所述的双芘修饰苝酰亚胺衍生物荧光探针的合成方法，其特征在于，步骤2)中，酸洗是将滤液滴加到2mol/L的盐酸溶液中，产生沉淀。

9.根据权利要求2所述的双芘修饰苝酰亚胺衍生物荧光探针的合成方法，其特征在于，酸洗后抽滤得到的滤饼依次用甲醇及二次水淋洗；滤饼洗涤干燥后经过洗脱剂进行过柱分离纯化，其中洗脱剂采用二氯甲烷、甲醇和三乙胺按体积比为(20～60):1:1配成的混合溶剂。

10.如权利要求1所述的双芘修饰苝酰亚胺衍生物荧光探针在检测蛋白质中的应用，其特征在于，所述的蛋白质包括胃蛋白酶、牛血清蛋白、卵清蛋白、β-乳球蛋白、铁蛋白、肌红蛋白、血红蛋白和细胞色素c。