暗色环纹炭团菌活性代谢产物的制备方法与流程

文档序号:12412264阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种暗色环纹炭团菌活性代谢产物的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:

步骤一、将暗色环纹炭团菌在PDA培养基上活化培养,挑取菌丝块接入改良的PDB培养基中,于25~28℃,摇床培养8~12d,得初次发酵液;

其中所述改良的PDB培养基包括PDB和100~150mL三七茎叶原浆;

步骤二、按体积质量比为1000mL:0.00004~0.0001g:0.00004~0.0001g向步骤一中得到的初次发酵液中加入氯化钙和琥珀酸钠,于25~28℃,摇床培养3~8d,得二次发酵液;

步骤三、按体积比为1:1~2向步骤二中得到的二次发酵液中加入乙酸乙酯,离心处理,滤除沉淀物,取上清液,然后旋蒸蒸发去除溶剂,旋蒸温度为50~60℃,即得到暗色环纹炭团菌活性代谢产物。

2.如权利要求1所述的暗色环纹炭团菌活性代谢产物的制备方法,其特征在于,步骤三中乙酸乙酯可以用氯仿或者乙醚替代,其旋蒸温度分别为45~55℃和20~30℃。

3.如权利要求1所述的暗色环纹炭团菌活性代谢产物的制备方法,其特征在于,步骤一中三七茎叶原浆的制备方法:将三七的茎和叶放入研钵中,加入冰水研磨30min,然后加入胱氨酸、苏氨酸、白氨酸和赖氨酸,置于超声波中以60kHz超声频率处理40min,再用研钵研磨10min,置于超声波中以60kHz超声频率处理20min,过滤即得,置于4℃环境中保藏,备用;

其中所述三七的茎、叶、冰水、胱氨酸、苏氨酸、白氨酸和赖氨酸的质量比为1:1:10:0.00005:0.00005:0.00005:0.00005。

4.如权利要求1所述的暗色环纹炭团菌活性代谢产物的制备方法,其特征在于,步骤一的初次发酵液进行诱导后处理:将1000重量份初次发酵液放入4℃环境中培养1d,然后加入1重量份病原菌悬浊液,再移至10℃环境中培养5d,然后移至摇床,于25~28℃,200r/min条件下继续培养3d后即得;

其中,所述病原菌悬浊液的制备方法:挑取0.1~0.5重量份病原菌菌丝块至100重量份水中,再用电动搅拌器以1000r/min的转速条件下搅拌20~30min制成悬浊液;所述病原菌菌丝块可以为三七灰霉病病原菌和三七圆斑病病原菌的一种或两种。

5.一种如权利要求1~4中任一项所述的制备方法获得的暗色环纹炭团菌活性代谢产物的应用,其特征在于,在防治三七灰霉病和三七圆斑病中的应用。

6.如权利要求5所述的暗色环纹炭团菌活性代谢产物的应用,其特征在于,还包括在防治苦玄参褐斑病、艾纳香条斑病、广西莪术叶斑病、草豆蔻叶斑病和罗汉果斑枯病中的应用。

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