前体定向生物合成的尿苷肽类抗生素及其用途的制作方法

本发明属于医药化学领域，具体涉及一类新的可作为细菌抑制剂的化合物，特别涉及一类具有抗菌活性的尿苷肽类抗生素及其制备方法，以及此类化合物在作为药物特别是作为抗菌药物例如抗结核病药物方面的应用。
背景技术：
：结核病(TB)是由结核分枝杆菌引起的传染性疾病，近年来其流行重新加重。我国是全球22个TB高负担国家之一，患病率高，耐药率也高。据世界卫生组织(WHO)统计，我国约5.5亿人感染了结核菌，其中耐药患者超过40万，是世界上新增结核病例最多、多药耐药结核病发生率最高的国家之一。因此，TB重新成为全球、特别是我国十分关注的公共卫生和社会问题。目前，临床广泛使用的抗TB药物仍然是上世纪70年代前研发的药物，如异烟肼(INH)、利福平(RFP)、吡嗪酰胺和乙胺丁醇等，因其有效的抗TB作用一直是临床TB治疗的一线用药。然而，由于此类药物的长期使用以及TB患者的用药疗程长等缘故，已不可避免地产生了日趋严重的耐药问题；同时这些药物还存在肝肾功能损伤、胃肠道反应等毒副作用，部分限制了此类药物的临床使用。尤其我国是一个TB高发国家，面临的问题更加严峻。自上个世纪七十年代中期，RNA聚合酶抑制剂——利福平成功用于临床以来，近40年来没有一种专门用于TB治疗的药物开发成功；也未见新结构骨架的抗结核候选物出现。因此，研究新靶点、新作用机制或新化学实体的抗TB新药，以克服“TB治疗药物的耐药”这一全球性难题，近年来已成为全球科学家研究的重点与热点之一。人们已经获得并表征了一种具有抗结核分支杆菌活性的尿苷肽类抗生素SansanmycinA，在本文中可缩写为SSA。例如文献(YunyingXie,etal.ANewNucleosidyl-peptideAntibiotic,Sansanmycin,TheJournalofAntibiotics.2007,60(2):158-161)中详细公开了SSA这种尿苷肽类抗生素的制备、结构分析、表征以及对某些细菌(例如结核分支杆菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌)的抗菌活性。SansanmycinA的化学结构式如下：人们仍然期待有新颖而有效的抗菌药例如抗结核病的药物用于临床。技术实现要素：本发明的目的是寻找具有有效的抗菌新化合物。本发明人令人惊奇的发现，具有式I结构的取代尿苷肽类抗生素具有令人期待的效果。本发明基于此发现而得以完成。为此，本发明第一方面提供了以下式I化合物：或其药学可接受的盐或溶剂合物，其中R1和R2中的一个是R1和R2中的另一个是选自下列的基团：其中R3是氢或者是1-3个(例如1、2或3个)选自下列的基团：羟基、卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基。根据本发明第一方面的化合物，其中R1选自：H、根据本发明第一方面的化合物，其中R2选自：根据本发明第一方面的化合物，其中R1选自：H、并且R2选自：根据本发明第一方面的化合物，其中R1为时，R2不是根据本发明第一方面的化合物，其中R1为时，R2是根据本发明第一方面的化合物，其选自实施例部分制备的本发明化合物。根据本发明第一方面的化合物，其中所述的烷基是直链或支链的烷基。根据本发明第一方面的化合物，其中所述的C1-6烷基是选自下列的烷基：C1-6烷基、C1-5烷基、C1-4烷基、C1-3烷基、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基、己基。根据本发明第一方面的化合物，其中所述的卤素选自：氟、氯、溴、碘。在一个实施方案中，所述的卤素选自：氟、氯、溴。根据本发明第一方面的化合物，其是选自下列的化合物或其药学可接受的盐(本文及以下化合物1至化合物39中，数值及其标示折线是表示该化合物质谱数据的标示，化合物本身并没有这些数据和折线，例如化合物1中的数值615、658、707、819及其折线，因此更简洁表述这些化合物时可以删除这些数据及其折线)：本发明第二方面提供了制备本发明第一方面所述式I化合物的方法，其照本发明人/申请人的中国专利申请公开号CN101153052A中实施例1的方法进行，并在消毒前或消毒后向发酵培养基中加入不同的苯丙氨酸衍生物(L-4-Me-Phe，L-3-Me-Phe，L-2-Me-Phe，L-4-Cl-Phe，L-3-Cl-Phe，L-2-Cl-Phe，L-4-Br-Phe，L-3-Br-Phe，L-2-Br-Phe，L-4-F-Phe，L-3-F-Phe，L-2-F-Phe，L-4-MeO-Phe，加入量为1mM-6mM，例如约4mM)。在一个实施方案中，发酵培养基及菌种与CN101153052A中的相同，发酵时间4-8天，最优6天，发酵后离心或过滤除去菌丝体，上清或滤液上4006大孔吸附树脂，10％，20％，30％丙酮水溶液分步洗脱，收集活性部分，过ODS柱，用不同浓度的甲醇水溶液洗脱，合并活性部分，浓缩，冷干，干品溶于20％的甲醇水溶液，用制备HPLC进行制备，条件：色谱柱：Shim-packPREP-ODS柱(Shim-pack，Kyoto，Japan)，250×20mm，10μm；洗脱：不同浓度MeOH的0.1％(w/v)(NH4)2CO3)溶液洗脱，流速：5ml/min；检测波长254nm，柱温：40℃。根据本发明第二方面的方法，其还包括使所得式I化合物进行纯化的步骤。在一个实施方案中，所述的是使用制备型液相色谱法纯化的。例如可以参考文献(例如YunyingXie,etal.ANewNucleosidyl-peptideAntibiotic,Sansanmycin,TheJournalofAntibiotics.2007,60(2):158-161中详细公开的)方法进行纯化。本发明方法还可参考文献记载的方法(例如YunyingXie,etal.TheJournalofAntibiotics.2007,60(2):158-161)进行，本发明方法可使用该文献中记载的由本发明人/申请人以保藏号CGMCCNo.1764保藏的菌株StreptomycesspSS进行。在本发明第二方面的制备方法中，在必要情况下，在式I化合物制备过程中，为防止有些基团(如氨基、羟基等)发生不希望的反应，需要对这些基团予以保护，同时，在适当的时候予以去除保护基。这些实施例不胜枚举的，没有具体提及的保护基的使用和脱保护的方法也属于本发明的范围之内。本发明第三方面涉及一种药物组合物，其包含本发明第一方面任一项所述的式I化合物，以及任选的一种或多种药学可接受的载体或赋形剂。本发明第四方面涉及本发明第一方面任一项所述的式I化合物在制备用于治疗和/或预防哺乳动物(包括人)感染性疾病(例如由细菌感染引起的疾病，例如由结核杆菌感染引起的疾病，例如结核病)的药物中的用途。本发明第五方面涉及一种在有需要的哺乳动物中治疗和/或预防哺乳动物(包括人)感染性疾病(例如由细菌感染引起的疾病，例如由结核杆菌感染引起的疾病，例如结核病)的方法，该方法包括给有需要的哺乳动物施用治疗有效量的本发明第一方面任一项所述的式I化合物。本发明第六方面涉及用于治疗和/或预防哺乳动物(包括人)感染性疾病(例如由细菌感染引起的疾病，例如由结核杆菌感染引起的疾病，例如结核病)的药物组合物，该药物组合物包含本发明第一方面任一项所述的式I化合物，以及任选的一种或多种药学可接受的载体或赋形剂。本发明第七方面还涉及用于治疗和/或预防哺乳动物(包括人)感染性疾病(例如由细菌感染引起的疾病，例如由结核杆菌感染引起的疾病，例如结核病)的本发明第一方面任一项所述的式I化合物。本发明的任一方面的任一实施方案，可以与其它实施方案进行组合，只要它们不会出现矛盾。此外，在本发明任一方面的任一实施方案中，任一技术特征可以适用于其它实施方案中的该技术特征，只要它们不会出现矛盾。下面对本发明作进一步的描述。本发明所引述的所有文献，它们的全部内容通过引用并入本文，并且如果这些文献所表达的含义与本发明不一致时，以本发明的表述为准。此外，本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义，即便如此，本发明仍然希望在此对这些术语和短语作更详尽的说明和解释，提及的术语和短语如有与公知含义不一致的，以本发明所表述的含义为准。在本发明合成式I化合物的方法中，反应所用的各种原材料是本领域技术人员根据已有知识可以制备得到的，或者是可以通过文献公知的方法制得的，或者是可以通过商业购得的。以上反应方案中所用的中间体、原材料、试剂、反应条件等均可以根据本领域技术人员已有知识可以作适当改变的。或者，本领域技术人员也可以根据本发明第二方面方法合成本发明未具体列举的其它式I化合物。本发明的式I化合物可以与其它活性成分组合使用，只要它不产生其他不利作用，例如过敏反应。本发明式I所示的活性化合物可作为唯一的抗菌药物使用，或者可以与一种或多种其他抗菌药物联合使用。联合治疗通过将各个治疗组分同时、顺序或隔开给药来实现。本文所用的术语“组合物”意指包括包含指定量的各指定成分的产品，以及直接或间接从指定量的各指定成分的组合产生的任何产品。在本发明中，术语“组合物”可以与“药物组合物”互换使用。本发明的化合物可以以衍生自无机酸或有机酸的药学可接受的盐的形式使用。词语“药学可接受的盐”指在可靠的医学判断范围内，适合用于与人类和低等动物的组织接触而不出现过度的毒性、刺激、过敏反应等，且与合理的效果/风险比相称的盐。药学可接受的盐是本领域公知的。例如，S.M.Berge,etal.,J.PharmaceuticalSciences,1977,66:1中对药学可接受的盐进行了详细描述。所述盐可通过使本发明化合物的游离碱官能度与合适的有机酸反应，在本发明化合物的最终分离和纯化过程中原位制备或者单独制备。代表性的酸加成盐包括但不限于乙酸盐、己二酸盐、海藻酸盐、柠檬酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、二葡糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、富马酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐(异硫代硫酸盐，isothionate)、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、烟酸盐、2-萘磺酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、磷酸盐、谷氨酸盐、碳酸氢盐、对甲苯磺酸盐和十一烷酸盐。同样，碱性含氮基团可用以下物质季铵化：低级烷基卤化物如甲基、乙基、丙基和丁基的氯化物、溴化物和碘化物；硫酸二烷基酯如硫酸二甲酯、二乙酯、二丁酯和二戊酯；长链卤化物如癸基、十二烷基、十四烷基和十八烷基的氯化物、溴化物和碘化物；芳基烷基卤化物如苄基溴和苯乙基溴及其他。因此得到可溶于或分散于水或油的产品。可用来形成药学可接受的酸加成盐的酸实例包括无机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸和磷酸，以及有机酸如草酸、马来酸、琥珀酸和柠檬酸。碱加成盐可通过使本发明化合物的含羧酸部分与合适的碱反应，在本发明化合物的最终分离和纯化过程中原位制备，所述的碱例如药学可接受的金属阳离子的氢氧化物、碳酸盐和碳酸氢盐，或者氨或有机伯胺、仲胺或叔胺。药学可接受的盐包括但不限于基于碱金属或碱土金属的阳离子如锂、钠、钾、钙、镁和铝盐等，以及无毒的季铵和胺阳离子，包括铵、四甲基铵、四乙基铵、甲基铵、二甲基铵、三甲基铵、三乙基铵、二乙基铵和乙基铵等。可用于形成碱加成盐的其他代表性有机胺包括乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌啶、哌嗪等。本发明式I化合物还包括其异构体、消旋体、对映体、非对映体、对映体富集物、溶剂合物、和酯，本发明式I化合物以及它的异构体、消旋体、对映体、非对映体、对映体富集物、溶剂合物、和酯还可以形成溶剂合物，例如水合物、醇合物等。上述化合物还可以是前药或可在体内代谢变化后释放出所述活性成分的形式。选择和制备适当的前药衍生物是本领域技术人员公知技术。一般来说，对于本发明的目的，与药学可接受的溶剂如水、乙醇等的溶剂合物形式与非溶剂合物形式相当。以式I表示的本发明的一些示例性的化合物的结构及其抗结核分支杆菌H37Rv的活性(MIC)列于下面，其中的抗菌活性测定方法见实施例部分。本发明一些示例化合物对结核分支杆菌的活性(MIC，μg/mL)列于下面：SSA对H37Rv的MIC为16μg/mL，对菌株2199的MIC为32μg/mL；本发明实施例2-13的各化合物即化合物1至化合物39对H37Rv的MIC为1-8μg/mL，对菌株2199的MIC为1-8μg/mL；INH对菌株2199的MIC为40μg/mL；RFP对菌株2199的MIC为20μg/mL；其中菌株2199是得自中国结核病患者的结核分支杆菌菌株2199是利福平和异烟肼耐药株。另外，将SSA及化合物1至化合物39分别密封于玻璃瓶中，置40°温度下放置6个月，分别测定它们在0月时以及6月时的含量，并计算各物质在6月时相对于0月时的残余百分含量，结果显示，SSA在6时残余的残余百分含量为94.7％，而化合物1至化合物39全部化合物在6月时的残余百分含量均在99.2～99.8％范围内。可改变本发明药物组合物中各活性成分的实际剂量水平，以便所得的活性化合物量能有效针对具体患者、组合物和给药方式得到所需的治疗反应。剂量水平须根据具体化合物的活性、给药途径、所治疗病况的严重程度以及待治疗患者的病况和既往病史来选定。但是，本领域的做法是，化合物的剂量从低于为得到所需治疗效果而要求的水平开始，逐渐增加剂量，直到得到所需的效果。当用于上述治疗和/或预防或其他治疗和/或预防时，治疗和/或预防有效量的一种本发明化合物可以以纯形式应用，或者以药学可接受的酯或前药形式(在存在这些形式的情况下)应用。或者，所述化合物可以以含有该目的化合物与一种或多种药物可接受赋形剂的药物组合物给药。词语“治疗和/或预防有效量”的本发明化合物指以适用于任何医学治疗和/或预防的合理效果/风险比治疗障碍的足够量的化合物。但应认识到，本发明化合物和组合物的总日用量须由主诊医师在可靠的医学判断范围内作出决定。对于任何具体的患者，具体的治疗有效剂量水平须根据多种因素而定，所述因素包括所治疗的障碍和该障碍的严重程度；所采用的具体化合物的活性；所采用的具体组合物；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；所采用的具体化合物的给药时间、给药途径和排泄率；治疗持续时间；与所采用的具体化合物组合使用或同时使用的药物；及医疗领域公知的类似因素。例如，本领域的做法是，化合物的剂量从低于为得到所需治疗效果而要求的水平开始，逐渐增加剂量，直到得到所需的效果。一般说来，本发明式I化合物用于哺乳动物特别是人的剂量可以介于0.001～1000mg/kg体重/天，例如介于0.01～100mg/kg体重/天，例如介于0.01～10mg/kg体重/天。运用本领域技术人员熟悉的药物载体可以制备成含有效剂量的本发明化合物的药物组合物。因此本发明还提供包含与一种或多种无毒药物可接受载体配制在一起的本发明化合物的药物组合物。所述药物组合物可特别专门配制成以固体或液体形式供口服给药、供胃肠外注射或供直肠给药。所述的药物组合物可配制成许多剂型，便于给药，例如，口服制剂(如片剂、胶囊剂、溶液或混悬液)；可注射的制剂(如可注射的溶液或混悬液，或者是可注射的干燥粉末，在注射前加入注射水可立即使用)。所述的药物组合物中载体包括：口服制剂使用的粘合剂(如淀粉，通常是玉米、小麦或米淀粉、明胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮)，稀释剂(如乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纤维素，和/或甘油)，润滑剂(如二氧化硅、滑石、硬脂酸或其盐，通常是硬脂酸镁或硬脂酸钙，和/或聚乙二醇)，以及如果需要，还含有崩解剂，如淀粉、琼脂、海藻酸或其盐，通常是藻酸钠，和/或泡腾混合物，助溶剂、稳定剂、悬浮剂、无色素、矫味剂等，可注射的制剂使用的防腐剂、加溶剂、稳定剂等；局部制剂用的基质、稀释剂、润滑剂、防腐剂等。药物制剂可以经口服或胃肠外方式(例如静脉内、皮下、腹膜内或局部)给药，如果某些药物在胃部条件下是不稳定的，可以将其配制成肠衣片剂。更具体地说，本发明的药物组合物可通过口服、直肠、胃肠外、池内、阴道内、腹膜内、局部(如通过散剂、软膏剂或滴剂)、口颊给予人类和其他哺乳动物，或者作为口腔喷雾剂或鼻腔喷雾剂给予。本文所用术语“胃肠外”指包括静脉内、肌肉内、腹膜内、胸骨内、皮下和关节内注射和输液的给药方式。适合于胃肠外注射的组合物可包括生理上可接受的无菌含水或非水溶液剂、分散剂、混悬剂或乳剂，及供重构成无菌可注射溶液剂或分散剂的无菌散剂。合适的含水或非水载体、稀释剂、溶剂或媒介物的实例包括水、乙醇、多元醇(丙二醇、聚乙二醇、甘油等)、植物油(如橄榄油)、可注射有机酯如油酸乙酯及它们的合适混合物。这些组合物也可含有辅料，如防腐剂、湿润剂、乳化剂和分散剂。通过各种抗细菌剂和抗真菌剂，例如尼泊金酯类、三氯叔丁醇、苯酚、山梨酸等，可确保防止微生物的作用。还期望包括等渗剂，例如糖类、氯化钠等。通过使用能延迟吸收的物质，例如单硬脂酸铝和明胶，可达到可注射药物形式的延长吸收。混悬剂中除活性化合物外还可含有悬浮剂，例如乙氧基化异十八醇、聚氧乙烯山梨醇和聚氧乙烯失水山梨糖醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂和黄蓍胶或者这些物质的混合物等。在一些情况下，为延长药物的作用，期望减慢皮下或肌内注射药物的吸收。这可通过使用水溶性差的晶体或无定形物质的液体混悬剂来实现。这样，药物的吸收速度取决于其溶解速度，而溶解速度又可取决于晶体大小和晶型。或者，胃肠外给药的药物形式的延迟吸收通过将该药物溶解于或悬浮于油媒介物中来实现。可注射贮库制剂形式可通过在生物可降解聚合物如聚丙交酯-聚乙交酯(polylactide-polyglycolide)中形成药物的微胶囊基质来制备。可根据药物与聚合物之比和所采用的具体聚合物的性质，对药物释放速度加以控制。其他生物可降解聚合物的实例包括聚原酸酯类(poly(orthoesters))和聚酐类(poly(anhydrides))。可注射贮库制剂也可通过将药物包埋于能与身体组织相容的脂质体或微乳中来制备。可注射制剂可例如通过用滤菌器过滤或通过掺入无菌固体组合物形式的灭菌剂来灭菌，所述固体组合物可在临用前溶解或分散于无菌水或其他无菌可注射介质。本发明化合物或其组合物可用口服方法或非胃肠道给药方式。口服给药可以是片剂、胶囊剂、包衣剂，肠道外用药制剂有注射剂和栓剂等。这些制剂是按照本领域的技术人员所熟悉的方法制备的。为了制造片剂、胶囊剂、包衣剂所用的辅料是常规用的辅料，例如淀粉、明胶、阿拉伯胶，硅石，聚乙二醇，液体剂型所用的溶剂如水、乙醇、丙二醇、植物油(如玉米油、花生油、橄榄油等)。含有本发明化合物的制剂中还有其它辅料，例如表面活性剂，润滑剂，崩解剂，防腐剂，矫味剂和色素等。在片剂、胶囊剂、包衣剂、注射剂和栓剂中含有本发明式I化合物的剂量是以单元剂型中存在的化合物量计算的。在单元剂型中本发明式I化合物一般含量为0.01-5000mg，优选的单元剂型含有0.1-500mg，更优选的单元剂型含有1-300mg。具体地说，本发明可以提供的供口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在此类固体剂型中，活性化合物可与至少一种惰性的药物可接受赋形剂或载体如柠檬酸钠或磷酸二钙和/或以下物质混合：a)填充剂或增量剂如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和硅酸；b)粘合剂如羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯树胶；c)保湿剂如甘油；d)崩解剂如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠；e)溶液阻滞剂如石蜡；f)吸收加速剂如季铵化合物；g)湿润剂如鲸蜡醇和甘油单硬脂酸酯；h)吸附剂如高岭土和膨润土以及i)润滑剂如滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠和它们的混合物。在胶囊剂、片剂和丸剂的情况下，所述剂型中也可包含缓冲剂。相似类型的固体组合物使用赋形剂例如乳糖及高分子量聚乙二醇等，也可用作软胶囊和硬胶囊中的填充物。片剂、糖衣丸剂(dragees)、胶囊剂、丸剂和颗粒剂的固体剂型可与包衣和壳料如肠溶衣材和医药制剂领域公知的其他衣材一起制备。这些固体剂型可任选含有遮光剂，且其组成还可使其只是或优先地在肠道的某个部位任选以延迟方式释放活性成分。可以使用的包埋组合物的实例包括高分子物质和蜡类。如果适合，活性化合物也可与一种或多种上述赋形剂配成微囊形式。供口服给药的液体剂型包括药学可接受的乳剂、溶液剂、混悬剂、糖浆剂和酏剂。液体剂型除含有活性化合物外还可含有本领域常用的惰性稀释剂，例如水或其他溶剂，增溶剂和乳化剂例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油类(特别是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇(tetrahydrofurfurylalcohol)、聚乙二醇和脱水山梨糖醇的脂肪酸酯及它们的混合物。口服组合物除包含惰性稀释剂外还可包含辅料，例如湿润剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香味剂。供直肠或阴道给药的组合物优选是栓剂。栓剂可通过将本发明化合物与合适的非刺激性赋形剂或载体例如可可脂、聚乙二醇或栓剂蜡混合来制备，它们在室温下为固体，但在体温下则为液体，因此可在直肠腔或阴道腔内熔化而释放出活性化合物。本发明的化合物及其组合物还考虑用于局部给药。供局部给予本发明化合物的剂量形式包括散剂、喷雾剂、软膏剂和吸入剂。在无菌条件下将活性化合物与药学可接受的载体和任何所需的防腐剂、缓冲剂或推进剂混合。眼用制剂、眼软膏剂、散剂和溶液剂也被考虑在本发明范围内。本发明化合物也可以脂质体形式给药。如本领域所公知，脂质体通常用磷脂或其他脂类物质制得。脂质体由分散于含水介质中的单层或多层水化液晶所形成。任何能够形成脂质体的无毒、生理上可接受和可代谢的脂质均可使用。脂质体形式的本发明组合物除含有本发明化合物外，还可含有稳定剂、防腐剂、赋形剂等。优选的脂类是天然和合成的磷脂和磷脂酰胆碱(卵磷脂)，它们可单独或者一起使用。形成脂质体的方法是本领域公知的。参见例如Prescott,Ed.,MethodsinCellBiology,VolumeXIV,AcademicPress,NewYork,N.Y.(1976),p.33。本发明基于Sansanmycin产生菌的特点，及尿苷肽类化合物的构效关系，即疏水性增加可以增加尿苷肽类化合物的抗菌活性，本发明人通过在发酵液中加入不同卤化、甲基或甲氧基修饰的苯丙氨酸衍生物，得到了N-末端和C-末端氨基酸发生改变的衍生物，新的化合物不但增加了疏水性，有利于提高抗菌活性，而且通过引入活泼的卤原子，也可以作为结构修饰的中间体，通过化学反应分别对N-末端和C-末端的氨基酸进行修饰。本发明人发现，结构式I所示的尿苷肽类抗生素对结核分支杆菌(例如H37Rv)有抑制作用。因此，本发明的化合物可用于治疗和/或预防哺乳动物(包括人)感染性疾病(例如由细菌感染引起的疾病，例如由结核杆菌感染引起的疾病，例如结核病)。附图说明图1不加前体的发酵产物LC-MS分析结果图2用LC-MS分析所得的化合物SansanmycinA的ESI-MS及ESI-MS/MS图图3用LC-MS分析所得的化合物A-1的ESI-MS及ESI-MS/MS图图4加入前体L-4-Me-Phe的发酵产物LC-MS分析结果图5用LC-MS分析所得的化合物1的ESI-MS及ESI-MS/MS图图6用LC-MS分析所得的化合物2的ESI-MS及ESI-MS/MS图图7用LC-MS分析所得的化合物3的ESI-MS及ESI-MS/MS图图8加入前体L-3-Me-Phe的发酵产物LC-MS分析结果图9用LC-MS分析所得的化合物4的ESI-MS及ESI-MS/MS图图10用LC-MS分析所得的化合物5的ESI-MS及ESI-MS/MS图图11用LC-MS分析所得的化合物6的ESI-MS及ESI-MS/MS图图12用LC-MS分析所得的化合物7的ESI-MS及ESI-MS/MS图图13用LC-MS分析所得的化合物8的ESI-MS及ESI-MS/MS图图14用LC-MS分析所得的化合物9的ESI-MS及ESI-MS/MS图图15加入前体L-2-Me-Phe的发酵产物LC-MS分析结果图16用LC-MS分析所得的化合物10的ESI-MS及ESI-MS/MS图图17用LC-MS分析所得的化合物11的ESI-MS及ESI-MS/MS图图18用LC-MS分析所得的化合物12的ESI-MS及ESI-MS/MS图图19加入前体L-4-Br-Phe的发酵产物LC-MS分析结果图20用LC-MS分析所得的化合物13的ESI-MS及ESI-MS/MS图图21用LC-MS分析所得的化合物14的ESI-MS及ESI-MS/MS图图22用LC-MS分析所得的化合物15的ESI-MS及ESI-MS/MS图图23加入前体L-3-Br-Phe的发酵产物LC-MS分析结果图24用LC-MS分析所得的化合物16的ESI-MS及ESI-MS/MS图图25用LC-MS分析所得的化合物17的ESI-MS及ESI-MS/MS图图26加入前体L-2-Br-Phe的发酵产物LC-MS分析结果图27用LC-MS分析所得的化合物18的ESI-MS及ESI-MS/MS图图28用LC-MS分析所得的化合物19的ESI-MS及ESI-MS/MS图图29用LC-MS分析所得的化合物20的ESI-MS及ESI-MS/MS图图30加入前体L-4-Cl-Phe的发酵产物LC-MS分析结果图31用LC-MS分析所得的化合物21的ESI-MS及ESI-MS/MS图图32用LC-MS分析所得的化合物22的ESI-MS及ESI-MS/MS图图33用LC-MS分析所得的化合物23的ESI-MS及ESI-MS/MS图图34加入前体L-3-Cl-Phe的发酵产物LC-MS分析结果图35用LC-MS分析所得的化合物24的ESI-MS及ESI-MS/MS图图36用LC-MS分析所得的化合物25的ESI-MS及ESI-MS/MS图图37用LC-MS分析所得的化合物26的ESI-MS及ESI-MS/MS图图38加入前体L-2-Cl-Phe的发酵产物LC-MS分析结果图39用LC-MS分析所得的化合物27的ESI-MS及ESI-MS/MS图图40用LC-MS分析所得的化合物28的ESI-MS及ESI-MS/MS图图41用LC-MS分析所得的化合物29的ESI-MS及ESI-MS/MS图图42加入前体L-4-F-Phe的发酵产物LC-MS分析结果图43用LC-MS分析所得的化合物30的ESI-MS及ESI-MS/MS图图44用LC-MS分析所得的化合物31的ESI-MS及ESI-MS/MS图图45加入前体L-3-F-Phe的发酵产物LC-MS分析结果图46用LC-MS分析所得的化合物32的ESI-MS及ESI-MS/MS图图47用LC-MS分析所得的化合物33的ESI-MS及ESI-MS/MS图图48用LC-MS分析所得的化合物34的ESI-MS及ESI-MS/MS图图49用LC-MS分析所得的化合物35的ESI-MS及ESI-MS/MS图图50用LC-MS分析所得的化合物36的ESI-MS及ESI-MS/MS图图51加入前体L-2-F-Phe的发酵产物LC-MS分析结果图52用LC-MS分析所得的化合物37的ESI-MS及ESI-MS/MS图图53用LC-MS分析所得的化合物38的ESI-MS及ESI-MS/MS图图54用LC-MS分析所得的化合物39的ESI-MS及ESI-MS/MS图具体实施方式下面通过具体的制备实施例和生物学试验例进一步说明本发明，但是，应当理解为，这些实施例和试验例仅仅是用于更详细具体地说明之用，而不应理解为用于以任何形式限制本发明。本发明对试验中所使用到的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。本领域技术人员清楚，在下文中，如果未特别说明，本发明所用材料和操作方法是本领域公知的。A、实施例部分本发明以前体定向生物合成法的方式制备本发明化合物，示例性的方法如下：在消毒前或消毒后向发酵培养基中加入不同的苯丙氨酸衍生物(L-4-Me-Phe，L-3-Me-Phe，L-2-Me-Phe，L-4-Cl-Phe，L-3-Cl-Phe，L-2-Cl-Phe，L-4-Br-Phe，L-3-Br-Phe，L-2-Br-Phe，L-4-F-Phe，L-3-F-Phe，L-2-F-Phe，L-4-MeO-Phe，目前实验中加入的量为4mM，曾实验过的量为1mM-6mM)，发酵培养基及菌种与专利ZL200610141075.7中的相同，发酵时间4-8天，最优6天，发酵后离心或过滤除去菌丝体，上清或滤液上4006大孔吸附树脂，10％，20％，30％丙酮水溶液分步洗脱，收集活性部分，过ODS柱，用不同浓度的甲醇水溶液洗脱，合并活性部分，浓缩，冷干，干品溶于20％的甲醇水溶液，用制备HPLC进行制备，条件：色谱柱：Shim-packPREP-ODS柱(Shim-pack，Kyoto，Japan)，250×20mm，10μm；洗脱：不同浓度MeOH的0.1％(w/v)(NH4)2CO3)溶液洗脱，流速：5ml/min；检测波长254nm，柱温：40℃。下面各实施例如未特别说明，均是照上述方法制备得到的各产物。结构解析：2ml发酵液用360mg的C18Cartrige柱进行固相萃取，大量水洗后，用2ml60％甲醇洗脱，取30μl洗脱液进行LC-MS分析(LC-MS的条件：色谱柱：WatersXBridgeTMC183.5μm，4.6×150mmColumn，流速：1ml/min；柱温：40℃；梯度洗脱条件：时间(min)020304040.1500.1％NH4CO3806040408080MeOH204060602020检测器：thermoLTQXL质谱仪，ESI(-))实施例1、实施例1为添加苯丙氨酸的发酵产物LC-MS分析结果：在不加入前体的情况下，LC-MS分析的结果如图1，除得到主组分SansanmycinA(RT:15.50，ESI-MS及MS/MS如图2)和B(RT:20.16)之外，还得到一个新组分A-1(RT:22.57)，MS/MS分析如图3，与A相比A-1少了16个质量数，因此推测A-1比A可能少一个氧原子，与A的MS/MS图谱相比，差别只在于N-末端不同，m/z698为[M-Phe-H]–的碎片离子峰，因此确定化合物的A-1的N-末端为苯丙氨酸，结构如图3所示。实施例2、加入L-4-Me-Phe，LC-MS分析结果：向发酵液中加入L-4-Me-Phe，共得到3个新组分1-3(图4)，组分1-3的保留时间分别为20.31、15.32、26.23min。化合物1：ESI-MSm/z837[M-H]-,MS/MS分析结果如图5，与SansanmycinA(在本文中简称SSA)相比，化合物1与SSA的差别只在于C-末端氨基酸不同，m/z658为[M-4-Me-Phe-H]–的碎片离子峰，因此可以推断化合物1的C-末端为L-4-Me-Phe，m/z707为[M-Uracil-H2O-H]–的碎片离子峰，进一步证实化合物1的结构如图5所示。化合物2：ESI-MSm/z674[M-H]-,比化合物1少163个质量数，由此推测化合物2与1的区别在于前者比后者少了N-末端的间酪氨酸残基，这一结果也与文献报道的尿苷肽类抗生素的生物合成途径相吻合；MS/MS分析结果如图6，m/z495为[M-4-Me-Phe-H]–的碎片离子峰，由此推断化合物2末端也为L-4-Me-Phe，m/z544为[M-Uracil-H2O-H]–的碎片离子峰，进一步证实化合物2的结构，如图6所示。化合物3：ESI-MSm/z821[M-H]-，MS/MS分析结果如图7，与A-1的MS/MS图谱相比，差别只在于C-末端氨基酸不同，m/z658为[M-4-Me-Phe-H]–的碎片离子峰，因此可以推断化合物3的C-末端为L-4-Me-Phe，m/z691为[M-Uracil-H2O-H]–的碎片离子峰，进一步证实化合物3的结构如图7所示。实施例3、加入L-3-Me-Phe，LC-MS分析结果如下：向发酵液中加入L-3-Me-Phe，共得到6个新组分4-9(图8)。化合物4：ESI-MSm/z837[M-H]-,MS/MS分析结果如图9，分子离子及碎片离子与化合物1相同，根据加入的前体可以推断化合物4与1的区别在于前者的C-末端为L-3-Me-Phe，化合物4的结构如图9所示。化合物5：ESI-MSm/z821[M-H]-，MS/MS分析结果如图10，分子离子及碎片离子与化合物3相同，根据加入的前体可以推断化合物5与3的区别在于前者的C-末端为L-3-Me-Phe，化合物5的结构如图10所示。化合物6：ESI-MSm/z835[M-H]-,比化合物4少两个质量数，初步推测N-末端为L-3-Me-Phe，MS/MS分析结果如图11，与化合物4相比，区别只在于N-末端少了两个质量数，因此可以进一步证实加入的前体同时掺入到了N-末端和C-末端，化合物6的结构如图11所示。化合物7：ESI-MSm/z849[M-H]-，比化合物4多12个质量数，根据这类化合物N-末端可以为四氢异喹啉的特征，初步推测N-末端为羟基取代的四氢异喹啉羧酸，MS/MS分析结果如图12，与化合物4相比，区别只在于N-末端多12个质量数，因此可以进一步证实N-末端为羟基取代的四氢异喹啉羧酸，C-末端为L-3-Me-Phe，化合物7的结构如图12所示。化合物7：ESI-MSm/z849[M-H]-，比化合物4多12个质量数，根据这类化合物N-末端可以为四氢异喹啉的特征，初步推测N-末端为羟基取代的四氢异喹啉羧酸，MS/MS分析结果如图12，与化合物4相比，区别只在于N-末端多12个质量数，因此可以进一步证实N-末端为羟基取代的四氢异喹啉羧酸，C-末端为L-3-Me-Phe，化合物7的结构如图12所示。化合物8：ESI-MSm/z514[M-H]-，MS/MS结果如图13。化合物9：ESI-MSm/z559[M-H]-，MS/MS结果如图14，。实施例4、向发酵液中加入L-2-Me-Phe，共得到3个新组分10-12(图15)。化合物10(RT:19.31)：ESI-MSm/z837[M-H]-,MS/MS分析结果如图16，分子离子及碎片离子与化合物1和4相同，根据加入的前体可以推断化合物10与1和4的区别在于前者的C-末端为L-2-Me-Phe，化合物10的结构如图16所示。化合物11(RT:34.93)：ESI-MSm/z514[M-H]-，MS/MS结果如图17，。化合物12(RT:8.98)：ESI-MSm/z559[M-H]-，MS/MS结果如图18，。实施例5、加入L-4-Br-Phe，LC-MS分析结果如下：向发酵液中加入L-4-Br-Phe，共得到3个新组分13-15(图19)。化合物13(RT:23.07)：ESI-MSm/z901，903[M-H]-(如图20),典型的含Br化合物的同位素取代特征，说明加入的前体L-4-Br-Phe已经掺入到化合物13中；MS/MS分析结果如图20，与SSA的MS/MS图谱相比，其差别只C-末端的氨基酸不同，m/z658为[M-4-Br-Phe-H]–的碎片离子峰，因此可以推断化合物13的C-末端为L-4-Br-Phe，m/z773为[M-Uracil-H2O-H]–的碎片离子峰，化合物13的结构如图20所示。化合物14(RT:28.04)：ESI-MSm/z885，887[M-H]-，典型的含Br化合物的同位素取代特征，说明加入的前体L-4-Br-Phe已经掺入到化合物14中；MS/MS分析结果如图21，与A-1的MS/MS图谱相比，其差别只C-末端的氨基酸不同，m/z642为[M-4-Br-Phe-H]–的碎片离子峰，因此可以推断化合物14的C-末端为L-4-Br-Phe，m/z757为[M-Uracil-H2O-H]–的碎片离子峰，化合物14的结构如图21所示。化合物15(RT:18.97)：ESI-MSm/z738,740[M-H]-，典型的含Br化合物的同位素取代特征，说明加入的前体L-4-Br-Phe已经掺入到化合物15中，化合物15比13少163个质量数，由此推测化合物15与13的区别在于前者比后者少了N-末端的间酪氨酸残基；MS/MS分析结果如图22，m/z495为[M-4-Br-Phe-H]–的碎片离子峰，由此推断化合物15末端也为L-4-Br-Phe，m/z610为[M-Uracil-H2O-H]–的碎片离子峰，进一步证实化合物15的结构，如图22所示。实施例6、加入L-3-Br-Phe，LC-MS分析结果如下：向发酵液中加入L-3-Br-Phe，共得到2个新组分16，17(图23)。化合物16(RT:23.04)：ESI-MSm/z901，903[M-H]-(如图24),典型的含Br化合物的同位素取代特征，说明加入的前体L-3-Br-Phe已经掺入到化合物16中；MS/MS分析结果如图24，分子离子及碎片离子与化合物13相同，根据加入的前体可以推断化合物16与13的区别在于前者的C-末端为L-3-Br-Phe，化合物16的结构如图24所示。化合物17(RT:28.04)：ESI-MSm/z885，887[M-H]-，典型的含Br化合物的同位素取代特征，说明加入的前体L-3-Br-Phe已经掺入到化合物17中；MS/MS分析结果如图25，分子离子及碎片离子与化合物14相同，根据加入的前体可以推断化合物16与14的区别在于前者的C-末端为L-3-Br-Phe，化合物17的结构如图25所示。实施例7、加入L-2-Br-Phe，LC-MS分析结果如下：向发酵液中加入L-2-Br-Phe，共得到3个新组分18-20(图26)。化合物18(RT:21.41)：ESI-MSm/z901，903[M-H]-(如图27)，典型的含Br化合物的同位素取代特征，说明加入的前体L-2-Br-Phe已经掺入到化合物17中；MS/MS分析结果如图27，分子离子及碎片离子与化合物13相同，根据加入的前体可以推断化合物17与13的区别在于前者的C-末端为L-2-Br-Phe，化合物17的结构如图27所示。化合物19(RT:29.04)：ESI-MSm/z965，967[M-H]-(如图27)，典型的含2个Br原子化合物的同位素取代特征，说明化合物17中有两个前体L-2-Br-Phe掺入；MS/MS分析结果如图28，m/z720,722为[M-2-Br-Phe-H]–的碎片离子峰，因此可以推断其中一个L-2-Br-Phe掺入到C-末端；根据其生物合成途径及底物相似性推断，另一个L-2-Br-Phe只能掺入到N-末端，化合物19的结构如图28所示化合物20(RT:26.06)：ESI-MSm/z924，926[M-H]-，)，典型的含Br化合物的同位素取代特征，说明加入的前体L-2-Br-Phe已经掺入到化合物20中；MS/MS分析结果如图29，m/z722为[M-Trp-H]–的碎片离子峰，推断其C-末端与SSA相同，为色氨酸残基，根据其生物合成途径及底物相似性推断，前体L-2-Br-Phe只能掺入到N-末端，化合物20的结构如图29所示。实施例8、加入L-4-Cl-Phe，LC-MS分析结果如下：向发酵液中加入L-4-Cl-Phe，共得到3个新组分21-23(图30)。化合物21(RT:21.81)：ESI-MSm/z857[M-H]-(如图31),典型的含Cl化合物的同位素取代特征，说明加入的前体L-4-Cl-Phe已经掺入到化合物21中；MS/MS分析结果如图31，与SSA的MS/MS图谱相比，其差别只C-末端的氨基酸不同，m/z658为[M-4-Cl-Phe-H]–的碎片离子峰，因此可以推断化合物21的C-末端为L-4-Cl-Phe，m/z727为[M-Uracil-H2O-H]–的碎片离子峰，化合物21的结构如图31所示。化合物22(RT:17.33)：ESI-MSm/z694[M-H]-(如图32)，典型的含Cl化合物的同位素取代特征，说明加入的前体L-4-Cl-Phe已经掺入到化合物22中，比化合物21少163个质量数，由此推测化合物22与21的区别在于前者比后者少了N-末端的间酪氨酸残基；MS/MS分析结果如图32，m/z495为[M-4-Cl-Phe-H]–的碎片离子峰，由此推断化合物22末端也为L-4-Cl-Phe，m/z564为[M-Uracil-H2O-H]–的碎片离子峰，进一步证实化合物22的结构，如图32所示。化合物23(RT:27.31)：ESI-MSm/z841[M-H]-(如图33)，典型的含Cl化合物的同位素取代特征，说明加入的前体L-4-Cl-Phe已经掺入到化合物23中；MS/MS分析结果如图33，与A-1的MS/MS图谱相比，其差别只C-末端的氨基酸不同，m/z642为[M-4-Cl-Phe-H]–的碎片离子峰，因此可以推断化合物23的C-末端为L-4-Cl-Phe，m/z711为[M-Uracil-H2O-H]–的碎片离子峰，化合物23的结构如图33所示。实施例9、加入L-3-Cl-Phe，LC-MS分析结果如下：向发酵液中加入L-3-Cl-Phe，共得到3个新组分24-26(图34)。化合物24(RT:21.80)：ESI-MSm/z857[M-H]-(如图35),典型的含Cl化合物的同位素取代特征，说明加入的前体L-3-Cl-Phe已经掺入到化合物24中；MS/MS分析结果如图35，分子离子及碎片离子与化合物21相同，根据加入的前体可以推断化合物24与21的区别在于前者的C-末端为L-3-Cl-Phe，化合物25的结构如图35所示。化合物25(RT:27.28)：ESI-MSm/z841[M-H]-(如图36)，典型的含Cl化合物的同位素取代特征，说明加入的前体L-3-Cl-Phe已经掺入到化合物25中；MS/MS分析结果如图36，分子离子及碎片离子与化合物23相同，根据加入的前体可以推断化合物25与23的区别在于前者的C-末端为L-3-Cl-Phe，化合物25的结构如图36所示。化合物26(RT:30.16)：ESI-MSm/z875，877[M-H]-(如图37)，典型的含2个Cl原子化合物的同位素取代特征，说明化合物26中有两个前体L-3-Cl-Phe掺入；MS/MS分析结果如图37，m/z676为[M-3-Cl-Phe-H]–的碎片离子峰，因此可以推断其中一个L-3-Cl-Phe掺入到C-末端；根据其生物合成途径及底物相似性推断，另一个L-3-Cl-Phe只能掺入到N-末端，化合物26的结构如图37所示实施例10、加入L-2-Cl-Phe，LC-MS分析结果如下：向发酵液中加入L-2-Cl-Phe，共得到3个新组分27-29(图38)。化合物27(RT:19.76)：ESI-MSm/z857[M-H]-(如图39)，典型的含Cl化合物的同位素取代特征，说明加入的前体L-2-Cl-Phe已经掺入到化合物27中；MS/MS分析结果如图39，分子离子及碎片离子与化合物24相同，根据加入的前体可以推断化合物27与24的区别在于前者的C-末端为L-2-Cl-Phe，化合物27的结构如图39所示。化合物28(RT:25.15)：ESI-MSm/z880[M-H]-(图40)，典型的含Cl化合物的同位素取代特征，说明加入的前体L-2-Cl-Phe已经掺入到化合物28中；MS/MS分析结果如图40，m/z676为[M-Trp-H]–的碎片离子峰，推断其C-末端与SSA相同，为色氨酸残基，根据其生物合成途径及底物相似性推断，前体L-2-Cl-Phe只能掺入到N-末端，化合物28的结构如图40所示。化合物29(RT:27.69)：ESI-MSm/z875，877[M-H]-，典型的含2个Cl原子化合物的同位素取代特征，说明化合物29中有两个前体L-2-Cl-Phe掺入；MS/MS分析结果如图41，分子离子及碎片离子与化合物26相同，根据加入的前体可以推断化合物29与26的区别在于前者的C-末端为L-2-Cl-Phe，化合物29的结构如图41所示。实施例11、加入L-4-F-Phe，LC-MS分析结果如下：向发酵液中加入L-4-F-Phe，共得到2个新组分30，31(图42)。化合物30(RT:16.97)：ESI-MSm/z841[M-H]-,MS/MS分析结果如图43，与SSA的MS/MS图谱相比，其差别只C-末端的氨基酸不同，m/z658为[M-4-Cl-Phe-H]–的碎片离子峰，因此可以推断化合物30的C-末端为L-4-F-Phe，m/z711为[M-Uracil-H2O-H]–的碎片离子峰，化合物30的结构如图43所示。化合物31(RT:24.16)：ESI-MSm/z825[M-H]-，MS/MS分析结果如图44，与A-1的MS/MS图谱相比，其差别只C-末端的氨基酸不同，m/z642为[M-4-F-Phe-H]–的碎片离子峰，因此可以推断化合物31的C-末端为L-4-F-Phe，m/z695为[M-Uracil-H2O-H]–的碎片离子峰，化合物31的结构如图44所示。实施例12、加入L-3-F-Phe，LC-MS分析结果如下：向发酵液中加入L-3-F-Phe，共得到5个新组分32-36(图45)。化合物32：ESI-MSm/z841[M-H]-,MS/MS分析结果如图46，分子离子及碎片离子与化合物30相同，根据加入的前体可以推断化合物32与30的区别在于前者的C-末端为L-3-F-Phe，化合物32的结构如图46所示。化合物33：ESI-MSm/z864[M-H]-，MS/MS分析结果如图47，m/z660为[M-Trp-H]–的碎片离子峰，推断其C-末端与SSA相同，为色氨酸残基，根据其生物合成途径及底物相似性推断，前体L-3-F-Phe只能掺入到N-末端，化合物33的结构如图47所示。化合物34：ESI-MSm/z843[M-H]-，比化合物32多2个质量数，根据加入前体推测有两个L-3-F-Phe掺入到了化合物34中；MS/MS分析结果如图48，m/z660为[M-3-F-Phe-H]–的碎片离子峰，因此可以推断其中一个L-3-F-Phe掺入到C-末端；根据其生物合成途径及底物相似性推断，另一个L-3-F-Phe只能掺入到N-末端，化合物34的结构如图48所示化合物35：ESI-MSm/z825[M-H]-，MS/MS分析结果如图49，分子离子及碎片离子与化合物31相同，根据加入的前体可以推断化合物35与31的区别在于前者的C-末端为L-3-F-Phe，化合物35的结构如图49所示。化合物36：ESI-MSm/z678[M-H]-，比化合物32少163个质量数，由此推测化合物36与32的区别在于前者比后者少了N-末端的间酪氨酸残基；MS/MS分析结果如图50，m/z495为[M-3-F-Phe-H]–的碎片离子峰，由此推断化合物36末端也为L-3-F-Phe，m/z548为[M-Uracil-H2O-H]–的碎片离子峰，进一步证实化合物36的结构，如图50所示。实施例13、加入L-2-F-Phe，LC-MS分析结果如下：向发酵液中加入L-2-F-Phe，共得到3个新组分37-39(图51)。化合物37：ESI-MSm/z841[M-H]-,MS/MS分析结果如图52，分子离子及碎片离子与化合物30相同，根据加入的前体可以推断化合物37与30的区别在于前者的C-末端为L-2-F-Phe，化合物37的结构如图52所示。化合物38：ESI-MSm/z864[M-H]-，MS/MS分析结果如图53，分子离子及碎片离子与化合物33相同，根据加入的前体可以推断化合物38与33的区别在于前者的C-末端为L-2-F-Phe，化合物38的结构如图53所示。化合物39：ESI-MSm/z843[M-H]-，MS/MS分析结果如图54，分子离子及碎片离子与化合物34相同，根据加入的前体可以推断化合物39的N-末端和C-末端均为L-2-F-Phe，化合物39的结构如图54所示。B、试验例部分试验例1：本发明化合物抗菌活性测定(MIC)结核杆菌H37RV的MIC(μg/ml)测定方法：分枝杆菌微量直观快速药敏试验法材料和方法1、受试药物:本发明一些示例性的化合物，对照药SSA为本实验室自制，对照药异烟肼(INH)和利福平(RFP)为SIGMA公司产品。2、实验菌株：结核分枝杆菌标准株H37Rv。3、培养基：7H9液体培养基为Difco产品。4、方法，参照文献Cllinsetal.MicroplatealamarblueassayversusBACTEC460systemforhigh-throughputscreeningofcompoundsagainstMycobacteriumtuberculosisandMycobacteriumavium.AntimicrobialAgentsChemother,1997,1004-1009进行，具体如下：无菌96孔板，200μl灭菌水加入96孔板的四周各孔中，以防止培养过程中各实验孔的成分蒸发，分别精密称取各个化合物1mg，加灭菌蒸馏水1ml，制成1000μg/ml的储备液；INH用灭菌蒸馏水溶解，RFP用二甲基甲酰胺溶解；0.22μm微孔滤膜过滤。分别用7H9培养基(不含吐温80)稀释为所需的各二倍浓度，加入96孔板100μl，试验药(本发明化合物)及SSA的终浓度为：128.0、64.0、32.0、16.0、8.0、4.0、2.0、1.0、0.5、0.25、0.125、0.0625μg/ml。对照药INH和RFP终浓度为：32.0、16.0、8.0、4.0、2.0、1.0、0.5、0.25、0.125、0.0625、0.032μg/ml。选用改良罗氏培养基上生长旺盛的各菌株培养物，制成菌悬液接种到7H9液体培养基中，37℃孵育10-14的，生长至浊度为McFarland1(相当于107CUF/ml)，稀释后每孔接种100μl，菌液终浓度1×106CFU/ml。设2个不含抗菌药的生长对照孔，置于37℃孵育。第5天后加入生长对照孔20μl10×AlamarBlue(Setotec公司产品)和5％吐温8050μl的混合液，37℃孵育24h，如果颜色从蓝色变为粉色，则在各实验药物的孔内加入上述量的AlamarBlue和吐温80混合液，37℃孵育24h，记录各孔的颜色，MIC定义为阻止颜色变化(从蓝色变为粉色)的最低药物浓度。结果表明本发明化合物在抗结核分支杆菌方面具有明显效果。试验例2：本发明化合物的耐药性测定1、受试药物:本发明示例性的化合物，对照药SSA为本实验室自制，对照药异烟肼(INH)和利福平(RFP)为SIGMA公司产品。2、实验菌株：结核分枝杆菌标准株H37Rv，耐药结核杆菌2199。3、培养基及方法同试验例1。结果表明本发明化合物在抗结核分支杆菌方面具有明显效果。当前第1页1 2 3