本发明涉及一种从中药粉黄芩中分离制备其有效成黄芩多糖的生产工艺。
背景技术：
黄芩(scutellariabaikalensisgeorgi)是我国传统中药重要组成之一，其根部作为一种传统中药材主要用于抗病毒感染细菌感染、抗肿瘤、清除自由基、调节免疫等，同时还具有降低胆固醇和血压的功效。其所含有的多种有效成分逐渐被人们所发现，其中包括黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、黄芩多糖等。其中，黄芩多糖由于其分离纯化手段复杂导致国内外对其关注度不够，其作为生物活性多糖家族的一份子，具有良好的抗氧化和免疫调节作用，因此人们逐渐对黄芩多糖药效以及分离的研究工作产生兴趣，期望发现更多关于黄芩等中药材的生物医学作用。
目前植物多糖的提取方法主要有：热水浸提法、溶剂提取法、碱浸提法、酸浸提法、酶解提取法、微波提取法、超滤法以及超声波法等。经过分离沉淀获得的多糖提取物中，常会混杂着蛋白质、色素、无机盐以及醇不溶的小分子有机物(如低聚糖)等杂质，需要分别除去。除蛋白质常用的方法有：sevag法、三氯醋酸法、层析法、酶法、等电点法、三氟三氯乙烷法及硫酸锌沉淀法等。脱色常用的方法有：金属络合物法、离子交换法、氧化法和吸附法，其中金属络合物法主要是采用一重金属铜、铁、铅等沉淀多糖，使多糖和部分色素相分离；氧化法主要是用过氧化氢或者浓氨水进行脱色；吸附法主要包括deae-纤维素法，活性炭吸附法和硅藻土吸附法等。除去低分子质量的杂质，如低聚糖、脱蛋白残留溶剂、无机盐等，常用的方法有透析法、超滤法、凝胶过滤法和离子交换树脂法等。这些方法或多或少的存在：1.分离过程使用具有明确毒性的溶剂、杂质较多：2.工艺不易放大，不适合工业化生产，生产周期较长，操作复杂，生产成本较高；3.有毒溶剂不但使成品存在被污染的危险，并且对生产环境和操作人员构成潜在的危害。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种从黄芩根中提取黄芩多糖的分离纯化方法，本发明所述的黄芩多糖纯化方法方便易行、可操作性好、易于工业化生产，避免了有毒溶剂和复杂设备的使用，可实现黄芩粗多糖的前期快速除杂的目的。
实现本发明目的所采用的技术方案是：一种从黄芩根中提取黄芩多糖的分离纯化方法，该方法包括以下步骤：
(1)脱脂：将黄芩材粉碎成50-100目的粗粉，加入索氏提取器内进行脱脂三次，脱脂完成后自然晾干，得到脱脂后的黄芩粉末；
(2)水提：将脱脂后的黄芩粉末加入索氏提取器内，以水为溶剂对黄芩粉末进行抽提，反复三次，合并抽提液，得到浓度为50-200mg/l的黄芩粗多糖水溶液；
(3)絮凝：向黄芩粗多糖水溶液中缓慢加入20mg/ml的壳聚糖醋酸溶液进行絮凝，时间为10-50分钟。其中，壳聚糖原料选用生化级别试剂，粘度范围在50-800mpa·s，水溶液醋酸体积浓度为2％。将絮凝所得沉淀以10000-15000r/min的速度离心分离，回收上清液。
(4)将回收得到的上清液浓缩至原体积的0.25-0.5倍，加入95％乙醇边加边搅拌，使最终乙醇含量达到80％。静置10分钟后过滤，将沉淀冷冻干燥，得浅黄色黄芩多糖粉末。
本发明的特点：纯化过程可一步将蛋白与色素同时除去，多糖损失率小，操作简单，成本低，适合工业化生产，且不使用有毒溶剂，过程安全高效。
具体实施方式
一种从黄芩根中提取黄芩多糖的分离纯化方法，按照常规索氏提取法对50-100目的黄芩粉末进行多糖提取，包括石油醚脱脂，水提三次。选取粘度范围在50-800mpa·s的生化级别壳聚糖，配置浓度为20mg/ml的壳聚糖醋酸水溶液。将上述壳聚糖溶液加入到黄芩粗多糖的水溶液中，使得壳聚糖在抽提液中的最终浓度为0.2-1mg/ml，缓慢加入进行絮凝，絮凝时间为10-50分钟，以10000-15000r/min的速度离心分离，回收上清液，浓缩至原体积的0.25-0.5倍，按照常规水溶醇沉的方法得到多糖沉淀，过滤沉淀，沉淀经冷冻干燥后得黄芩多糖纯品。
实施例1
将200g黄芩药材粉碎成50-100目的粗粉，加入索氏提取器内，加入50ml石油醚，脱脂三次。将脱脂后的黄芩粉末烘干后加入索氏提取器内，用50ml去离子水于100℃下抽提三次，得200ml抽提液，自然冷却后备用；向200ml抽提液中缓慢加入2ml浓度为20mg/ml的壳聚糖2％醋酸水溶液后静置10min，于10000rpm离心弃去沉淀，回收黄芩多糖溶液，减压蒸馏使溶液体积为50ml；向50ml多糖溶液中加入267ml95％乙醇使得乙醇终浓度为80％，静置10分钟后过滤、将沉淀冷冻干燥，既得黄芩多糖纯品，回收率为91.54％，脱色率达32.35％，蛋白脱除率达36.21％。
实施例2
将200g黄芩药材粉碎成50-100目的粗粉，加入索氏提取器内，加入50ml石油醚，脱脂三次。将脱脂后的黄芩粉末烘干后加入索氏提取器内，用50ml去离子水于100℃下抽提三次，得200ml抽提液，自然冷却后备用；向200ml抽提液中缓慢加入10ml浓度为20mg/ml的壳聚糖2％醋酸水溶液后静置30min，于15000rpm离心弃去沉淀，回收黄芩多糖溶液，减压蒸馏使溶液体积为40ml；向40ml多糖溶液中加入213ml95％乙醇使得乙醇终浓度为80％，静置10分钟后过滤、将沉淀冷冻干燥，既得黄芩多糖纯品，回收率为80.43％，脱色率达82.35％，蛋白脱除率达55.39％。
实施例3
将200g黄芩药材粉碎成50-100目的粗粉，加入索氏提取器内，加入50ml石油醚，脱脂三次。将脱脂后的黄芩粉末烘干后加入索氏提取器内，用50ml去离子水于100℃下抽提三次，得200ml抽提液，自然冷却后备用；向200ml抽提液中缓慢加入6ml浓度为20mg/ml的壳聚糖2％醋酸水溶液后静置50min，于12000rpm离心弃去沉淀，回收黄芩多糖溶液，减压蒸馏使溶液体积为100ml；向100ml多糖溶液中加入533ml95％乙醇使得乙醇终浓度为80％，静置10分钟后过滤、将沉淀冷冻干燥，既得黄芩多糖纯品，回收率为80.65％，脱色率达73.53％，蛋白脱除率达50.33％。