有益菌培养基及培养方法、用途与流程

文档序号:12816659阅读:1218来源:国知局

本发明涉及有益菌培养基技术领域,特别涉及有益菌培养基及培养方法、用途。



背景技术:

当今世界,人类已认识到微生态失衡可带来疾病的危险,已认识到食品中抗生素、激素、化学药品、农药残留对人体的潜在危害。为了预防疾病,提高人类健康素质,减少环境污染和竞争压力,人类需要回归自然,呼唤绿色食品和药物。益生素及抗菌肽类产品在保健、医药、食品、化妆品、饲料、环保等领域都初露头角。越来越多的国家反对用抗生素作为生长促进剂,而且通过立法加以禁用。抗生素的替代物已成为高科技研究领域的热点。

每年我国作为兽药使用的抗菌素占总药量的45.8%。我国有秸秆7亿多吨,玉米秸秆2.2亿吨,玉米秸秆按70%的废弃资源再利用率计,有1.54亿吨,需要生物秸秆发酵剂(每吨用500g)7.7万吨。奶牛、肉牛、肉羊、绒山羊等反刍动物都需要饲喂发酵秸秆生物饲料添加剂使肉牛、肉羊增重15~20%,肉鸡增重5%以上,在绿色养殖业中发挥着重大而深远的意义,以后的需求量会越来越大。近几年,抗生素的残留问题逐渐被发现和重视,药物的残留问题而引起的耐药问题的现象时有发生,因此一些研究者将产细菌素的乳酸菌或其抑菌素应用于取代抗生素产生了良好效果。

细菌素(抗菌肽、多肽抗生素)是某些细菌在代谢过程中通过核糖体合成机制产生的一类具有抑菌活性的多肽或前体多肽。对同种近缘菌株呈现狭窄的抑制谱,通过在靶细胞上穿孔、抑制肽聚糖合成,与核糖体或trna相互作用抑制蛋白质合成,直接降解靶细胞dna,从而起到抑菌效果。随着生物制剂的基因工程技术研究进展,国内外的学者相继发现细菌素不但具有抗细菌、抗真菌的作用,还具有抗寄生虫、病毒、癌细胞等功能,在医药学上和食品保鲜技术上,成为研究的热点。近年来,随着分子生物学和生物学技术的发展,同时由于乳酸菌产生的细菌素有许多特点,因而越来越多的研究人员对乳酸菌,益生素在食品添加剂,新药开发等领域的应用产生极大的兴趣。deklerk等在1961年报道由嗜酸乳杆菌和发酵乳杆菌产生的细菌素;honso1977年报道由嗜酸乳杆菌产生的细菌素;cilano等在1990年报道由嗜热链球菌产生的细菌素;giraffa于1995年报道由肠球菌产生的细菌素,而且证明这些肠球菌素能够抑制食品中的病原菌,如:葡萄球菌,梭状芽胞杆菌属,杆菌属等。而更为有意义的是,一些肠球菌素能够显著抑制对人体健康极为不利的李斯杆菌。

随着动物饲料市场对高质量动物产品需求的增长,稳定、高效地细菌素基因工程菌及酶基因工程菌终将会占据添加剂的大部分市场,生物饲料添加剂在为畜禽提供平衡的营养、提高消化率以及抗菌抗虫等方面发挥着重要的作用。

但对于微生物,每个菌种都有自己适合生长的培养基,当大生产时,虽然是多种菌的复合菌制剂效果会很好,但每种菌各自配置专用培养基会带来混乱和麻烦,成本较高,操作复杂;而一些特殊培养基中需要用到羊血、羊膜液、半胱氨酸等造价很高且不易保存的药品,同样也不利于工业化生产使用。



技术实现要素:

本发明的目的是为了解决上述问题,提供一种有益菌培养基,碳氮比合理、维生素全面、微量元素全面,是能够使所有益菌菌种都能够生长的成本低廉、操作方便的培养基,有利于大生产的使用,经济有效的解决现有技术中存在的问题。

本发明具体技术方案如下:

一种有益菌培养基,当所述有益菌培养基为液体培养基时,每1l中包括水解乳蛋白10-12g、酵母粉5-6g、蛋白胨10-12g、葡萄糖10-12g、氯化钠3-5g、西红柿汁180-200ml、微量盐溶液1-2ml,其余为蒸馏水;当所述有益菌培养基为固体培养基时,还包括琼脂18-20g;

一种有益菌培养基,当所述有益菌培养基为液体培养基时,每1l中包括水解乳蛋白10g、酵母粉5g、蛋白胨10g、葡萄糖10g、氯化钠5g、西红柿汁200ml、微量盐溶液1ml,其余为蒸馏水;当所述有益菌培养基为固体培养基时,还包括琼脂20g;

进一步地,所述微量盐溶液每1l中包括硫酸镁5g,氯化锰0.5g,三氯化铁0.5g。

进一步地,所述有益菌培养基ph控制在7.2-7.6。

进一步地,所述有益菌培养基ph控制在7.4。

进一步地,所述有益菌培养基ph调节采用氢氧化钠溶液和稀盐酸溶液。

进一步地,所述氢氧化钠溶液浓度为2mol/l。

进一步地,所述稀盐酸溶液的质量浓度为10%。

进一步地,一种有益菌培养基的用途,用于培养有益菌。

本发明与现有技术相比,具有以下有益效果:

本发明所述有益菌培养基,碳氮比合理、维生素全面、微量元素全面:乳清蛋白水解产物中含有大量的生物活性肽和丰富的氨基酸,这些肽和氨基酸在细胞生理活动及代谢功能的调节中具有极其重要的作用;氯化钠中的钠离子虽然不参与细胞的组成,但仍是微生物发酵培养基的必要成分,钠离子与维持细胞渗透压有关,微生物在等渗溶液环境中生长最好,在高渗溶液溶液中,细胞失水收缩,从而抑制了微生物体内的生理生化反应,抑制其生长繁殖。故在培养基中常加入少量的钠盐;西红柿汁里面含有一些特别能够促进乳酸菌生长的因子;酵母粉能够为微生物提供有机氮源以及维生素、生长因子等营养;蛋白胨采用精蛋白为基质,经特殊水解提取制备的干燥粉末,水解程度低于蛋白胨,营养极为丰富,可做多种培养基的基础,能为微生物提供c源、n源、生长因子等营养物质;葡萄糖作为微生物培养的碳源,对微生物生长代谢的作用主要为其提供生命活动所需的能量,为微生物或细胞的正常生长,分裂提供物质基础。

本发明所述有益菌培养基,使所有益菌菌种都能够生长的成本低廉、操作方便的培养基,培养过程中产生细菌素,能够抑制病原菌生长,同时,细菌无氧呼吸产酸,也能够有效一直病原菌生长,有利于大生产的使用,经济有效的解决现有技术中存在的问题。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的具体实施方式进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。

对于本领域的普通技术人员而言,可以具体情况理解上述术语在本发明中的具体含义。

一种有益菌培养基,当所述有益菌培养基为液体培养基时,每1l中包括水解乳蛋白10-12g、酵母粉5-6g、蛋白胨10-12g、葡萄糖10-12g、氯化钠3-5g、西红柿汁180-200ml、微量盐溶液1-2ml,其余为蒸馏水;当所述有益菌培养基为固体培养基时,还包括琼脂18-20g;

本实施例所述的,微量盐溶液每1l中包括硫酸镁5g,氯化锰0.5g,三氯化铁0.5g。

本实施例所述的,有益菌培养基ph控制在7.2-7.6。

本实施例所述的,有益菌培养基ph调节采用氢氧化钠溶液和稀盐酸溶液。

本实施例所述的,氢氧化钠溶液浓度为2mol/l。

本实施例所述的,稀盐酸溶液的质量浓度为10%。

由于有些有益菌如乳酸菌,缺乏生物合成的途径,不能合成其生长所必需的一些氨基酸、维生素等营养物质,并且水解完整蛋白的能力很弱,因此对营养的要求十分苟刻。如果将乳清蛋白作为菌种高密度生长所必需的氮源,需要对乳清蛋白进行一定程度的水解。使其容易被菌种吸收利用,加速生长繁殖。乳清蛋白水解产物中含有大量的生物活性肽和丰富的氨基酸,这些肽和氨基酸在细胞生理活动及代谢功能的调节中具有极其重要的作用。氯化钠中的钠离子虽然不参与细胞的组成,但仍是微生物发酵培养基的必要成分,钠离子与维持细胞渗透压有关,微生物在等渗溶液环境中生长最好,在高渗溶液溶液中,细胞失水收缩,从而抑制了微生物体内的生理生化反应,抑制其生长繁殖。故在培养基中常加入少量的钠盐。西红柿汁是将新鲜西红柿洗净,切碎,置4℃冰箱8~12h,取了后用纱布过滤即成。西红柿汁里面含有一些特别能够促进乳酸菌生长的因子。

酵母粉能够为微生物提供有机氮源以及维生素、生长因子等营养。蛋白胨采用精蛋白为基质,经特殊水解提取制备的干燥粉末,水解程度低于蛋白胨,营养极为丰富,可做多种培养基的基础,能为微生物提供c源、n源、生长因子等营养物质;葡萄糖作为微生物培养的碳源,对微生物生长代谢的作用主要为其提供生命活动所需的能量,为微生物或细胞的正常生长,分裂提供物质基础。

本实施例所述的培养基中蛋白质,氨基酸,维生素、微量元素、碳氮比更适合有益菌生长,解决了生产中简单操作的问题,方便大生产且保证效果。

实施例1

一种有益菌培养基,所述有益菌培养基为液体培养基,每1l中包括水解乳蛋白10g、酵母粉5g、蛋白胨10g、葡萄糖10g、氯化钠5g、西红柿汁200ml、微量盐溶液1ml,其余为蒸馏水;

本实施例所述的,微量盐溶液每1l中包括硫酸镁5g,氯化锰0.5g,三氯化铁0.5g。

本实施例所述的,有益菌培养基ph控制在7.2。

本实施例所述的,有益菌培养基ph调节采用氢氧化钠溶液和稀盐酸溶液。

本实施例所述的,氢氧化钠溶液浓度为2mol/l。

本实施例所述的,稀盐酸溶液的质量浓度为10%。

实施例2

本实施例是在实施例1的基础上改进的,实施例1中所描述的内容也是本实施例所具有的,此处不再具体赘述。

一种有益菌培养基,所述有益菌培养基为液体培养基,每1l中包括水解乳蛋白11.7g、酵母粉5.3g、蛋白胨10.2g、葡萄糖12g、氯化钠3.6g、西红柿汁190ml、微量盐溶液1.2ml,其余为蒸馏水;

本实施例所述的,有益菌培养基ph控制在7.6。

实施例3

本实施例是在实施例1的基础上改进的,实施例1中所描述的内容也是本实施例所具有的,此处不再具体赘述。

一种有益菌培养基,所述有益菌培养基为液体培养基,每1l中包括水解乳蛋白10.4g、酵母粉6g、蛋白胨10.8g、葡萄糖11.3g、氯化钠4.4g、西红柿汁185ml、微量盐溶液1.5ml,其余为蒸馏水;

本实施例所述的,有益菌培养基ph控制在7.4。

实施例4

本实施例是在实施例1的基础上改进的,实施例1中所描述的内容也是本实施例所具有的,此处不再具体赘述。

一种有益菌培养基,所述有益菌培养基为液体培养基,每1l中包括水解乳蛋白12g、酵母粉5.5g、蛋白胨11g、葡萄糖10.6g、氯化钠4.7g、西红柿汁186ml、微量盐溶液1.3ml,其余为蒸馏水;

本实施例所述的,有益菌培养基ph控制在7.3。

实施例5

本实施例是在实施例1的基础上改进的,实施例1中所描述的内容也是本实施例所具有的,此处不再具体赘述。

一种有益菌培养基,所述有益菌培养基为固体培养基,每1l中包括水解乳蛋白12g、酵母粉5.5g、蛋白胨11g、葡萄糖10.6g、氯化钠4.7g、西红柿汁186ml、微量盐溶液1.3ml,琼脂18g,其余为蒸馏水;

本实施例所述的,有益菌培养基ph控制在7.2。

实施例6

本实施例是在实施例1的基础上改进的,实施例1中所描述的内容也是本实施例所具有的,此处不再具体赘述。

一种有益菌培养基,所述有益菌培养基为固体培养基,每1l中包括水解乳蛋白11.5g、酵母粉5.8g、蛋白胨12g、葡萄糖11.6g、氯化钠3.9g、西红柿汁180ml、微量盐溶液1.9ml,琼脂19g,其余为蒸馏水;

本实施例所述的,有益菌培养基ph控制在7.4。

实施例7

本实施例是在实施例1的基础上改进的,实施例1中所描述的内容也是本实施例所具有的,此处不再具体赘述。

一种有益菌培养基,所述有益菌培养基为固体培养基,每1l中包括水解乳蛋白10.9g、酵母粉5g、蛋白胨11.7g、葡萄糖11.1g、氯化钠3.3g、西红柿汁197ml、微量盐溶液1ml,琼脂18.6g,其余为蒸馏水;

本实施例所述的,有益菌培养基ph控制在7.3。

实施例8

本实施例是在实施例1的基础上改进的,实施例1中所描述的内容也是本实施例所具有的,此处不再具体赘述。

一种有益菌培养基,所述有益菌培养基为固体培养基,每1l中包括水解乳蛋白12g、酵母粉5.5g、蛋白胨11.4g、葡萄糖10.8g、氯化钠3g、西红柿汁188ml、微量盐溶液1.7ml,琼脂20g,其余为蒸馏水;

本实施例所述的,有益菌培养基ph控制在7.5。

对上述优选的实施1所述有益菌培养基,在有益菌(双歧杆菌、乳酸杆菌、贝氏酵母、粪链球菌)的不同液体培养基中活菌数的比较,结果如下表:

由上表可见,本实施例所述的有益菌培养基,显微镜下革兰氏染色形态可见,能够培养各种有益菌,生长很好且活菌数高。所以在大生产中使用方便快捷。该培养基对乳酸菌类有益菌培养效果最好,菌体壮大,活菌数高。厌氧菌生产良好。乳酸菌可以提高食品营养价值,提高食品保藏性能和附加值,具有抗病和增强免疫等许多特殊的生理活性和营养功能,日益受到人们的重视,他们中的许多属已被广泛应用于生产和实践中。目前,乳酸菌广泛应用于医药、食品和发酵等领域。由于乳酸菌可产生一些具有抑菌作用的细菌素,在食品防腐保鲜和替代抗生素中起重要作用。

最后应说明的是:以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案,而非对其限制;尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明,本领域的普通技术人员应当理解:其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改,或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换;而这些修改或者替换,并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

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