添加了 3批不同大豆水解液的细胞培养基 (KerryHyP印1510#1、D0M0 SE50MAF UF#1和#2)，进行流速可控的病毒过滤的病毒过滤动力 学（图2C)。
[0026] 所使用的过滤器和实验条件（同样见实施例1至实施例4)如下：
[0027] 过滤器 A :Sartorius Virosart CPV，180cm2;在 30 °C 下，流速为大约 30L/ (m2Xhr)；
[0028] 过滤器 D :Asahi BioEX 10cm2;室温（大约 22°C )，流速为大约 20lV(m2Xhr)。
[0029] 和图1中的实验相比，该过滤进行了更长的时间跨度长达81天或直至达到 2000mbar的压力。图2A表明每单位膜表面积的过滤体积相对于时间的容积，在大约最低 16000L/m 2 (过滤器A及D0M0 SE50MAF#2)至大约35000L/m2 (过滤器D及3组不同的水解 液）的范围内。取决于过滤器类型，过滤终点的最大压力在大约1200mbar至2000mbar之 间（图2B)。一般而言，大豆水解液之间的区别对于容积和最大压力的影响非常地低。
[0030] 图3是显示使用过滤器A(Sartorius Virosart CPV 180cm2)和包含大豆水解液 D0M0 SE50MAF UF批次#2时在大约22°C观察到的流量和压差之间的关系（见实施例5)的 图。达到可检测到的最低比流速的所需最低压力差为大约lOOmbar，然后，比流速和压差之 间逐渐增长呈明显的线性比例关系。
[0031] 图4表明了使用过滤器A (Sartorius CPV 180cm2)和包含大豆水解液Kerry HyPepl510#2时，过滤中可控压力和可控流速之间的区别（见实施例1至实施例4)。过滤 进行19天，在该时间时，过滤的容积达到6000-7000L/m 2。流速可控过滤的最终压力与压力 可控过滤的压力相当（见图4B)，压力可控过滤的最终比流速和流速可控过滤的流速相当 (见图4C)。这表明病毒过滤的两种控制策略都能导致相当的容积。
[0032] 图5表明了实施例6中所述的在10L生物反应器实验中分别使用病毒过滤的培养 基和未进行病毒过滤的培养基的结果。在开始实验之前，使用过滤器A分批进行细胞培养 基的病毒过滤。每组使用添加了 3批不同大豆水解液（Kerry HyP印1510,批次#1 ;D0M0 SE50MAF UF，批次#1和D0M0 SE50MAF UF，批次#2)中的一种的细胞培养基平行地进行实 验。数据由4周连续细胞培养中的最后3周计算得到。在各自的病毒过滤的培养基（未过 滤大豆1、未过滤大豆3和未过滤大豆2)相比它们未经过滤的对照（大豆1、大豆3和大豆 2)，其单位生产率（图5A)、体积生产率（图5B)和比生长速率（图5C)没有检测到区别。
[0033] 图6表明了实施例7中所述的在120L生物反应器实验中分别使用病毒过滤 的培养基和未进行病毒过滤的培养基的结果。交替使用过滤器E(Sartorius Virosart CPV, 2000cm2)和过滤器F(Millipore Viresolve NFP 850cm2)，对生物反应器的培养基供应 管线和细胞培养基进行病毒过滤，以连续模式进行大约58天。病毒过滤后的培养基给料的 时间间隔和容积如图6A所示。使用不同的过滤器计算时间间隔。在各自的病毒过滤后的 培养基与未经滤的对照之间，比生长速度（图6B)和体积生长率（图6C)没有检测到区别。
[0034] 图7表明了在使用过滤器G(ASAHI Planova 15N)病毒过滤器对包含大豆水解液 D0M0 SE50MAF#5UF的MMV加标（spiked)培养基进行过滤期间取得的顺序滤液样品中发现 的MMV感染力滴度[TCID 5Q/mL]的变化（见实施例8)。在2至3天内，观察到低水平病毒 的漏出（break-through)。然而，病毒清除看起来是有效的。
[0035] 图8表明了在使用过滤器D (Asahi BioEX)病毒过滤器过滤包含大豆水解液（运 行#1含大豆水解液DMV SE50MAF UF#5 ;运行#2含大豆水解液DMV SE50MAF UF#4))的MMV 加标（spiked)培养基期间取得的顺序滤液样品中发现的MMV感染力滴度[TCID5(l/mL]的变 化（见实施例9)。没有观察到病毒的漏出（break-through),因此，病毒清除被认为是有效 的和彻底的。
[0036] 图9表明实施例10中所述的MMV-加标（spiked)培养基过滤期间取得的顺序滤 液样品中发现的MMV感染力滴度[TCID 5Q/mL]变化。运行#1和#2 (过滤器D)中没有观察 到病毒的漏出（break-through)，这说明包含大豆水解液的培养基的病毒清除是有效的和 彻底的。在运行#3和#4(过滤器I)与运行#5和#6 (过滤器G)中，观察到低水平的病毒 漏出（break-through)，这说明包含大豆水解液的培养基的病毒清除是有效的但不够彻底 的。在运行#7(过滤器B)和运行#8(过滤器H)中，观察到更加显著的病毒漏出，这表明减 少的病毒清除因素在一个显著性的极限。然而，至少一个实验中的所有过滤器可以实现最 低总体滴度的降幅超过大约llog TCID5(l/mL。
[0037] 表1 :加标实验中使用的病毒过滤器和大豆水解物的组合 [0038]
【主权项】
1. 一种从制剂中清除病毒污染物的方法，所述制剂为细胞培养基或细胞培养基的至少 一种成分，所述方法包含步骤： a) 使所述制剂通过最大有效孔径为75nm的病毒过滤器过滤至少大约24小时。
2. 如权利要求1所述的方法，其中，在容积为至少大约2000L/m2、优选至少大约3000L/ m2、最优选至少5000L/m 2下进行所述过滤。
3. 如权利要求1-2中任一项所述的方法，其中，使所述制剂进行至少大约48小时至大 约7个月、优选大约72小时至大约3个月的过滤。
4. 如权利要求1-3中任一项所述的方法，还包含下述步骤： b) 将滤液供给至细胞培养或供给至作为细胞培养基成分的其它成分。
5. 如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中，所述过滤是连续过滤。
6. 如权利要求1-5中任一项所述的方法，其中，过滤在大约2°C至大约60°C、优选大约 l〇°C至大约40°C、最优选大约15°C至大约37°C的温度下进行。
7. 如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中，所述病毒过滤器为病毒污染物实现至 少lLog1(l减少值（LRV)，优选为病毒污染物实现至少4Log 1(l减少值（LRV)，最优选为病毒污 染物实现至少6Log1(l减少值（LRV)。
8. 如权利要求1-7中任一项所述的方法，其中，使用两个或两个以上的过滤器以串联、 并联或两者组合的方式进行过滤。
9. 如权利要求8所述的方法，其中，使用在含有Y型结点的管系统中并联的两个过滤器 进行过滤，其中每个过滤器与Y型结点的分支和制剂供应源处于流体相通。
10. 如权利要求卜9中任一项所述的方法，其中，在大约lOOmbar至大约4000mbar、优 选大约lOOmbar至大约3500mbar、最优选大约lOOOmbar至大约3000mbar的压力范围内进 行过滤。
11. 如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中，所述病毒过滤器是耐高温高压型病 毒过滤器。
12. 如权利要求1-11中任一项所述的方法，其中，所述细胞培养基包含大豆水解液。
13. 最大有效孔径为75nm的病毒过滤器的应用，用以至少24小时的过滤以从制剂中清 除病毒污染物，所述制剂为细胞培养基或细胞培养基的至少一种成分。
14. 如权利要求13所述的应用，其中，在容积为至少2000L/m2、优选至少3000L/m2、最 优选至少5000L/m 2下进行所述过滤。
15. 如权利要求13-14中任一项所述的应用，其中，所述过滤进行至少大约48小时至大 约7个月，优选大约72小时至大约3个月。
16. 如权利要求13-15中任一项所述的应用，其中，所述过滤为连续过滤。
17. 如权利要求13-16中任一项所述的应用，其中，在大约2°C至大约60°C、优选大约 l〇°C至大约40°C、最优选大约15°C至大约37°C的温度范围内进行过滤。
18. 如权利要求13-17中任一项所述的应用，其中，所述病毒过滤器为病毒污染物实现 至少lLog1(l减少值（LRV)，优选为病毒污染物实现至少4Log 1(l减少值（LRV)，最优选为病毒 污染物实现至少6Log1(l减少值（LRV)。
19. 如权利要求13-18中任一项所述的应用，其中，使用两个或两个以上的过滤器以串 联、并联或两者组合的方式进行过滤。
20. 如权利要求19所述的应用，其中，使用在含有Y型结点的管系统中并联的两个过滤 器进行过滤，其中每个过滤器与Y型结点的分支和制剂供应源处于流体相通。
21. 如权利要求13-20中任一项所述的应用，其中，在大约lOOmbar至大约4000mbar、 优选大约lOOmbar至大约3500mbar、最优选大约lOOOmbar至大约3000mbar的压力范围内 进行过滤。
22. 如权利要求13-21中任一项所述的应用，其中，所述病毒过滤器是耐高温高压型过 滤器。
23. 如权利要求13-22中任一项所述的应用，其中，所述细胞培养基包含大豆水解液。
24. -种制剂在细胞培养、制药、诊断和/或化妆品制品以及食品制品中的应用，其中 所述制剂为根据权利要求1-12中任一项所获得的细胞培养基或细胞培养基的至少一种成 分。
【专利摘要】本发明涉及一种从制剂中清除病毒污染物的方法，其中，所述制剂为细胞培养基或细胞培养基的至少一种成分。该方法包含使所述制剂通过最大有效孔径为75nm的病毒过滤器过滤至少大约24小时。进一步地，本发明涉及在过滤中使用病毒过滤器至少24小时，其中所述病毒过滤器的最大有效孔径为75nm以从制剂中清除病毒污染物，其中，所述制剂为细胞培养基或细胞培养基的至少一种成分。在一些实施方式中，根据本发明的过滤在容积为至少大约2000L/m2下进行。进一步地，本发明涉及制剂在细胞培养、制药、诊断和/或化妆品制品以及食品制品中的应用；其中，所述制剂为根据本发明所述的方法所获得的细胞培养基或细胞培养基的至少一种成分。
【IPC分类】C12N5-00, C12M1-12, A61L2-00, C12M1-00
【公开号】CN104640969
【申请号】CN201380032998
【发明人】W·蒙特, A·米特雷尔, M·赖特尔, M·哈斯拉赫尔, L·格里伯格, T·克赖尔
【申请人】巴克斯特国际公司, 巴克斯特保健股份有限公司
【公开日】2015年5月20日
【申请日】2013年6月13日
【公告号】CA2876473A1, EP2732020A1, US20130344535, WO2013192009A1