S04 ? 5H20 0? 008g，ZnS04 ? 7H20 0? 024g，以0? 2M KOH为溶 质的质量百分含量为〇.5%的溴百里香酚蓝21^，质量浓度为1.64%的？6#0了4 411^，順4(：1 lg，酵母提取物20mg，琼脂15g，生物素0. 01g，维生素B60. 02g，用0. 1MK0H调节PH为6. 5。 其中羧甲基纤维素的质量百分含量为〇. 2%，胰蛋白胨的质量百分含量为0. 5%。
[0035] 上述大豆根瘤内生菌DEntl302在制备果胶酶方面的应用。在含有果胶的牛肉膏 蛋白胨培养基中培养上述大豆根瘤内生菌DEntl302,收集发酵产物，即得果胶酶。所述牛肉 膏蛋白胨的组成为：牛肉膏2~4g，蛋白胨8~12g，NaCl 3~6g，琼脂15~20g，水1000mL ; 所述果胶的质量百分含量为〇. 5%。
[0036] 上述大豆根瘤内生菌DEnt 1302在制备ACC脱氨酶方面的应用。将上述大豆根瘤内 生菌DEntl302在无氮液体培养基中活化培养后，离心收集菌体，将收集的菌体用SM液体培 养基洗涤而后，置于SMA液体培养基中培养，收集发酵产物，即得ACC脱氨酶。所述无氮培养 基的组成为：甘露醇 l〇g，MgS04. 7H20 0? 2g，KH2P040. 2g，NaCl 0? 2g，NaCl 0? 2g，CaS04. 2H20 0. 2g，CaC035g，1000ml蒸馏水，pH7. 0~7. 2。所述SM液体培养基的组成为：KH2P040 . 4g， K2HP042g，MgS04 ? 7H20 0? 2g，CaCl20. lg，Fe2S045mg，H3B032mg，ZnS0 4. 7H20 5mg，Na2Mo04lmg， MnS043mg，CoS0 4lmg，CuS04lmg，NiS04lmg，pH6. 4 ;所述 SMA 液体培养基为在 SM 液体培养基 中加入1-氨基环丙烷-1-羧酸，使其终浓度为3mmol/L。
[0037] 上述大豆根瘤内生菌DEntl302在制备吲哚乙酸方面的应用。在改良的刚果红液 体培养基中培养上述大豆根瘤内生菌DEntl302,收集发酵产物，即得吲哚乙酸。所述改良的 刚果红液体培养基的组成为：MgS0 4 ? 7H20 0? 2g，Na C1 0? lg，K2HP04 ? 3H20g，酵母膏1. 0g， 甘露醇1(^，0.25%刚果红101^，硝酸铵18，色氨酸0.18，蒸馏水10001^4117.0。
[0038] 本发明大豆根瘤内生菌DEnetl302,为分离自河南大豆根瘤内微环境的 Enterobacter ludwigii类菌株，具有溶解无机磷的能力，磷是植物生长所需的最重要的营 养元素之一，自然界中大部分磷是以不能被植物直接吸收的有机态或无机态难溶磷形式存 在。具有溶磷能力的内生菌在宿主根际将不溶性磷转化为可被植物吸收利用的磷形式，对 于增加土壤中有效磷的含量，提高小麦等农作物的产量，减少田间化学磷肥的施用量，保护 田间的生态环境；能够产生果胶酶和纤维素酶，定殖在宿主植物体内，表现为较强的定殖能 力，进入宿主植物组织内部，诱导宿主抗性，抑制和防治植物病原真菌菌丝的生长和发展， 促进植物健康生长；具有产生ACC脱氨酶的能力，将ACC分解成a -酮丁酸和NH3，降低植物 细胞合成乙烯的水平，减轻乙烯对幼苗生长的影响；具有代谢产生吲哚乙酸的能力，能够促 进宿主植物的根系细胞伸长和发育。本发明的大豆根瘤内生菌DEntl302对于促进小麦幼 苗生长具有突出的效果。
[0039] 本发明大豆根瘤内生菌的制备方法，采用牛肉膏蛋白胨培养基，并采用单菌落划 线分离纯化培养的方式，分离得到大豆根瘤内生菌，操作简便，易于控制，纯度高。
[0040] 本发明促小麦幼苗生长的菌剂，采用本发明的大豆根瘤内生菌的菌悬液与无菌水 复配，并通过限定其复配的比例，使制备的菌剂具有促小麦幼苗生长的作用。
【附图说明】
[0041] 图1实施例1制备的大豆根瘤内生菌DEntl302在牛肉膏蛋白胨培养基上形成的 菌落；
[0042] 图2实施例1制备的大豆根瘤内生菌DEntl302经革兰氏染色后的菌体；
[0043] 图3实施例1制备的大豆根瘤内生菌DEntl302在牛肉膏蛋白胨液体培养基中的 生长曲线；
[0044] 图4实施例1制备的大豆根瘤内生菌DEntl302对液体无机磷的溶解量；
[0045] 图5实施例1制备的大豆根瘤内生菌DEntl302产生纤维素酶；
[0046] 图6实施例1制备的大豆根瘤内生菌DEntl302产生果胶酶；
[0047] 图7牛血清白蛋白与OD值间的线性关系；
[0048] 图8 a - 丁酮酸浓度和OD值间的线性关系；
[0049] 图9吲哚乙酸的浓度与OD值间的线性关系；
[0050] 图10接种实施例2、实施例3、实施例7和无菌水培养的小麦幼苗的生长情况；图 中CK为无菌水。
【具体实施方式】
[0051] 下面结合具体实施例对本发明作进一步详细说明，但不构成对本发明的任何限 制。
[0052] 实施例1
[0053] 本实施例大豆根瘤内生菌DEntl302,其保藏编号为CCTCC NO :M2013621。
[0054] 本实施例大豆根瘤内生菌DEntl302的制备方法，具体操作步骤为：
[0055] 1)大豆根瘤表面消毒处理：从河南省种植的大豆中选择开花期的大豆植株，采 集健康、饱满、粉红色根瘤，用无菌水清洗后，经无水乙醇处理25s，有效率含量3 % (m/v) NaCIO处理4min，再用无菌水洗涤6次，并保留最后一次洗涤的水，涂布在牛肉膏蛋白胨培 养基上，培养后观察培养基上无菌落产生；
[0056] 2)用无菌镊子在无菌条件下压迫步骤1)表面消毒后的大豆根瘤，挤压出汁液涂 抹在牛肉膏蛋白胨培养基平板上，28°C恒温倒置培养5天，把形成的单菌落再经转移到牛 肉膏蛋白胨培养基上划线分离，经染色、镜检获得菌体大小均一、形状一致的菌株，即得所 述的大豆根瘤内生菌DEntl302。
[0057] 本实施例大豆根瘤内生菌的保藏方式：将步骤2)分离出的菌株对应的单菌落接 种到牛肉膏蛋白胨的固体斜面培养基上，28°C培养3~5天，待管内菌苔饱满，4°C低温保藏 7~30天；
[0058] 或在试管斜面内加入体积百分含量为30%的甘油刮下菌苔制成菌悬液，移到甘油 管-80 °C低温冷冻保藏1~10年。
[0059] 其中牛肉膏蛋白胨培养基的组成为：牛肉膏2~4g，蛋白胨8~12g，NaCl 3~ 6g，琼脂 15 ~20g，水 1000ml。
[0060] 实施例2
[0061] 本实施例促小麦幼苗生长的菌剂，其制备方法的具体操作步骤为：
[0062] 1)将实施例1制备的大豆根瘤内生菌DEntl302菌株在YM液体培养基中29°C条 件下恒温130rpm震荡培养4天得混合液，将混合液在8000rpm冷冻离心10min，收集沉淀菌 体，用无菌水清洗菌体后，加入无菌水制成浓度为l〇 8CFU/ml的菌悬液；
[0063] 2)步骤1)制备的菌悬液与无菌水按照1 :1的体积比复配，即得所述的促小麦幼 苗生长的菌剂。
[0064] 实施例3
[0065] 本实施例促小麦幼苗生长的菌剂，其制备方法的具体操作步骤为：
[0066] 1)将实施例1制备的大豆根瘤内生菌DEntl302菌株在YM液体培养基中28°C条 件下恒温130rpm震荡培养3天得混合液，将混合液在8000rpm冷冻离心10min，收集沉淀菌 体，用无菌水清洗菌体后，加入无菌水制成浓度为l〇 8CFU/ml的菌悬液；
[0067] 2)步骤1)制备的菌悬液与无菌水按照1 :2的体积比复配，即得所述的促小麦幼 苗生长的菌剂。
[0068] 实施例4
[0069] 实施例3本实施例促小麦幼苗生长的菌剂，其制备方法的具体操作步骤为：
[0070] 1)将实施例1制备的大豆根瘤内生菌DEntl302菌株在YM液体培养基中30°C条 件下恒温130rpm震荡培养4天得混合液，将混合液在8000rpm冷冻离心10min，收集沉淀菌 体，用无菌水清洗菌体后，加入无菌水制成浓度为l〇 8CFU/ml的菌悬液；
[0071] 2)步骤1)制备的菌悬液与无菌水按照1 :3的体积比复配，即得所述的促小麦幼 苗生长的菌剂。
[0072] 实施例5
[0073] 实施例3本实施例促小麦幼苗生长的菌剂，其制备方法的具体操作步骤为：
[0074] 1)将实施例1制备的大豆根瘤内生菌DEntl302菌株在YM液体培养基中29°C条 件下恒温130rpm震荡培养4天得混合液，将混合液在8000r