装置和培养基进口 -出口装置。在这两种情况中，在【具体实施方式】中进口 -出口装置均为阀。在图1的【具体实施方式】中，培养基通过阀(28)进入过滤系统(25)和通过阀(32)退出过滤系统；液体依次通过阀(29)进入过滤系统(25)和通过阀(30)退出过滤系统。
[0107]过滤系统(25)内部包括过滤器(31)，在具体的实施方式中，过滤器(31)包括振动装置(37)。过滤器(31)使悬浮细胞保留在培养基中；在相应的【具体实施方式】中，通过由过滤器(31)中振动装置(37)引起的移动使细胞与过滤器(31)分离。在【具体实施方式】中，通过阀(29)进入过滤系统(25)的液体收集细胞以使细胞在液体中悬浮；在该【具体实施方式】中，液体一在【具体实施方式】中其为缓冲液一通过阀(30)退出过滤系统(25)。因此，具有特定细胞浓度(浓度C)的液体在所述阀(30)的出口被发现。在图1的【具体实施方式】中，培养基通过阀(32)退出过滤系统(25)，而没有悬浮细胞。
[0108]在【具体实施方式】中，系统包括灭菌系统(33)。具体地，在图1所示的【具体实施方式】中，灭菌系统(33)包括用于包含灭菌物质的室(34)、用于通过运输导管(9、10)抽送灭菌物质的泵(35)和调节灭菌物质进入到系统其余部分的阀(36)。
【主权项】
1.细胞培养方法，特征在于其在系统中实施，所述系统包括: ?至少一个适于培养细胞的设备(I)，所述设备(I)包括: V至少一个生物反应器室(2)，其包括至少一个适于细胞培养的内表面(3、22、39)， V液体入口 -出口装置(13、14、15、17、18、19、23、24)，和 V与所述至少一个生物反应器室(2)连接的至少一个前室(4)，其包括用于引入细胞的入口(5)， 并且特征在于，其包括下列步骤: a)在最初的物化条件下以预定量的液体用培养基填充所述前室(4)， b)通过所述细胞入口(5)将细胞引入所述前室(4)， c)将具有所述细胞的所述培养基传送至所述至少一个生物反应器室(2)， d)使细胞沉降并且是它们静置预定的时间，直到它们附着到所述至少一个适于细胞培养的内表面(3、22、39)，所述内表面的物化性质使其以在一个或多个最初的物化条件下有利于细胞附着的方式起作用， e)使培养基循环通过所述设备(I)和所述液体入口-出口装置(13、14、15、17、18、19、23,24)， f)一旦获得细胞的目标数量或者在所述至少一个用于培养的生物反应器室(2、2’、2”)中达到临界密度，则将所述培养基的至少一个最初物化条件改变为更改的物化条件，在更改的物化条件下细胞附着被阻止，以便在更改的物化条件下使所述设备(I)内剩余的量位于已经用于细胞扩增的所述生物反应器室(2、2 ’、2 ”)， g)将具有所述细胞的所述培养基传送至所述前室(4)，和 如果已经达到所述细胞的目标数量，则通过出口装置(24)将具有所述悬浮细胞的所述培养基取出，或者 如果没有达到所述细胞的目标数量，则将额外的培养基引入所述前室并从步骤c)开始重复所述步骤。
2.根据权利要求1所述的方法，特征在于所述至少一个被改变的最初物化条件为温度。
3.根据前述权利要求中任一项所述的方法，特征在于，其包括通过适于控制所述设备(I)中进行的所述细胞培养的至少一个控制单元(20)来自动控制所述细胞的数量和/或密度。
4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，特征在于所述细胞数量和/或密度的控制是通过包括光学控制系统(21)的控制单元(20)和通过包括在所述设备中的透明表面(22)进行，所述细胞数量的控制包括步骤: ?一旦所述培养基已经被传送至所述至少一个生物反应器室(2)，则定位所述设备(I)以使具有所述悬浮细胞的所述培养基位于所述透明表面(22)上，并且该透明表面(22)反过来安置在用于控制所述细胞数量和/或密度的所述光学控制系统(21)上。
5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，特征在于，其包括通过与所述系统连接的灭菌系统(33)将所述系统灭菌的步骤。
6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，特征在于前室(4)和所述至少一个生物反应器室(2、2’、2”)之间的传递是通过压力进行的，以使所述培养基通过多个阀(14、18、 23) ο
7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，特征在于，在通过所述流体入口-出口装置(24)将具有所述悬浮细胞的所述培养基取出之后，所述细胞通过以下方法从所述培养基分呙: ?液体培养基，其包含在室(26)中， ?至少一个连接至所述室(26)的过滤系统(25)，其包括: V液体培养基入口 -出口装置(29)， V培养基入口 -出口装置(28、32)， V至少一个过滤器(31)， 并且特征在于实施以下步骤: ?将具有所述细胞的所述培养基引入所述过滤系统系统(25)， ?用所述至少一个过滤器(31)保留所述细胞， ?通过所述液体培养基入口 -出口装置(29)将液体培养基引入所述过滤系统(25)， 以使所述细胞从所述培养基分离。
8.根据权利要求7所述的方法，特征在于通过包括在所述过滤器中的至少一个振动装置(37)摇动所述过滤器，使所述细胞从所述过滤器分离。
9.根据权利要求任一项所述的方法，特征在于通过包括多个可拆卸设备的系统制备不同类型的培养物，这些设备中的每一个都使用至少一个适于待制备培养物类型的内表面。
10.细胞培养系统，其包括: ?至少一个适于培养细胞的设备(I)，所述设备(I)包括: V至少一个生物反应器室(2)，其包括至少一个适于细胞培养的内表面(3、22、39)， V 流体入口 -出 口装置(13、14、15、17、18、19、23、24)，和 v至少一个前室(4)，其与所述至少一个生物反应器室(2)连接，包括用于引入细胞的入口(5)0
11.根据权利要求10所述的系统，特征在于，其包括控制单元(20)，所述控制单元(20)适合于进行根据权利要求1所述的控制细胞培养的控制方法。
12.根据权利要求11所述的系统，特征在于，所述设备的所述内表面(3)中的至少一个是透明的，其形成透明表面(22)，并且所述控制单元(20)包括至少一个光学控制系统(21)以使根据权利要求3所述的控制方法进行实施。
13.根据权利要求10至12任一项所述的系统，特征在于，其包括至少一个灭菌系统(33)。
14.根据权利要求10至13任一项所述的系统，特征在于，其包括: ?用于包含液体培养基(26)的至少一个室， ?至少一个过滤系统(25)，其包括: V液体培养基入口 -出口装置(29)， V培养基入口 -出口装置(28、32)， V至少一个过滤器(31)， ?在所述用于包含液体培养基的室(26)和所述至少一个过滤系统(25)之间的用于运输液体培养基的装置(27)。
15.根据权利要求10至14任一项所述的系统，特征在于，其包括从所述-前室(4)到所述生物反应器室(2)的入口 -出口阀(14)和/或气体入口-出口阀(15、19)。
16.根据权利要求10至15任一项所述的系统，特征在于，其包括用于在至少一个生物反应器室⑵中细胞附着(39)的额外表面，优选蛋白质、肽或生物活性合成分子。
17.根据权利要求10至16任一项所述的系统，特征在于所述适合于细胞培养的至少一个内表面(22、3、39)用凝胶覆盖。
18.根据权利要求17所述的系统，特征在于所述凝胶为聚(η-异丙基丙烯酰胺)水凝胶。
19.根据权利要求14至18任一项所述的系统，特征在于所述过滤系统(25)包括振动装置(37) ο
20.根据前述权利要求中任一项所述的系统，特征在于所述设备(I)是可拆卸的。
【专利摘要】本发明包括用于细胞培养的自动化设备。本发明涉及细胞培养方法和系统，其允许以控制的方式来更改培养物中细胞的密度和数量。具体地，本发明涉及一种迭代方法，其迭代步骤的数量根据培养期间所必需的对细胞密度和数量的需求而被更改。
【IPC分类】C12M3-04
【公开号】CN104704107
【申请号】CN201380042902
【发明人】D·霍尔纳托马斯, M·科斯塔费兰多
【申请人】阿格拉瑞斯细胞公司
【公开日】2015年6月10日
【申请日】2013年6月13日
【公告号】CA2876523A1, EP2861713A1, US20150159128, WO2013186318A1