用于从乳纯化生长因子的改进方法及其产品的制作方法_2

文档序号:8417065阅读:来源:国知局
生物(例如乳清蛋白浓缩物或乳清分离蛋白隔离溢流物)和初乳。它还包括乳级分,例如已经历纯化步骤如阳离子交换色谱法的级分。这样的级分包括乳碱性蛋白级分和含有乳铁蛋白的级分。
[0032]对本领域技术人员将是显而易见的是,乳可获自任何泌乳动物,例如反刍动物如牛、绵羊、水牛、山羊和鹿,包括灵长类如人的非反刍动物以及单胃动物如猪。优选地,源自全牛乳的脱脂乳被用在本发明的方法中。
[0033]在第一方面的方法中使用的过滤包括膜过滤。在一个实施方案中,膜具有25kD、30kD、35kD、40kD、45kD、50kD、55kD、60kD、65kD、70kD 或 75kD 的尺寸截断值。截断值优选为30kD或更高和50kD或更低。
[0034]过滤可以包括超滤或渗滤或两者。
[0035]在第一方面的方法中使用的盐处理包括加入足量的盐,使所述乳或乳铁蛋白的离子强度为至少0.2M(1.1% )NaCl或等同物。在一个实施方案中,将离子强度维持在至少这个水平一段为获得要求的渗透物中的RNA酶和/或生长因子的浓度的增加所需的期限。该期限可以是至少10分钟、15分钟、20分钟、30分钟、45分钟、I小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、11小时、12小时或更长,这取决于原料和所需的浓度或纯度的增加。
[0036]在可选形式中,在第一方面的方法中使用的盐处理包括加入足量的盐,使得乳或乳铁蛋白的电导率为至少20mS。在一个实施方案中,在整个过滤步骤期间将电导率至少维持在这个水平。
[0037]通常,乳或乳铁蛋白将具有基本低于0.2M NaCl或等同物的离子强度或小于20mS的电导率,因此盐处理包括加入盐以将乳或乳铁蛋白的离子强度或导电率增加至所需水平。然而,在某些情况下,例如当乳是已经历阳离子交换的级分时,乳将具有可为至少0.2MNaCl或等同物的离子强度或电导率将为20mS或更大。通常,对来自阳离子交换的级分进行处理以去除盐(例如用水渗滤)。然而,根据第一方面的方法,盐处理是以便在过滤步骤期间将乳的离子强度维持在至少0.2M(1.1% )NaCl或等同物或在过滤步骤期间将乳的电导率维持在至少20mS。
[0038]如本文使用的,“电导率”是材料传导电流的能力。通常使用电导率计例如HachSens1n 5测量电导率。本领域技术人员将知道合适的测量电导率的可选装置。在钠离子浓度和电导率之间存在大致的线性关系。
[0039]对盐处理中使用的盐没有限制,而且针对NaCl的替代物将是本领域技术人员已知的。例如,可以使用任何可溶性无毒缓冲液,例如氯化物、柠檬酸、磷酸、乙酸、硫酸、碳酸氢、氢氧化物、咪唑、马来酸的可溶性钠盐、钾盐、钙盐、镁盐或锂盐。还可使用合成的两性离子缓冲液,例如Trizma、HEPES或甘氨酸。
[0040]为了实现RNA酶和生长因子与乳铁蛋白的分离,在过滤步骤之前的乳或乳铁蛋白的离子强度必须为至少0.2M(1.1% )NaCl或等同物。在一个实施方案中,通过加入1.1%的盐、1.5%的盐、2%的盐、2.5%的盐、3%的盐、3.5%的盐、4%的盐、4.5%的盐、5%的盐、
5.5%的盐、6%的盐或更多来增加乳的离子强度。在另一个实施方案中,乳或乳铁蛋白的离子强度被增加至 0.2Μ、0.22Μ、0.24Μ、0.26Μ、0.28Μ、0.30Μ、0.32Μ、0.34Μ、0.36Μ、0.38Μ、
0.40Μ、0.42Μ、0.44Μ、0.46Μ、0.48Μ、0.50Μ、0.6Μ、0.7Μ、0.8Μ、0.9Μ、1.0M NaCl 或等同物或更高。在另一个实施方案中,电导率是 20mS、30mS、40mS、50mS、60mS、70mS、80mS、90mS、100mS、110mS、120mS 或更大。
[0041]在优选的实施方案中,盐处理包括在过滤步骤之前将0.2-0.5M NaCl或KCl加入至乳或乳铁蛋白。
[0042]在一个实施方案中,盐处理在4-10度下进行。
[0043]在一个实施方案中,盐处理在10-30度下进行。
[0044]在一个实施方案中,盐处理在30-50度下进行。
[0045]在一个实施方案中,盐处理在50-70度下进行。
[0046]在一个实施方案中,盐处理在低于20度下进行。
[0047]在另一个实施方案中,因为在超过50度的温度下大肠菌的形成减少,所以在50度或更高下进行盐处理。然而,由于乳铁蛋白在大约70度变性,因此在60度或更高下进行盐处理可能会导致产率下降。
[0048]在一个实施方案中,过滤步骤在4-10度下进行。
[0049]在一个实施方案中,过滤步骤在10-30度下进行。
[0050]在一个实施方案中,过滤步骤在30-50度下进行。
[0051]在一个实施方案中,过滤步骤在50-70度下进行。
[0052]在一个实施方案中,盐处理在大气压力下进行。
[0053]在一个实施方案中,过滤步骤在每膜小于2.5巴、更可能小于2.0巴、更可能再小于1.5巴、但理想1.0-1.4巴的跨膜压力下进行,虽然0.0-1.0巴的压力也可以合意地运行,但具有较低的跨膜通量。
[0054]“治疗(Treating) ”或“治疗(treatment) ”是指治疗性治疗和预防性或防范性措施,其中目的是预防、改善、减少或减缓(减轻)或改进病状、疾病或病症。
[0055]如本文所用的“治疗(Treating) ”或“治疗(treatment) ”涵盖对脊椎动物、哺乳动物,特别是人类中的病状的任何治疗或预防。
[0056]“预防(Preventing),,、“预防(prevent1n),,、“预防的(preventative),,或“预防性的(prophylactic) ”是指防止发生,或阻碍、抵御或防止包括异常或症状在内的病状、疾病、病症或表型。需要预防的受试者可能容易形成病状。
[0057]术语“改善(amel1rate) ”或“改善(amel1rat1n) ”是指包括异常或症状在内的病状、疾病、病症或表型的降低、减少或消除。需要治疗的受试者可能已经具有病状,或可能容易具有病状,或可能处于待被预防的病状中。
[0058]如本文所用的术语“维持”是指延续治疗前水平的状态。
[0059]第二方面的RNA酶或生长因子可以作为药物、兽药或营养素组合物或作为食品提供。
[0060]药物组合物是一种适于施用给人类的组合物。兽药组合物是指一种适于施用给动物的组合物。通常这样的组合物将含有纯化的RNA酶或生长因子或至少组合物的所有组分将是可验证的。
[0061]药物或兽药组合物可包含一种或多种载体和任选的其他治疗剂。每种载体、稀释剂、佐剂和/或赋形剂可以是“可接受的”。
[0062]“可接受的”是指其在生物学或其他方面不是不适宜的材料,S卩,在不引起任何不希望的生物作用或与包含它的药物或兽药组合物中的任何其他组分的有害方式的相互作用下,可以将材料连同所选的活性剂一起施用给个体。同理,如本文提供的新型化合物的“可接受的”盐或酯是其在生物学或其他方面不是不适宜的盐或酯。
[0063]如本文所使用的,“载体”是用于将试剂递送至受试者的可接受的溶剂、悬浮剂或媒介物。载体可以是液体或固体,并采用考虑中的计划施用方式选择。每种载体必须是在生物学或其他方面不是不适宜的意义上的“可接受的”,即载体可以在不引起任何或实质性的不良反应下连同试剂一起施用给受试者。
[0064]药物或兽药组合物可以包含常规的无毒可接受的载体、佐剂和媒介物的制剂口服地、局部地或胃肠外施用。
[0065]本文所用的术语胃肠外包括静脉内、动脉内、腹膜内、肌内、皮下、结膜下、腔内、经皮和皮下注射、用于施用至肺或鼻腔的气雾剂或通过由例如渗透泵输注的施用。
[0066]药物或兽药组合物可以作为片剂、水性或油性悬浮剂、锭剂(lozenge)、口含片(troche)、粉剂、颗粒剂、乳剂、胶囊剂、糖浆剂或酏剂口服地施用。用于口服使用的组合物可以包含一种或多种选自甜味剂、调味
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