一种自体或异体红细胞培养基的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种用于临床细菌分离培养的制备方法，尤其涉及一种用于临床细菌 分离的自体或异体红细胞培养基的制备方法。
【背景技术】
[0002] 目前，用于临床细菌分离的血培养基多采用羊血培养基以及传统的分离方法，这 些方法对于临床如急待选择敏感抗生素的人群往往跟不上临床感染人群细菌分离的要求， 而且分离速度太慢，取得的信息常因过时而失去作用，达不到临床理想病原体快速分离鉴 定及敏感药物选择的效果，而且常规羊血的来源不足。
[0003] 上述可知，有必要对现有技术作进一步改进。
【发明内容】
[0004] 针对以上问题，本发明提供了一种操作流程简单，替代了常规羊血培养基，细菌分 离及药物敏感实验快速准确，提高了敏感药物选择的准确度，克服了传统细菌分离速度慢 和敏感药物选择效果差等缺陷的自体或异体红细胞培养基的制备方法。
[0005] 本发明是通过以下技术方案实现的：
[0006] 上述的一种自体或异体红细胞培养基的制备方法，其包括以下步骤：（1)采集自 体或异体静脉血，然后无菌分离弃去血浆，将得到的红细胞，经磷酸盐PBS洗涤，再经离心 分离后，再无菌弃去上清液后，得到自体红细胞悬液；（2)取质量比为5%~25%的牛肉浸 汁粉、38%~58%的水解酪蛋白、1 %~1. 5%的淀粉、15%~35%的琼脂混合后，加入磷酸 盐PBS缓冲液溶解，调成PH7. 4-7. 6的水解液，经灭菌处理后，制得水解酪蛋白琼脂；（3)取 上述步骤（2)灭菌处理后的水解酪蛋白琼脂并冷却至45°C~55°C，与上述步骤（1)制备好 的自体红细胞悬液按体积比5~20 :1混合均匀，无菌制备自体红细胞培养基平皿。
[0007] 所述自体或异体红细胞培养基的制备方法，其中：所述步骤（1)中红细胞是由人 机体静脉采集自体或异体静脉血，然后经GMP环境于400-1000r/min无菌分离8~15min 后，弃去血浆，得到红细胞。
[0008] 所述自体或异体红细胞培养基的制备方法，其中：所述步骤（1)中是将得到的红 细胞经PH7. 4-7. 6的磷酸盐PBS洗涤2~3次，依次于500r/min离心至多15min后，弃去 上清液后得到自体红细胞悬液。
[0009] 所述自体或异体红细胞培养基的制备方法，其中：所述步骤⑵是将调成 PH7. 4-7. 6的水解液，经121°C，15镑高压，灭菌处理30min后，制得水解酪蛋白琼脂。
[0010] 所述自体或异体红细胞培养基的制备方法，其中：所述步骤（2)中加入的磷酸盐 PBS缓冲液的量是牛肉浸汁粉、水解酪蛋白、淀粉、琼脂四种组分总重量的20~28倍。 [0011] 所述自体或异体红细胞培养基的制备方法，其中：所述步骤（3)是在GMP环境下制 备无菌自体红细胞培养基平皿。
[0012] 所述自体或异体红细胞培养基的制备方法，其中：所述制备方法可以得到自体或 异体红细胞悬液以及异体A、B、0、AB、ABO混合不同的5种不同的血型红细胞悬液。
[0013] 有益效果：
[0014] 本发明自体或异体红细胞培养基的制备方法操作流程简单，替代了常规羊血培养 基，细菌分离及药物敏感实验快速准确，克服了传统细菌分离速度慢和敏感药物选择效果 差等缺陷，具体优点体现在以下几点：
[0015] (1)本发明制备的自体或异体红细胞培养基替代羊血培养基，解决了常规羊血来 源不足的问题；
[0016] (2)大幅度缩短了细菌分离过程，由原来的18~72小时缩短到10~16小时；
[0017] (3)提高了敏感药物选择的准确度。
【具体实施方式】
[0018] 本发明自体或异体红细胞培养基的制备方法，具体包括以下步骤：
[0019] SOKK由人机体静脉采集自体或异体静脉血，然后经GMP环境于400-1000r/min无 菌分离8~15min后，弃去血浆，将得到的红细胞，经PH7. 4-7. 6的磷酸盐PBS洗涤2~3 次，每次500r/min，离心至多8~15min后，再无菌弃去上清液，即得自体红细胞悬液；
[0020] S020、取重量比为5 %~25 %的牛肉浸汁粉、38 %~58 %的水解酪蛋白、1 %~ 1. 5 %的淀粉、15 %~35 %的琼脂混合后，加入磷酸盐PBS缓冲液溶解，调成PH7. 4-7. 6的水 解液，再经121°C，15镑高压下，灭菌处理30min后，制得水解酪蛋白琼脂；
[0021] S030、取上述步骤S020灭菌处理后的水解酪蛋白琼脂并冷却至45°C~55°C，与上 述步骤SOlO制备好的自体红细胞悬液按体积比5~20 :1混合均匀，在GMP环境下制备无 菌自体红细胞培养基平皿。
[0022] 其中，加入的磷酸盐PBS缓冲液的量是牛肉浸汁粉、水解酪蛋白、淀粉、琼脂四种 组分总重量的20~28倍。同时，本发明的制备方法可以得到自体或异体红细胞悬液及异 体A、B、0、AB、ABO混合不同的5种不同的血型红细胞悬液。
[0023] 下面结合具体实施例对本发明作进一步说明：
[0024] 实施例1
[0025] 本发明实施例1的自体或异体红细胞培养基的制备方法，具体包括以下步骤：
[0026] S110、采集患者自体静脉血10ml，无菌移至50ml锥形离心管中，在GMP环境以 400-1000r/min离心8~15min后，无菌手法弃去血浆，后以PH7. 4的磷酸盐PBS缓冲液洗 绦2~3次，以每次500r/min，离心8min，再无菌弃去上清液，即得自体红细胞悬液；
[0027] S120、取牛肉浸汁粉5g，水解酪蛋白17. 5g，淀粉1.5%，琼脂12. 5%并加人PH7.4 的磷酸盐PBSlOOOml，调PH7. 4,再经121 °C，15镑高压，灭菌处理30min后，得到水解酪蛋白 琼脂；
[0028] S130、取100mL已灭菌处理后水解酪蛋白琼脂，冷却至40°C，加入制备好的自体红 细胞悬液20ml，缓缓加入顺时方向摇匀即得自体红细胞培养基，按9cm直径，每平皿25ml缓 缓倾斜注入制备培养基，制得无菌自体红细胞培养基平皿。
[0029] 实施例2
[0030] 本发明实施例2的自体或异体红细胞培养基的制备方法，具体包括以下步骤：
[0031] S210、取20ml异体静脉血，无菌移至50ml锥形离心管中，在GMP环境以 400_1000r/min离心8~15min后，无菌手法弃去血衆，后以PH7. 6的磷酸盐PBS缓冲液洗 涤2~3次，每次500r/min，离心8min，再无菌弃去上清液，即得异体红细胞悬液；
[0032] S220、取牛肉浸汁粉5g，水解酪蛋白38g，淀粉lg，琼脂15g