g/L，pH为7.0; 配制固体培养基时添加15g/L的琼脂粉。
[0021] 培养液成份为：葡萄糖44g/L，木糖8g/L，玉米胚芽粉12g/L，酵母提取物5g/ L, (NH4)2HPO4 15g/L,KH2PO4 7.5g/L.MgSO4 . 7H20 0.8g/L,NaCl0.1g/L;pH 为 7. 0〇
[0022] 湿酵母细胞制备过程如下：近平滑假丝酵母ATCC96041经斜面、摇瓶培养，得到 种子液。5L发酵罐加入培养液，121°C高压灭菌30分钟，冷却至31°C，将近平滑假丝酵母 种子液接种至发酵罐，接种比例为6. 5%，通气比为IVAV分钟），31°C培养42小时，用过滤 式离心机离心得到湿酵母细胞，用作生物催化反应催化剂。
[0023] 生物催化转化：5L底部通气搅拌反应器中加入磷酸盐缓冲液，pH为7. 0,加入底 物3-苯并呋喃酮，使浓度为90g/L，麦芽浸膏22g，直链的10碳醇聚氧乙烯醚为8g/L，葡 萄糖23g/L、木糖10g/L、异丙醇8%V/V(体积浓度），121°C高压灭菌30分钟；冷却至29°C 时，加入湿酵母细胞使浓度为71g/L，通气比为0. 16V/ (V分钟)，进行生物催化反应，反应 时间为64小时；反应结束后，滤出细胞，用乙酸乙酯萃取反应液，蒸出乙酸乙酯，得到产物 (R) -3-苯并呋喃醇，反应转化率98 %，产品收率96 %，对映体过量率99 %。
[0024] 实施例3 种子培养基成份为：酵母提取物10g/L，葡萄糖20g/L，蛋白胨20g/L，pH为7.0; 配制固体培养基时添加15g/L的琼脂粉。
[0025] 培养液成份为：葡萄糖40g/L，木糖7. 5g/L，玉米胚芽粉11g/L，酵母提取物 4. 5g/L, (NH4)2HPO4 13g/L,KH2PO4 7g/L.MgSO4 . 7H20 0. 75g/L,NaCl0. 09g/ L;pH为 7.0〇
[0026] 湿酵母细胞制备过程如下：近平滑假丝酵母ATCC96041经斜面、摇瓶培养，得到 种子液。IOL发酵罐加入培养液，121°C高压灭菌30分钟，冷却至30°C，将近平滑假丝酵母 种子液接种至发酵罐，接种比例为6. 3%，通气比为0. 8VAV分钟），30°C培养47小时，用过 滤式离心机离心得到湿酵母细胞，用作生物催化反应催化剂。
[0027] 生物催化转化：IOL底部通气搅拌反应器中加入磷酸盐缓冲液，pH为7. 0,加入底 物3-苯并呋喃酮，使浓度为85g/L，麦芽浸膏22g，直链的10碳醇聚氧乙烯醚为6-8g/L， 葡萄糖21g/L、木糖13g/L、异丙醇9%V/V(体积浓度），121°C高压灭菌30分钟；冷却至30°C 时，加入湿酵母细胞使浓度为70g/L，通气比为0. 16V/ (V分钟)，进行生物催化反应，反应 时间为62小时；反应结束后，滤出细胞，用乙酸乙酯萃取反应液，蒸出乙酸乙酯，得到产物 (R) -3-苯并呋喃醇，反应转化率98. 5%，产品收率96. 5%，对映体过量率99%。
[0028] 实施例4 种子培养基成份为：酵母提取物10g/L，葡萄糖20g/L，蛋白胨20g/L，pH为7.0; 配制固体培养基时添加15g/L的琼脂粉。
[0029] 培养液成份为：葡萄糖42g/L，木糖8g/L，玉米胚芽粉12g/L，酵母提取物5g/ L, (NH4)2HPO4 15g/L,KH2PO4 7.5g/L.MgSO4 . 7H20 0.75g/L,NaCl0.1g/L;pH 为 7. 0〇
[0030] 湿酵母细胞制备过程如下：近平滑假丝酵母ATCC96041经斜面、摇瓶培养，得到 种子液。IOL发酵罐加入培养液，121°C高压灭菌30分钟，冷却至31°C，将近平滑假丝酵母 种子液接种至发酵罐，接种比例为6. 5 %，通气比为0. 9VAV分钟），31°C培养46小时，用过 滤式离心机离心得到湿酵母细胞，用作生物催化反应催化剂。
[0031] 生物催化转化：20L底部通气搅拌反应器中加入磷酸盐缓冲液，pH为7. 0,加入底 物3-苯并呋喃酮，使浓度为88g/L，麦芽浸膏22 g，直链的10碳醇聚氧乙烯醚为7g/L，葡 萄糖22g/L、木糖12g/L、异丙醇9. 5%V/V(体积浓度），121°C高压灭菌30分钟；冷却至31°C 时，加入湿酵母细胞使浓度为68g/L，通气比为0. 15V/ (V分钟)，进行生物催化反应，反应 时间为61小时；反应结束后，滤出细胞，用乙酸乙酯萃取反应液，蒸出乙酸乙酯，得到产物 (R) -3-苯并呋喃醇，反应转化率99%，产品收率96. 5%，对映体过量率99%。
【主权项】
1. 一种近平滑假丝酵母细胞生物催化制备（R)-3-苯并呋喃醇的方法，其特征在于反 应罐中加入磷酸盐缓冲液，pH为7. 0,加入底物3-苯并呋喃酮，使底物3-苯并呋喃酮添加 量为80-90 g/L，麦芽浸膏22-26 g，直链的10碳醇聚氧乙烯醚为6-8g/L，葡萄糖20-23g/ L、木糖10-14g/L、异丙醇8-10%V/V，121°C高压灭菌30分钟；冷却至29-31°C时，加入湿酵 母细胞使浓度为67-71g/L，通气比为0. 15-0. 16V/ (V分钟)，进行生物催化反应，反应时 间为59-64小时；反应结束后，滤出细胞，用乙酸乙酯萃取反应液，蒸出乙酸乙酯，得到产物 (R) -3-苯并呋喃醇，反应转化率98-99 %，产品收率96-97 %，对映体过量率98. 5-99。2. 权利要求1所述的方法，其特征在于湿酵母细胞制备过程如下：近平滑假丝酵母 ATCC 96041，经斜面、摇瓶、种子罐培养得到种子液；发酵罐加入培养液，121°C高压灭菌 30分钟，冷却至29-31°C，将近平滑假丝酵母种子液接种至发酵罐，接种比例为6-6. 5%，通 气比为0. 5-1V/ (V分钟），29-31°C培养42-48小时，用过滤式离心机离心得到湿酵母细胞， 用作生物催化反应催化剂；发酵罐中培养液成份为：葡萄糖37-44 g/L，木糖7-8g/L，玉 米胚芽粉 10-12 g/L，酵母提取物 4-5 g/L，（NH4) 2H PO4 12-15 g/L，KH2PO4 6.5-7.5 g/ L. MgSO4 .7H20 0.7-0.8 g/L, NaCl 0.08-0.1 g/L; pH 值 7.0。
【专利摘要】一种近平滑假丝酵母细胞生物催化制备(R)-3-苯并呋喃醇的方法，反应罐中加入磷酸盐缓冲液，用近平滑假丝酵母细胞进行生物催化反应，产品收率高，对映体过量率高，解决了现有方法生产的困难。
【IPC分类】C12P17/04, C12R1/72
【公开号】CN105087706
【申请号】CN201510561143
【发明人】张媛媛, 郑振坤, 刘均洪
【申请人】青岛科技大学
【公开日】2015年11月25日
【申请日】2015年9月7日