MHz) 8 7. 851 (m, 4H), 7. 677 (s, 2H), 7. 148 (s, 2H), 4. 194 (broad, 4H), 3. 67 6 (broad, 12H), 3. 592 (broad, 4H), 3. 451 (broad, 4H), 3. 322 (broad, 12H), 2. 914 (broad, 8H) ，2. 491 (broad, 4H) ;13C NMR(d-CDCl3, 100MHz) S 151. 22, 149. 17, 147. 37, 143. 66, 139. 32, 1 36. 45, 134. 73, 131. 28, 130. 18, 129. 93, 123. 17, 122. 67, 121. 93, 121. 43, 118. 75, 112. 37, 7 2. 57, 71. 86, 70. 69, 70. 46, 69. 83, 61. 56, 58. 99, 39. 73, 24. 84〇
[0031] 实施例3
[0032] 1)单体⑴和单体（II)的制备同实施例1。
[0033]2)氮气保护下，在装有机械搅拌的50mL四口瓶中，加入0.31g(0. 5mmol)长链烷 氧基取代的对溴二苯（单体I)，〇. 426g(0. 6mmol)烷氧基修饰的芴硼酸酯（单体II)，和 15mL甲苯。将溶有0. 276g(2.Ommol)碳酸钾的7. 5mL水溶液加入上述溶液中，再将0.lg Pd(dppf)Cl2W入其中，搅拌下，升温至110°C，反应48小时。反应结束后，减压浓缩溶液 到2mL，用30mL三氯甲烷溶剂，等体积的水洗涤有机相两次，过滤有机相，无水硫酸钠干燥， 旋除溶剂的粗产品。粗产品用分子量为3500的透析袋处理后得共辄聚合物0. 201g，产率 43.9%。虫NMR(d-CDCl3, 400MHz) 5 7. 846 (m，4H)，7.675 (s，2H)，7.151 (s，2H)，4.185(broa d, 4H), 3. 671 (broad, 12H), 3. 588 (broad, 4H), 3. 448 (broad, 4H), 3. 319 (broad, 12H), 2. 919 (broad, 8H), 2. 478(broad, 4H);13CNMR(d-CDCl3, 100MHz)S151. 82, 149. 07, 147. 27, 143. 4 6, 139. 13, 136. 55, 134. 83, 131. 18, 130. 21, 129. 94123. 27, 122. 86, 121. 86, 121. 56, 118. 46 ,112. 38, 72. 52, 71. 85, 70. 62, 70. 51, 69. 23, 61. 46, 58. 89, 39. 75, 24. 86〇
[0034] 实施例4
[0035] 取实施例1制备的共辄聚合物lOmg溶解在lOmL的THF中，超声或加热使其完全 溶解后，过〇. 45ym的有机滤膜，得到1. 0mg/mL的共辄聚合物母液；取250yL上述母液加 入5mLTHF中，充分搅拌后，快速加入冰浴冷却下的10mLmillipore超纯水中，超声分散 3-5分钟；在室温下，向所得液体中通氮气2小时，除去大量的有机溶剂THF;继续通氮气， 并加热分散液到90°C蒸发浓缩液体到5.OmL，冷却分散液到室温，过0. 22ym水相滤膜，得 到50yg/mL的共辄聚合物染色试剂。
[0036] 实施例5
[0037] 取实施例1制备的共辄聚合物10mg溶解在10mL的THF中，超声或加热使其完全 溶解后，过〇. 45ym的有机滤膜，得到1. 0mg/mL的共辄聚合物母液；取500yL上述母液加 入5mLTHF中，充分搅拌后，快速加入冰浴冷却下的10mLmillipore超纯水中，超声分散 3-5分钟；在室温下，向所得液体中通氮气2小时，除去大量的有机溶剂THF;继续通氮气， 并加热分散液到90°C蒸发浓缩液体到5.OmL，冷却分散液到室温，过0. 22ym水相滤膜，得 至IJ100yg/mL的共辄聚合物染色试剂。
[0038] 实施例6
[0039] 取实施例1制备的共辄聚合物10mg溶解在10mL的THF中，超声或加热使其完全 溶解后，过〇. 45ym的有机滤膜，得到1. 0mg/mL的共辄聚合物母液；取125yL上述母液加 入5mLTHF中，充分搅拌后，快速加入冰浴冷却下的10mLmillipore超纯水中，超声分散 3-5分钟；在室温下，向所得液体中通氮气2小时，除去大量的有机溶剂THF;继续通氮气， 并加热分散液到90°C蒸发浓缩液体到5.OmL，冷却分散液到室温，过0. 22ym水相滤膜，得 到25yg/mL的共辄聚合物染色试剂。
[0040] 实施例7
[0041] 取实施例1制备的共辄聚合物10mg溶解在10mL的THF中，超声或加热使其完全 溶解后，过〇. 45ym的有机滤膜，得到1. 0mg/mL的共辄聚合物母液；取100yL上述母液加 入5mLTHF中，充分搅拌后，快速加入冰浴冷却下的10mLmillipore超纯水中，超声分散 3-5分钟；在室温下，向所得液体中通氮气2小时，除去大量的有机溶剂THF;继续通氮气， 并加热分散液到90°C蒸发浓缩液体到5.OmL，冷却分散液到室温，过0. 22ym水相滤膜，得 到20yg/mL的共辄聚合物染色试剂。
[0042] 实施例8
[0043] 取2yL实施例4制备的共辄聚合物染色试剂，滴加到事先准备好的电镜片上，快 速放入-80°C的冰箱中冷冻15分钟，然后冷冻干燥4小时，喷金，在HitachiS-4800电子扫 描电镜上测定。检测结果见图1。
[0044] 实施例9
[0045] 取lmL实施例4制备的共辄聚合物染色试剂，在Nano-ZSZEN360粒径分析仪进 行粒径大小测试。测试结果见图2。
[0046] 实施例10
[0047] 在60mm的细胞培养皿中，加入3-4mL含10 %胎牛血清的DMEM培养基，置于5 % C0237°C恒温培养箱中培养人宫颈癌细胞HeLa。待细胞生长到70%融汇率后，用1XPBS洗 涤两次后，将含有实施例4制备的共辄聚合物染色试剂100yL的2mLPBS加入上述共聚焦 皿中，细胞培养箱中继续培养12小时后，移除培养液，用PBS洗3次。加入2mL4 %的多聚 甲醛固定液，室温作用20分钟后，再用PBS洗涤2次后，用lmLPBS覆盖，在FV1000-1X81 激光共聚焦显微镜成像。空白对照组以及细胞质定位染料LysoTrackerRed的操作过程 同上，不同在于所加的染料试剂不同。定位染色结果见图3,图中a)是空白组明场成像图， b)是空白组焚光场图，c)是共辄聚合物染色试剂和定位染料LysoTrackerRed叠加焚光 场成像图，d)是实验组明场成像图，e)是共辄聚合物染色试剂荧光场成像图，f)是定位染 料LysoTrackerRed焚光场成像图。
[0048] 实施例11
[0049] 取实施例1制备的共辄聚合物2mg溶解在10mL的DMS0中，得到0. 5mg/mL母液。 取40yL上述母液加入lmL水和DMS0混合液中（水/DMS0的体积比为4/1)得到测试液。 取上述测试液2mL于荧光池中，加入各种阳离子的终浓度为1. 0X10 3m〇l/L。荧光光谱测 定在共辄聚合物测试液中分别加入各种阳离子后，震荡60s进行荧光扫描。测试所用荧光 仪为日立F-4600荧光仪，测试激发和发射狭缝宽度都为5.Onm。激发波长为370nm，发射波 长为420nm，测试在室温下进行，结果见图4。图中，横坐标为共辄聚合物（PFP)和各种离 子，纵坐标为相对荧光强度即共辄聚合物在没有与离子结合前的荧光强度与离子作用后荧 光强度的比值。
【主权项】
1. 一种含有芴环的共辄聚合物，其特征在于，结构式为：2. 如权利要求1所述的一种含有芴环的共轭聚合物的制备方法，其特征在于，包括如 下步骤： 1) 、制备长链烷氧基取代的对溴二苯（单体I); 2) 、制备烷氧基修饰的芴硼酸酯（单体II); 3) 、在氮气保护下，以Pd(dppf)Cl2S催化剂，将长链烷氧基取代的对溴二苯（单体I) 和烷氧基修饰的芴硼酸酯（单体II)加入甲苯中，再将碳酸钾溶液加入其中，在ll〇°C反应 48h，得到含有芴环的共辄聚合物。3. 如权利要求2所述的一种含有芴环的共辄聚合物的制备方法，其特征在于，步骤3) 中，所述的单体I、单体II和碳酸钾的摩尔比为1 : 1~1.2 : 4~8。4. 如权利要求2所述的一种含有芴环的共辄聚合物的制备方法，其特征在于，步骤3) 中，所述的甲苯与碳酸钾水溶液的体积比为2~4 : 1。5. 如权利要求1所述的共辄聚合物在肿瘤细胞染色中的应用。6. -种肿瘤细胞质染色试剂，其特征在于，含有如权利要求1所述的共辄聚合物。7. -种肿瘤细胞质染色试剂，其特征在于，由如权利要求1所述的共辄聚合物和水组 成，共辄聚合物的浓度为20~100yg/mL。8. 如权利要求7所述的一种肿瘤细胞质染色试剂，其特征在于，所述的共辄聚合物的 浓度为25~50yg/mL。
【专利摘要】本发明提供了一种含有芴环的共轭聚合物及其制备方法和应用。具体为以2,5-二溴苯酚为原料，与对甲基苯磺酰基取代的四甘醇反应得到长链烷氧基取代的对溴二苯(单体I)；以2,7-二溴芴为原料，与溴代三甘醇单甲醚反应后，经硼酸酯化得到烷氧基修饰的芴硼酸酯(单体II)；单体I与单体II经Suzuki偶联反应得到含有芴环的共轭聚合物。共轭聚合物的制备方法操作简单，反应条件温。本发明所制备的含有芴环的共轭聚合物可用作肿瘤细胞的染色试剂，其具有生物毒性小、细胞相容性和光稳定性好的特点，在生物染色材料领域具有较好的应用价值。
【IPC分类】G01N21/64, G01N1/30, C08G61/10
【公开号】CN105111414
【申请号】CN201510641299
【发明人】冯丽恒, 张飞
【申请人】山西大学
【公开日】2015年12月2日
【申请日】2015年9月30日