过夜，水加入泽灭，乙酸乙醋萃取 Ξ次，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钢干燥，蒸除溶剂，剩余物经柱层析纯化（石油酸： 乙酸乙醋=30:1)，得到白色固体（1.65g，93% )。
[0320] 2)中间体A42-3的合成：
[0321]反应瓶中加入A42-2(1.35g，4. 49mmol)，憐酸钟（1.27g，5. 99mmol)，Pd(clba) 2 (114mg，0. 20mmol)，XPhos(143mg，0. 30mmol)，抽真空，置换氮气，加入硝基甲烧 (4血)，二氧六环（25血)，加热到80°C揽拌18小时，冷却至常溫，醋酸（8血）加入，锋粉 (2.93g，45mmol)加入，35°C反应3小时，过滤除去没反应完的锋粉，水（30血）加入，乙酸乙 醋萃取两次，水相用IMNaOH调PH= 10,乙酸乙醋萃取Ξ次，有机相用饱和食盐水洗，无水硫 酸钢干燥，蒸除溶剂，剩余物经柱层析纯化（石油酸：乙酸乙醋=3:1-0:1),得到淡黄色固 体（280mg，34% )。
[0322] 3)中间体A42-4的合成：
[032引将A42-3 (182mg，1.Ommol)溶于四氨巧喃（1血），加入4,6-二氯-5-氣喀晚 (167mg，1.Ommol)，二异丙基乙基胺（260mg，2.Ommol)，50°C揽拌过夜，冷却到常溫，旋干溶 剂，剩余物经柱层析纯化（石油酸：乙酸乙醋=5:1-3:1)，得到淡黄色固体（120mg，38 % )。 [0324] 4)产物M2的合成：
[03巧]将中间体A42-4 巧3mg，0. 17mmol)，A4-2 巧6mg，0. 26mmol)溶于二氧六环 / 水 巧血/1血），加入碳酸钟巧6mg，0. 69mmol)，四Ξ苯基憐钮（20mg，0. 017mmol)，氮气置换， 100°C揽拌过夜，冷却到常溫，用娃藻±抽滤，滤液用乙酸乙醋（15mL)稀释，无水硫酸钢干 燥，滤除硫酸钢，旋干溶剂，剩余物经柱层析纯化（二氯甲烧：甲醇=100:1-50:1)，得到淡 黄色固体（35mg，66% )。经过核磁图谱解析（图谱数据见表1)，所得到的固体为化合物
[0326] (43)杂环化合物A43,其是由如下方法合成的：
[0327]
[032引 将A42 (ITmg，0. 04mmol)，碳酸钟（2.Smg，0. 02mmol)溶于DMS0(ImL)，加入 30 % &02(6mg，0. 05mmol)，常溫揽拌3小时，倒入水中，抽滤，水洗，正己烧洗，真空干燥，得到淡 黄色固体（14mg，83% )。经过核磁图谱解析（图谱数据见表1)，所得到的固体为化合物
[0329] (44)杂环化合物A44,其是由如下方法合成的：
[0330]
[033"将A42-4 (40mg, 0. 13mmol),A26-3巧Img, 0. 39mmol),DIPEA(83mg, 0. 64mmol)溶于NMP(1.5血）中，加热至130°C反应12h，冷却至室溫，加入水，用乙酸乙醋萃取Ξ次，合并有 机相，用饱和氯化钢水溶液洗一次，无水硫酸钢干燥，减压蒸除溶剂，经柱层析纯化（石油 酸：乙酸乙醋=5:1-3:1)得栋色固体（20mg，38%)经过核磁图谱解析（图谱数据见表1)， 所得到的固体为化合物
[033引 （45)杂环化合物A45,其是由如下方法合成的：
[03331
[0334]将A35-6 巧Omg, 0. 15mmol),A26-3 巧7mg, 0. 72mmol),DIPEA巧3mg, 0. 72mmol)溶于NMP(1. 5血）中，加热至130°C反应化，冷却至室溫，加入水，用乙酸乙醋萃取Ξ次，合并有机 相，用饱和氯化钢水溶液洗一次，无水硫酸钢干燥，减压蒸除溶剂，经柱层析纯化（石油酸： 乙酸乙醋=5:1-3:1)得栋色固体（25mg，39%)。经过核磁图谱解析（图谱数据见表1)，所 得到的固体为化合物
[033引 （46)杂环化合物A46,其是由如下方法合成的：
[0336]
[0337]在封管中将A33-6 巧Omg, 0. 15mmol)溶于NMP(2血），加入A26-3 巧7mg, 0. 73mmol) 和DIPEA巧4mg，0. 73mmol)，120 °C揽拌过夜，冷却到常溫，加入水（10血)，乙酸乙 醋（10mL*3)萃取，有机相用饱和食盐水（20mL*6)洗，无水硫酸钢干燥，滤除硫酸 钢，，减压蒸除溶剂，经柱层析纯化（二氯甲烧：甲醇=50:1-30:1)，得到栋色油状 物巧Omg，78%)。经过核磁图谱解析（图谱数据见表1)，所得到的固体为化合物A46
[033引 （47)杂环化合物A47,其是由如下方法合成的：
[0339]
[0340] 1)中间体A47-2的合成：
[03川 100血的烧瓶中力日入A47-l(l0g，50mmol)，硫（3. 22g，100mmol)，氯胺 (4. 36g,lOOmmoU和化晚（40血)，加热至130°C反应90分钟。冷却至室溫，把固体滤出，用 乙酸乙醋洗，干燥得深栋色固体巧.7g, 76% )。古NMR(400MHz，DMS0)δ6. 86(s, 2H), 4. 29( s, 2H)，3. 56 (m, 2H)，2. 43 (s, 2H)，1. 41 (s, 9H).
[034引 2)中间体A47-3的合成：
[034引将A47-2(9. 7g，38mmol)，亚硝酸异戊醋（llg，95mmol)溶于四氨巧喃150血，80°C下反应化，冷却至室溫加入水，用乙酸乙醋萃取Ξ次，合并有机相，用饱和氯化钢水溶液洗 一次，无水硫酸钢干燥，减压蒸除溶剂，经柱层析纯化（石油酸：乙酸乙醋=10:1-5:1)得 到黄色固体（3. 3g，36% )。电NMR(400MHz，CDCl3)δ8. 67(s, 1H)，4. 67(s，2H)，3. 76(s，2H) ,2. 93(s，2H), 1.49(s，9H).
[0344] 3)中间体A47-4的合成：
[034引将A47-4 (800mg，3. 3mmol)溶于氯化氨的乙酸乙醋溶液（3M，5血），在室溫下揽拌 2h。减压蒸除溶剂，得到黄色固体巧80mg, 100% )。古NMR(400MHz，DMS0)δ9. 76(s, 2H), 9 .08 (s,IH)，4. 41 (s, 2H)，3. 43 (s, 2H)，3. 04 (t,J= 5. 8Hz, 2H).
[0346] 3)产物A47的合成：
[0347]将Al-4 巧Omg, 0.ISmmol)，A47-4 (107mg, 0. 77mmol)，DIPEA(198mg, 1. 53mmol)溶 于NMP(2血)，加热至120°C下反应化。冷却至室溫，加入水，用乙酸乙醋萃取Ξ次，合并有 机相，用饱和氯化钢水溶液洗一次，无水硫酸钢干燥，减压蒸除溶剂，经柱层析纯化（石油 酸：乙酸乙醋=5:1-3:1)得栋色固体化合物（30mg，45% )。经过核磁图谱解析（图谱数 据见表1)，所得到的固体为化合物
[034引 （48)杂环化合物A48,其是由如下方法合成的：
[0349]
[0350] 1)中间体A48-2的合成：
[035U将A48-1 (180mg，0. 91mmol)，双联频哪醇棚酸醋（348mg，1. 37mmol)，1，1'-二（二 苯麟基）二茂铁二氯化钮（II)(37mg, 0. 045mmol),醋酸钟（180mg, 1.83mmol)溶于四氨巧 喃（10血）。氮气保护下在80°C下反应化，冷却至室溫，经娃藻±过滤，减压蒸除溶剂，得黑 色固体（300mg，含量：74%)。
[0352] 2)产物A48的合成：
[035引将A1-4 巧Omg, 0.ISmmol),A48-2 巧4mg, 0. 23mmol),四Ξ苯基憐钮（18mg, 0. 015mm01)，碳酸钟（74mg，0.53mmol)溶于二氧六环巧mL)和水（ImL)。氮气保护下在100°C下反 应化。冷却至室溫，娃藻±过滤，加入水，用乙酸乙醋萃取Ξ次，合并有机相，用饱和氯化钢 水溶液洗一次，无水硫酸钢，减压蒸除溶剂，经柱层析纯化（石油酸：乙酸乙醋=2:1-1:1) 得到白色固体（24mg，39% )。经过核磁图谱解析（图谱数据见表1)，所得到的固体为化合 物
[0354] 表1杂环化合物A1-A48的解析结构和波谱数据
[0355]
[0356]
[0357]
[035引
[0359]
[0360] 实施例2
[0361] 本实施例对实施例1制备得到的具有Wnt信号通路抑制活性的杂环化合物A1-A48 对Wnt信号通路的抑制能力进行测定。
[0362]LWnt3A细胞（C化-2647，ATCC)培养在含有10%胎牛血清（Hyclone)的DMEM培养 基（Gibico)中。肥K293STF稳定克隆细胞（转染有"Super-TopFlash"TCF巧光报告质粒的 肥K293细胞）培养在完全培养基（含有4mMk谷氨酷胺、1. 5g/L碳酸氨钢、4. 5g/L葡萄糖、 6μg/mL杀稻攝菌素和10 %胎牛血清的DMEM培养基）中。当LWnt3A细胞和肥K293STF稳 定克隆细胞培养至汇合度为90%时分别收获，并W1:1的比例混合。100μL/孔的混合细 胞培养液加入到96孔板中，使最终的细胞浓度为12000个细胞/孔，然后再培养2地。被测 化合物用DMS0逐级稀释，然后再用DMEM培养基稀释到所要浓度。取20μL化合物溶液加 入到前述的装有细胞培养液的96孔板中，然后于37°C解化48h。最后每孔中加入50μL巧 光素酶溶液度ri曲-Glo，Promega)，常溫下振摇5分钟。发光信号用酶标仪（Ρ肥RAstarFS， BMG)测定，然后根据不同浓度化合物对发光信号的抑制结果计算出化合物的IC5。值（效 价）。结果如表2 (部分杂环化合物A1-A43对Wnt信号通路的抑制能力测定实验的结果） 所示。ICw值越低，代表该杂环化合物的活性越高。
[0363]表2
[0364]
[036引 由上表2可见，本发明中的杂环化合物，能够作为Wnt信号通路的有效括抗剂，能 够有效阻断Wnt信号通路，能够用于治疗或预防因Wnt信号通路失常引起的病症。
【主权项】
1. 一种具有wnt信号通路抑制活性的杂环化合物，及其药学上可接受的盐、同位素、异 构体和晶型结构，具有通式I所示的结构：其中，A为被1-3个1?4基团取代或未被取代的6元芳环、10元芳环或5-10元含有1-4 个杂原子的杂芳环，所述杂芳环的杂原子包括N、0和S中的一个或多个； B为氣原子、氛基、[if素、羟基、Q8烷基、C3 8环烷基、C2 8烯基、C2 8炔基、Ci8讽基、Ci8 酰胺基、Cis脲基、Cis氧代脲基、Cis磺酰胺基、Cis烷氧基、C2s酯基、被1-3个R5基团取代 或未被取代的苯环、被1-3个馬基团取代或未被取代的5-6元含有1-3个杂原子的杂芳环 或被1-3个1? 5基团取代或未被取代的5-7元含有1-2个杂原子的饱和杂环，所述杂芳环和 杂环的杂原子包括N、0和S中的一个或多个； U为被1-3个&基团取代或未被取代的6-12元芳环、5-12元杂芳环、5-7元杂环并苯 环或5-7元杂环并5-6元杂芳环，所述杂环、杂芳环含有1-4个独立选自N、0和S的杂原 子； 1^、私、1?3分别独立地选自氢原子、被取代基取代或未被取代基取代的(：16烷基，所述取 代基包括卤素、羟基、氛基、Q3烷基、C3 5环烷基和Ci3烷氧基中的1_3个； R4、R5、R6分别独立地选自卤素、氛基、羟基、Ci8烷基、C3 8环烷基、Ci8烷氧基、C2 8烯基、c2s炔基、Cis砜基、Cis酰胺基、Cis脲基、Cis氧代脲基、Cis磺酰胺基、Cis酯基、C2 s含有 1-3个杂原子的杂环烷基，所述杂原子包括N、0和S中的一个或多个； 或者，R4、R5、1?6分别独立地选自被氢、卤素、羟基、氰基、Ci3烷基、Ci3烷氧基和C3 s环烷 基中的1-3个基团取代的Cis烷基、C3s环烷基、Cis烷氧基、C2s烯基、C2s炔基、Cis砜基、 Qs酰胺基、Cis脲基、Cis氧代脲基、Cis磺酰胺基、Cis酯基、C2s含有1-3个杂原子的杂环 烷基，所述杂原子包括N、0和S中的一个或多个。2. 根据权利要求1所述的具有Wnt信号通路抑制活性的杂环化合物，其特征在于U为 被1-3个R6基团取代或未被取代的下列基团中的任一种：3. 根据权利要求1所述的具有Wnt信号通路抑制活性的杂环化合物，其特征在于A为 被1-3个R4基团取代或未被取代的下列基团中的任一种：4. 根据权利要求1所述的具有Wnt信号通路抑制活性的杂环化合物，其特征在于B为 下列基团中的任一种：5.根据权利要求1所述的具有Wnt信号通路抑制活性的杂环化合物，其特征在于该杂 环化合物包括：6. 权利要求1-5任一项所述的具有Wnt信号通路抑制活性的杂环化合物的联合应用组 合物，包括将所述的具有Wnt信号通路抑制活性的杂环化合物及其药学上可接受的盐、同 位素、异构体或晶型与抗肿瘤药物、抗菌药物、抗病毒药物、抗寄生虫病药物、中枢神经系统 系统药物、抗骨质增生药物、糖尿病药物中的一种或几种的组合进行联合应用得到的组合 物。7. 权利要求1-5任一项所述的具有Wnt信号通路抑制活性的杂环化合物及其药学上可 接受的盐、同位素、异构体或晶型在制备拮抗Wnt信号通路的药物中的应用。8. 根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述拮抗Wnt信号通路的药物为治疗包 括乳腺癌、肺癌、膀胱癌、胰腺癌、肝癌、头颈鳞状上皮癌、甲状腺癌、肉瘤、骨肉瘤、硬纤维 瘤、黑色素瘤、前列腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、宫颈癌、食管癌、胃癌、骨髓瘤、淋巴瘤、套细 胞淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、慢性和非进行性贫血、自发性或原发性血小板增多症、特发 性骨髓纤维化、肺纤维化、肾脏纤维化、肝纤维化、肝硬化、糖尿病性视网膜病、巨球蛋白血 症、白血病、急性白血病、慢性白血病、淋巴性白血病、髓性白血病、骨髓增生异常综合征、骨 髓增殖性病症、脑瘤、星形细胞瘤、髓母细胞瘤、许旺细胞瘤、原发性神经外胚瘤、垂体瘤、以 及寄生虫病、血吸虫病和疟疾中的一种病症或几种病症的组合的药物。9. 权利要求6所述的具有Wnt信号通路抑制活性的杂环化合物的联合应用组合物在制 备拮抗Wnt信号通路的药物中的应用。10. 根据权利要求9所述的应用，其特征在于：所述拮抗Wnt信号通路的药物为治疗 包括乳腺癌、肺癌、膀胱癌、胰腺癌、肝癌、头颈鳞状上皮癌、甲状腺癌、肉瘤、骨肉瘤、硬纤维 瘤、黑色素瘤、前列腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、宫颈癌、食管癌、胃癌、骨髓瘤、淋巴瘤、套细 胞淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、慢性和非进行性贫血、自发性或原发性血小板增多症、特发 性骨髓纤维化、肺纤维化、肾脏纤维化、肝纤维化、肝硬化、糖尿病性视网膜病、巨球蛋白血 症、白血病、急性白血病、慢性白血病、淋巴性白血病、髓性白血病、骨髓增生异常综合征、骨 髓增殖性病症、脑瘤、星形细胞瘤、髓母细胞瘤、许旺细胞瘤、原发性神经外胚瘤、垂体瘤、以 及寄生虫病、血吸虫病和疟疾中的一种病症或几种病症的组合的药物。
【专利摘要】本发明提供了一种具有Wnt信号通路抑制活性的杂环化合物。该杂环化合物及其药学上可接受的盐、同位素、异构体和晶型结构，具有通式I所示的结构：(I)。本发明还提供上述的具有Wnt信号通路抑制活性的杂环化合物的应用。本发明的具有Wnt信号通路抑制活性的杂环化合物，作为Wnt信号通路的有效拮抗剂，能够用于治疗或预防因Wnt信号通路失常引起的病症。
【IPC分类】C07D417/14, A61P7/00, A61P13/12, A61P33/06, A61P35/00, C07D403/12, C07D401/14, C07D401/12, C07D513/04, C07D471/04, A61P3/10, A61P11/00, C07D401/04, A61P27/02, A61P33/12, A61P1/16, A61P33/00, A61P35/02, C07D405/14, A61P7/06
【公开号】CN105254613
【申请号】CN201510645986
【发明人】张小虎
【申请人】苏州云轩医药科技有限公司
【公开日】2016年1月20日
【申请日】2015年10月8日