0,产生白色 沉淀，抽滤，CH2CI2溶解产物，用无水化2SO4干燥，过滤旋除溶剂，真空干燥得到4, 4'-二漠 甲基-2,2'-联化晚，产率45%。
[0034] 似配合物Ir-I化(卵y)2-bpy-时种6的合成
[0035] 取苯基化晚合银氯桥二聚体200mg，HOmg4, 4' -二漠甲基-2, 2' -联化晚，六氣 憐酸钟（KPFe) 300mg，二氯甲烧20mU无水甲醇IOmU依次加入带揽拌子的两口烧瓶中，通氮 气，回流揽拌2地，用二氯甲烧稀释反应液，过滤得澄红色二氯甲烧澄清液，减压旋干后，用 二氯甲烧/乙酸乙醋（V:V= 20:1)柱层析得澄色粉末即为银配合物Ir-I,产率86%。
[0036] iHMffi(400MHz，CDCl3)5(wm):8.65(m;2H);7.91-7.88(m;4H);7.76(t;J= 8. 00Hz;2H) ;7. 68(dJ= 7. 60Hz;2H) ;7. 53-7. 51(m;3H) ;7. 46(dd;Ji= 1.20HzJz= 5. 60Hz;lH) ;7. 09-7. 02(m;4H) ;6. 92(t;J= 7. 20Hz;2H) ;6. 27(dJ= 7. 60Hz;2H); 4. 80(s;2H) ;4. 63(s;2H)。
[0037]做配合物Ir-2化(卵y) 2-bpy-NO] +PFe的合成
[003引称取银配合物Ir-I(Immol)，4-氨基-2, 2, 6, 6-四甲基赃晚氮氧自由基（3mmol) 和过量碳酸钟粉末加入带揽拌子的双颈瓶中，在双排管上抽真空-保氮气-抽真空，循环往 复S次，最后采用氮气保护整个反应体系。注入5mL蒸过的N-甲基化咯烧酬溶液，80°C揽 拌回流lOh。反应结束后，用石油酸沉降除去溶剂，二氯甲烧溶解浓缩提纯，得到红色固体产 物即为银配合物Ir-2。
[0039]虹/e] (M,MALDI-T0F)理论值：1023. 32,实验值：1023. 06,如图 1 所示。
[0040] 实施例2 :憐光探针Ir-2的发射光谱对抗坏血酸的响应性
[0041] 将银配合物Ir-2配成1.OX10 2mol/L的DMSO溶液，移取10yL溶液到1000yL PBS缓冲溶液中，使其浓度稀释至1. 0X10 5mol/L进行测试，逐次加入抗坏血酸（或称Vc) 水溶液，每次滴加抗坏血酸后，在37°C恒溫水浴中加热揽拌5分钟，使抗坏血酸与银配合物 Ir-2充分反应，随后测试其巧光发射光谱，如图2所示。在614nm处，银配合物Ir-2溶液本 身发光很弱，随着抗坏血酸的加入，银配合物Ir-2溶液的巧光光谱发生了变化，伴随着抗 坏血酸滴加浓度的升高，银配合物Ir-2的巧光强度逐渐升高并发生蓝移。当抗坏血酸的滴 加浓度当量达到4eq.时，滴定达到终点，再继续滴加抗坏血酸，光谱则不再发生变化。配合 物Ir-2的憐光发射强度与初始强度比与不同当量抗坏血酸（Vc)的线性拟合曲线如图3所 /J、-O 阳0创实施例3 :憐光探针Ir-2的寿命对抗坏血酸的响应性
[0043] 将银配合物Ir-2配成1. 0X10 2mol/L的DMSO溶液，移取10yL溶液到1000yL PBS缓冲溶液中，使其浓度稀释至1.OX10 5mol/L进行测试，加入抗坏血酸前测试配合物 Ir-2的寿命，继而向Ir-S的PBS缓冲液中加入超过反应当量的抗坏血酸溶液，充分反应再 次进行寿命测试，配合物前后的寿命变化如图4所示。
[0044] 实施例4 :憐光探针Ir-2应用于活细胞成像实验
[0045]Hela细胞按照AmericanTypeTissueQiltureCollection规定进行培养。Hela 细胞用20yM银配合物Ir-2溶液在37°C下解育30分钟，用培养液洗涂3次，配合物Ir-2标 记的化Ia细胞分别用低浓度和高浓度抗坏血酸（Vc)溶液在37°C条件下各解育30分钟，之 后均用培养基洗涂3次，用405nm波长激发细胞进行共聚焦成像，照片显示活细胞胞浆内有 明显可见的憐光，且高浓度抗坏血酸解育的化Ia细胞中的憐光强度比低浓度解育的细胞 中的憐光强度高，如图5所示，此结果表明憐光探针Ir-2具有较好的细胞穿透性，主要分布 在细胞质区域，可用于活细胞内抗坏血酸检测，且憐光探针本身的寿命比自发巧光寿命长， 而细胞内的憐光探针与待检测物作用之后的寿命变长，在自发巧光衰减之后再测定憐光探 针寿命的信号，即可应用时间分辨技术实现较高灵敏度的检测。
【主权项】
1. 一种离子型磷光铱配合物，其特征在于所述铱配合物的辅助配体上含有氮氧自由 基，该铱配合物具有如下结构通式：其中，C~N配体为下列结构中的一个：2. -种如权利要求1所述的离子型磷光铱配合物的制备方法，其特征在于该制备方法 包括以下步骤： (1)4, 4' -二甲基-2, 2' -联吡啶经过氧化、甲氧基化、酯的还原、氢溴酸取代四步反应 得到N~N辅助配体； ⑵将所述步骤1得到的辅助配体与铱二氯桥（(C~N)2IrU-Cl)2Ir(C~N)2)通过配位 反应制备得到配合物中间体； (3)将所述步骤2得到的配合物中间体与4-氨基-2, 2, 6, 6-四甲基哌啶氮氧自由基以 及碳酸钾粉末溶解于N-甲基吡咯烷酮溶液中反应，得到目标铱配合物。3. 根据权利要求1所述的离子型磷光铱配合物在抗坏血酸检测上的应用。4. 根据权利要求3所述的离子型磷光铱配合物的应用，其特征在于所述探针能够用于 细胞成像和时间分辨技术上。
【专利摘要】本发明公开了一种离子型磷光铱配合物及其制备方法和应用，具体涉及一类用于检测L-抗坏血酸的磷光铱配合物。该类配合物材料由环金属配体，金属中心和氮氧自由基修饰的辅助配体组成，结构通式如下式所示。由于所述铱配合物具有低生物毒性、容易进入细胞浆中以及长的磷光发射寿命，因此其在抗坏血酸检测、细胞成像及时间分辨技术方面有广阔的应用前景。
【IPC分类】C09K11/06, G01N21/64, C07F15/00
【公开号】CN105294773
【申请号】CN201510763336
【发明人】赵强, 黄维, 朱亚娜, 刘淑娟, 许文娟, 杨天赦
【申请人】南京邮电大学
【公开日】2016年2月3日
【申请日】2015年11月10日