TGTAAAACGACGGCCAGT-3' M13R: 5' -CAGGAAACAGCTATGACC-3' PCMVF-BD: 5' -TCTAAAAgCTgCggAATTgT -3' PCMVR: 5'-TCCAAACTCATCAATgTATC-3' PDC316F: 5，-ACgTgggTATAAgAggCg-3， PDC316R: 5, -CgATgCTAgACgATCCAg-3，。5. 如权利要求1所述的一种人血小板同种抗原系统基因分型的PCR-SBT方法，其特征 在于：所述步骤（3)中纯化所需的两种酶为虾碱性磷酸酶和核酸外切酶I。6. -种人血小板同种抗原系统基因分型的PCR-SBT方法所用的试剂，其特征在于：所 述抗原系统为HPA1-28W抗原系统，由28个抗原基因组成：HPA-1、HPA-2、HPA-3、HPA-4、 HPA-5、HPA-6w、HPA-7w、HPA-8w、HPA-9w、HPA-lOw、HPA-llw、HPA-12w、HPA-13w、HPA-14w、 HPA-15、HPA-16w、HPA-17w、HPA-18w、HPA-19w、HPA-20w、HPA-21w、HPA-22bw、HPA-23bw、 HPA-24bw、HPA-25bw、HPA-26bw、HPA-27bw、HPA-28bw，所述试剂由用于扩增 28 个ΗΡΑ抗原 基因的18个扩增引物和用于测序分析的6个寡核苷酸测序引物组成； 所述用于扩增的引物为： (1)HPA-l和HPA-lOw抗原系统的基因序列的扩增引物， HPA-1, 10F: 5'TCTAAAAgCTgCggAATTgTCTTggCCTCCCAAAgTATCA3' HPA-1, 10R: 5'TCCAAACTCATCAATgTATCCACCTgCTTCAggTCTCTCC3' (2)HPA-2抗原系统的基因序列的扩增引物， HPA-2F: 5' TgTAAAACgACggCCAgTTATCCCACAATCAgCTgCAA3' HPA-2R: 5， CAggAAACAgCTATgACCgAgATTCTCCAgCCCATTCA3， (3)HPA-3、HPA-9w和HPA-27bw抗原系统的基因序列的扩增引物， HPA-3,9,27F: 5'TCTAAAAgCTgCggAATTgTggAAgAAAgACCTgggAAgg3' HPA-3, 9, 27R: 5'TCCAAACTCATCAATgTATCTCTTTCAgCTCACCCCAgAC3' (4)HPA-4、HPA-16w和HPA-19w抗原系统的基因序列的扩增引物， HPA-4, 16, 19F: 5，ACgTgggTATAAgAggCgTCAATCTTggTgggAgAAgAA3， HPA-4, 16, 19R: 5，CgATgCTAgACgATCCAggCCTTAggCTCCATTgACAC3， (5)HPA-5抗原系统的基因序列的扩增引物， HPA-5F: 5， ACgTgggTATAAgAggCgTgAgggAAggAACTgTgCTC3， HPA-5R: 5' CgATgCTAgACgATCCAgACAAgAAAgCATTgCCCTgT3' (6) HPA-6w和HPA-7w抗原系统的基因序列的扩增引物， HPA-6, 7F: 5'ACgTgggTATAAgAggCgTgCTTgTgTTTTTgCTTTgC3' HPA-6, 7R: 5'CgATgCTAgACgATCCAgggCCTTCACCTATgTTTCCA3' (7) HPA-8w、HPA-llw、HPA-21w和HPA-23bw抗原系统的基因序列的扩增引物， HPA-8，11，21，23F: 5'TGTAAAACGACGGCCAGTTAATggAg(a/g)TggAgCAgCTT3' HPA-8，11，21，23R: 5'CAGGAAACAGCTATGACCTAgAACCTgggTgTgTgCAA3' (8) HPA-12w抗原系统的基因序列的扩增引物， HPA12F: 5'TCTAAAAgCTgCggAATTgTCTCCCgCTgCAgAgTAAgC3' HPA12R: 5'TCCAAACTCATCAATgTATCgTTgTgTCgACAgggAAgg3' (9) HPA-13W抗原系统的基因序列的扩增引物， HPA-13F: 5'ACgTgggTATAAgAggCgCAATAgCAACAAAgAACAATCCA3' HPA-13R: 5'CgATgCTAgACgATCCAgAgTCggAAgCCACAAAgTTC3' (10) HPA-14w，26bw抗原系统的基因序列的扩增引物， HPA-14,26F-1: 5' TCTAAAAgCTgCggAATTgTATCTgTgTggTTgggAgAgC3' HPA-14,26R-1: 5' TCCAAACTCATCAATgTATCggCTCTggTgAgCAAgAAAC3' (11) HPA-15抗原系统的基因序列的扩增引物， HPA-15F: 5' TGTAAAACGACGGCCAGTCCTATTCTTTgAAAAgTTgggATT 3 ' HPA-15R: 5' CAGGAAACAGCTATGACCAAAC(C/A)AgTAgCCACCCAAgA 3' (12) HPA-17W抗原系统的基因序列的扩增引物， HPA-17F: 5' TGTAAAACGACGGCCAGTgCCTTTTCCATgAAggTgTC 3' HPA-17R: 5，CAGGAAACAGCTATGACCCCAgAAATCCCCAgAgTTCA 3， (13) HPA-lSw抗原系统的基因序列的扩增引物， HPA-18F: 5' TGTAAAACGACGGCCAGTTCCAAgAAgACACAATAAAgCAA 3' HPA-18R: 5' CAGGAAACAGCTATGACCTTggAAgggTgAgCATTTTC 3' (14) HPA-20W抗原系统的基因序列的扩增引物， HPA-20F: 5' ACgTgggTATAAgAggCggAgCCCCgATACCATCTACA 3' HPA-20R: 5，CgATgCTAgACgATCCAgAgggAgggAg ATgAgAgAgC 3， (15) HPA-22bw抗原系统的基因序列的扩增引物， HPA-22F: 5' ACgTgggTATAAgAggCgAgCCCTTgCTTTggATCTg 3' HPA-22R: 5' CgATgCTAgACgATCCAgggTTgCTggAgTCAAAggAg 3' (16) HPA-24bw抗原系统的基因序列的扩增引物， HPA-24F: 5' TCTAAAAgCTgCggAATTgTgACCTgATCgTgggAgCTTA 3' HPA-24R: 5' TCCAAA CTCATCAATgTATCCAgTggCTCCAACACACATC 3' (17) HPA-25bw抗原系统的基因序列的扩增引物， HPA-25F: 5' TgTAAAACgACggCCAgTATgCCA gCTTCTCTgCATTT 3' HPA-25R: 5' CAggAAACAgCTATgACCCCTCgCCAAAATCTCAACAT 3' (18) HPA-28bw抗原系统的基因序列的扩增引物， HPA-28F: 5' TCTAAAAgCTgCggAATTgTCAgTgTggCATgCTCTTTgT 3' HPA-28R: 5' TCCAAACTCATCAATgTATCTgTTCTgCTCCCTCTCACCT 3'， 所述6条寡核苷酸测序引物序列如下： M13F: 5' - TGTAAAACGACGGCCAGT -3' M13R: 5' - CAGGAAACAGCTATGACC -3' PCMVF-BD: 5' -TCTAAAAgCTgCggAATTgT -3' PCMVR: 5' -TCCAAA CTCATCAATgTATC -3' PDC316F: 5，-ACgTgggTATAAgAggCg -3， PDC316R: 5, - CgATgCTAgACgATCCAg -3，。
【专利摘要】本发明提供一种人血小板同种抗原系统基因分型的PCR-SBT方法，该方法包括以下步骤：制备人基因组DNA；扩增人基因组DNA中抗原系统的基因序列；将扩增产物进行双酶切纯化；将纯化产物进行测序PCR反应；将测序产物进行醋酸钠-乙醇沉淀法纯化，进行毛细管电泳测序；将获得的序列通过软件分析确定其基因型。本发明还提供上述分型方法所用的试剂。本发明可作为一种独立的、应用广泛的鉴定方法，解决了HPA28个抗原系统准确定型的问题，发挥PCR-SBT对HPA基因定型操作高通量、结果准确的特点，在临床输血医学研究和遗传学等领域的相关应用将受到高度重视，对于医学研究单位、药学研究和试剂开发单位具有重要的现实意义。
【IPC分类】C12Q1/68
【公开号】CN105296601
【申请号】CN201410291315
【发明人】朱发明, 何吉, 陈舒, 洪小珍, 许先国, 刘瑛, 吕杭军
【申请人】浙江省血液中心
【公开日】2016年2月3日
【申请日】2014年6月25日