为亲水性，或涂布足够量的粘附因子，例如纤连蛋白等。作为使培养容器1内为亲水性的方法，例如可以举出使用进行了 UV臭氧处理或电晕处理的膜来制成培养容器1。作为涂布粘附因子的方法，例如可以举出用粘附因子的溶液浸渍培养容器1内，并保持给定时间，由此使粘附因子吸附在培养容器1内面的方法。
[0048]此外，在培养容器1中，具备一个或两个以上的用于进行培养液2及粘附培养系细胞3的取放的口(示一卜)。
[0049]培养液2只要是可以培养粘附培养系细胞3的培养液即可，可以使用现有的培养液。例如可以合适地使用在DMEM(杜尔伯科/沃格特改良伊格尔最低必需培养基)中加入了 FBS (胎牛血清)10%的培养液等。
[0050]粘附培养系细胞3只要是附着于培养容器1内增殖的细胞，就没有特别限定，例如可以使用iPS细胞或间充质干细胞等。
[0051]装载台4是在其上表面载放培养容器1的平面的台。在装载台4中，例如可以设置用于将培养容器1固定在装载台4的固定件等、用于安置培养容器1的各种构成。
[0052]推压构件5是通过从培养容器1的外部推压培养容器1，而使与粘附培养系细胞3所附着的培养容器1的膜的面相面对的培养容器1的膜的面接触粘附培养系细胞3、并对粘附培养系细胞3施加压力的构件。
[0053]作为该推压构件5，例如如图2的(A)所示，可以使用其底面为平面的立体形状的构件。如果使用此种底面为平面的推压构件5-1，则可以将附着于由平面推压的培养容器1内的一定区域中的膜的粘附培养系细胞3选择性并且高效地剥离。作为此种立体形状，例如可以举出长方体、立方体、圆柱、圆锥、多棱柱等形状。
[0054]另外，作为推压构件5，例如也可以如图2的⑶所示，使用其底面为曲面(向下方伸出的凸面)的立体形状的构件。如果使用此种底面为曲面的推压构件5-2，则可以将附着于培养容器1内的更小的一定区域中的膜的粘附培养系细胞3选择性剥离。
[0055]此外，作为推压构件5，例如也可以如图2的(C)所示，使用辊5-3。S卩，从上方用辊推压培养容器1，使与粘附培养系细胞3所附着的培养容器1的膜的面相面对的培养容器1的膜的面接触粘附培养系细胞3、并对粘附培养系细胞3施加压力，同时使辊5-3与装载台4平行地移动，由此就可以将附着于培养容器1内的更大的一定区域中的膜的粘附培养系细胞3选择性并且高效地剥离。特别是，为了将培养容器1内的全部粘附培养系细胞3高效地剥离，作为推压构件5，适合使用辊5-3。
[0056][第二实施方式]
[0057]下面，参照图3，对本发明的第二实施方式的细胞剥离方法进行说明。本实施方式作为装载台4使用具备孔4-1的构件，由此更容易选择作为剥离对象的粘附培养系细胞3。对于其他的方面，与第一实施方式相同，对于培养容器1、培养液2、粘附培养系细胞3、及推压构件5，可以使用与第一实施方式相同的材料。
[0058]S卩，本实施方式的细胞剥离方法中，如图3所示，作为装载台4，使用在其一定区域形成有孔4-1的构件，将附着于培养容器1的内面培养的粘附培养系细胞3中的、不想剥离的粘附培养系细胞3所附着的培养容器1内的一定区域配置于孔4-1上。此后，从培养容器1的外部用推压构件5推压包括该区域的范围，就可以不将附着于该区域的粘附培养系细胞3剥离，而仅将附着于该区域以外的推压了的范围的粘附培养系细胞3选择性剥离。
[0059]具体而言，在图3的(1)中，示意性地表示出向包含具有挠曲性的膜的密闭体系的培养容器1 (培养袋)中封入培养液2和粘附培养系细胞3并载放在具备孔4-1的装载台4上、将推压构件5配置于培养容器1的上方的样子。粘附培养系细胞3附着在培养容器1内的膜的底面而被培养。
[0060]然后，如图3的(2)所示，利用推压构件5，从包含孔4-1的范围的上方推压培养容器1。此时，培养容器1内的膜的上表面接触粘附培养系细胞3，对于附着于孔4-1的上方以外的区域的粘附培养系细胞3，施加不会损伤粘附培养系细胞3的程度的压力。另一方面，附着于孔4-1的上方的区域的粘附培养系细胞3当被从上方推压时，就会沉入孔4-1中，从而不会对粘附培养系细胞3施加剥离所必需的压力。
[0061]其结果是，如图3的(3)所示，当使推压构件5离开培养容器1时，仅使附着于孔4-1的上方以外的区域的粘附培养系细胞3从培养容器1内的膜的底面剥落，而附着于孔4-1的上方的区域的粘附培养系细胞3不会从培养容器1内的膜的底面剥落。
[0062]如此所述，根据本实施方式的细胞剥离方法，通过以使不想要剥离的粘附培养系细胞3位于装载台4的孔4-1的上方的方式，将培养容器1配置于装载台4，就可以更加细致地选择要剥离的粘附培养系细胞3。
[0063]而且，虽然孔4-1在图3中作为贯穿装载台4而形成的孔表示，然而并不限定于此，也可以作为装载台4中的凹陷形成。另外，装载台4的水平面中的孔的形状也可以是任意的形状，可以设为圆形、长方形、多边形等以及其他由曲线等构成的自由的形状。此外，其个数也不限定为一个，也可以在装载台4中设置两个以上的孔4-1。
[0064]另外，本实施方式中也可以不使用推压构件5，而是例如利用空气压、液压等来推压包括配置于孔4-1上的区域的范围。
[0065][第三实施方式]
[0066]下面，参照图4对本发明的第三实施方式的细胞剥离方法进行说明。本实施方式的细胞剥离方法通过将培养容器1内设为负压，而使与粘附培养系细胞3所附着的培养容器1的膜的面相面对的培养容器1的膜的面接触粘附培养系细胞3、并对粘附培养系细胞3施加压力。对于培养容器1、培养液2、粘附培养系细胞3、及装载台4，可以使用与第一实施方式相同的材料。
[0067]S卩，本实施方式的细胞剥离方法中，通过从培养容器1内排出培养液2，然后抽吸培养容器1的空气而将培养容器1内设为负压，来使与粘附培养系细胞3所附着的培养容器1的膜的面相面对的培养容器1的膜的面接触粘附培养系细胞3、并对粘附培养系细胞3施加压力。然后，向培养容器1内注入培养液2，将粘附培养系细胞3从培养容器1的内面剥离。
[0068]具体而言，在图4的(1)中，示意性地表示出向包含具有挠曲性的膜的密闭体系的培养容器1 (培养袋)中封入培养液2和粘附培养系细胞3、并载放在装载台4上的样子。粘附培养系细胞3附着于培养容器1内的膜的底面而被培养。
[0069]然后，如图4的⑵所示，从培养容器1中排出培养液2，再利用栗等抽吸培养容器1内的空气，将培养容器1内设为负压。由此，就使与粘附培养系细胞3所附着的培养容器1的膜的面相面对的培养容器1的膜的面接触粘附培养系细胞3、并对粘附培养系细胞3施加压力。
[0070]继而，如图4的(3)所示，通过向培养容器1内注入培养液2，而将粘附培养系细胞3从培养容器1的内面剥离。
[0071]根据本实施方式的细胞剥离方法，可以不损伤培养容器1内的粘附培养系细胞3地容易并且高效地进行剥离。
[0072][实施例]
[0073](实施例1)
[0074]进行了利用上述第一实施方式的细胞剥离方法从培养袋1剥离粘附培养系细胞3的实验。
[0075]作为培养袋1，使用了聚乙烯(PE)制且尺寸为100mmX 225mm、膜厚为0.1mm的培养袋。在该培养袋1内涂覆了纤连蛋白。
[0076]具体而言，将用PBS (磷酸缓冲生理盐水)稀释为5 μ g/ml的纤连蛋白溶液100ml以浸渍培养袋1的整个内面的状态在37°C的0)2培养箱内保持约2小时。
[0077]然后，将纤连蛋白溶液全部排出后，用PBS清洗培养容器1的内面1次(使100ml的PBS浸渍培养袋的整个内面后立即排出)。液体的取放通过在设于培养袋1的口处连接注射器而进行。
[0078]作为粘附培养系细胞3，使用了 CH0细胞(Chinese Hamster Ovary，中国仓鼠的卵巣)。另外，作为培养液2，使用了加入FBS (胎牛血清)10 %的DMEM培养基。将该CH0细胞200万个与培养液150ml —起接种在培养袋1内，静置培养72小时，使用所得的材料，进行了剥离实验。
[0079]培养是利用0)2培养箱在37°C、CO 2浓度5%、湿度97%的条件下进行。
[0080]剥离实验中，作为推压构件5，使用头端为圆形的、粗1mm的针(头端SR1)，作为装载台4使用了玻璃板。此后，用手指捏住该针向培养袋轻轻地推压。此时的压力为数十gf，将针按下至感觉到来自玻璃板的应力为止。此后，使针离开培养袋1。将其结果表示于图5中。
[0081]图5的⑴中，表示出用针推压培养袋1的状态的显微镜照片，图5的⑵中，表示出使针离开培养袋1的状态的显微镜照片。根据图5的(2)可知，仅在培养袋1的用针推压了的区域中，粘附培养