用于检测宫颈癌的多肽、检测器件和检测试剂盒的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物检测领域，特别是可用于宫颈癌的早期筛查和临床辅助诊断的多 肽、包含该多肽的检测器件的检测试剂盒。
【背景技术】
[0002] 抗原一抗体检测是免疫检测的常用检测方法。大量研究表明，血清或血浆中的肿 瘤相关抗原能诱导机体产生自身抗体，在众多患者血清中既存在肿瘤抗原，也存在针对该 肿瘤抗原的白身抗体。因此，既可以利用抗体检测肿瘤抗原，也可以利用抗原检测肿瘤抗原 的自身抗体，但利用肿瘤自身抗体检测肿瘤的特异性和敏感性均比利用肿瘤抗原检测肿瘤 要高得多。很多肿瘤相关抗原不仅在肿瘤患者体内存在，在正常人体内也存在，因此检测肿 瘤相关抗原作为诊断依据可信性差。而肿瘤白身抗体在正常人体内含量很低检测不到或根 本不存在，若体内肿瘤白身抗体水平明显增高，则表明体内存在异常免疫情况，表明体内相 关抗原水平发生波动，预;^疾病的存在或原有疾病加重。
[0003] 近年来的研究表明，在恶性肿瘤体积发展到可用现代影像学技术检出之前3-5 年，患者血中可出现高浓度的肿瘤相关抗原自身抗体。因此，检测血中肿瘤相关抗原自身抗 体具有预测肿瘤发病风险和早期诊断肿瘤的重要价值。是肿瘤临床诊断领域的重点发展方 向之一。在国外已有诊断肺癌和乳腺癌的早期诊断试剂盒市售。然而，目前所报道的自身 抗体检测方法敏感度低，特异性差，假阴性比率可高达50%以上。其主要原因是由于每一种 肿瘤相关抗原自身抗体在癌症患者中的阳性检测率平均在10%左右。如何提高诊断试剂敏 感度是当前需要函待解决的关键问题。比较行之有效的方法是寻找新的可充当肿瘤标志物 的自身抗原，然后与现有己知的肿瘤相关抗原自身抗体组合成具有敏感度高和特异性强的 诊断试剂盒。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种多肽、包含该多肽的检测器件、以及包含该检测器件 的检测试剂盒，它们对宫颈癌的早期筛查和临床辅助诊断有用的。本发明目的在于提供该 多肽在制备可用于宫颈癌临床辅助诊断的检测试剂盒中的用途。
[0005] 即，本发明包含下述技术方案：
[0006] 1. 一种多肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO :1所示，即：
[0007] NGSCWGAGEENCQKLTKIIC。
[0008] 2. -种检测器件，其包括：
[0009] 固体载体，以及
[0010] 连接于该固体载体上的权利要求1所述的多肽。
[0011] 3.根据权利要求2所述的检测器件，其中，所述固体载体是iPDMS薄膜。
[0012] 4.根据权利要求2所述的检测器件，其用于宫颈癌的早期筛查和临床辅助诊断。
[0013] 5. -种检测试剂盒，其包括权利要求2-4中任一项所述的检测器件。
[0014] 6.根据权利要求5所述的检测试剂盒，其用于宫颈癌的早期筛查和临床辅助诊 断。
[0015] 7.权利要求1所述的多肽在制备检测试剂盒中的用途。
[0016] 8.根据权利要求7所述的用途，其中，所述检测试剂盒用于宫颈癌的早期筛查和 临床辅助诊断。
[0017] 9.根据权利要求7所述的用途，其中，所述检测试剂盒包括权利要求2-4中任一项 所述的检测器件。
[0018] 将本发明应用于宫颈癌的早期筛查和临床辅助诊断，能够取得令人满意的效果。
【附图说明】
[0019] 图I iPDMS薄膜的制作过程进行说明的示意图。
[0020] 图2说明多肽微阵列点样模式的示意图。
[0021] 图3是显示对健康正常人或非宫颈癌病人血清进行检测的结果的照片。
[0022] 图4是显示对宫颈癌病人血清进行检测的结果的照片。
【具体实施方式】
[0023] 本发明的多肽
[0024] 在另一个方面中，本发明提供对宫颈癌的早期筛查和临床辅助诊断有用的多肽， 由SEQ ID N0:1所示的氨基酸序列构成，即：NGSCWGAGEENCQ KLTKIIC。如实施例所示，本发 明的多肽对宫颈癌病人的血清呈阳性反应，而对健康正常人或非宫颈癌病人血清呈阴性反 应。因此，本发明的多肽作为宫颈癌的早期筛查和临床辅助诊断工具是有用的。本发明的 多肽可以用于制造可用于宫颈癌的早期筛查和临床辅助诊断的检测器件（例如下述的本 发明的检测器件）或检测试剂盒（例如下述的本发明的检测试剂盒）。
[0025] 本发明的多肽可以适宜采用（1)化学合成方法、或（2)酶反应合成方法等公知方 法来获得，但不限于此，其中化学合成更为简便。在化学合成本发明的多肽情况下，通过使 用肽合成仪合成或者半合成该多肽来进行。作为化学合成方法，可以列举出例如肽固相合 成法等。这样合成的肽可以采用常规手段例如离子交换色谱、反相高效液体色谱、亲和色谱 等进行纯化。这样的肽固相合成方法以及其后的肽纯化都是本技术领域公知的。
[0026] 此外，在通过酶反应生产本发明的多肽的情况下，可以采用例如国际公开小册子 W02004/011653号所述的方法。即，可以这样来生产：将一方的氨基酸或二肽的羧基末端被 酯化或酰胺化而得到的氨基酸或二肽、与氨基酸处于游离状态的氨基酸（例如羧基保护的 氨基酸）在肽合成酶的存在下进行反应，生成的二肽或三肽。作为肽合成酶，可以列举出： 具有生成肽的能力的微生物的培养物、由该培养物分离的微生物菌体、或该微生物的菌体 处理物、或该微生物来源的肽合成酶。
[0027] 而且，除了上述的酶方法、化学合成方法以外，还可以采用例如基因工程方法来生 产本发明的多肽。
[0028] 本发明的多肽的氨基酸序列可以采用常规的方法进行分析和确认，例如可以利用 质谱、色谱等方法来进行分析和确认。
[0029] 本发明的检测器件
[0030] 在另一方面中，本发明还提供一种检测器件（本发明的检测器件），其包括固体载 体、以及连接于该固体载体上的本发明的蛋白质或本发明的多肽。所述检测器件对于宫颈 癌的早期筛查和临床辅助诊断是有用的。
[0031] 在本发明中，对固体载体没有特殊限制，只要是作为固体或不溶性材料（例如是 可以通过过滤、沉淀、磁性分离等从反应混合物中分离的材料）的载体即可。
[0032] 构成固体载体的材料包括但不限于：硅胶（聚二甲基硅氧烷，PDMS)、纤维素、特 氟隆TM、硝基纤维素、琼脂糖、葡聚糖、壳聚糖、聚苯乙烯、聚丙烯酰胺、聚酯、聚碳酸酯、聚 酰胺、聚丙烯、尼龙、聚偏二氟乙烯、胶乳、二氧化硅、玻璃、玻璃纤维、金、铂、银、铜、铁、不锈 钢、铁氧体、硅晶片、聚乙烯、聚乙烯亚胺、聚乳酸、树脂、多糖类、蛋白（白蛋白等）、碳或它 们的组合等。
[0033] 固体载体的形状包括但不要限于：珠子、磁珠、薄膜、微细管、滤膜、板、微量板、碳 纳米管、传感器芯片等。正如本技术领域公知的那样，薄膜或板等平坦的固体载体上可以设 置凹坑、沟槽、滤膜底部等。
[0034] 在本发明中，磁珠可以具有约25nm_约Imm范围的球体直径。在优选的实施方式 中，磁珠具有约50nm_约10 μπι范围的直径。磁珠的尺寸可以根据特定的用途来进行选择。
[0035] 在本发明中，由Sepharose等高交联球形琼脂糖制成的珠子具有约24 μm-约 165 μ m范围的直径。优选地，高交联球形琼脂糖珠具有约24 μ m-约44 μ m范围的直径。高 交联球形琼脂糖珠的尺寸可以根据特定的用途来进行选择。
[0036] 具有疏水性表面的固体载体的例子包括可从Polysciences，Warrington，PA或 Spherotech，Liberville，IL购买的制品等聚苯乙稀胶乳珠。
[0037] 二氧化硅（SiO2)-处理或二氧化硅（SiO2)基的固体载体的例子包括可从 Polysciences，Warrington，PA购买的超常磁性二氧化娃珠等，其可以用于捕捉核酸（例如 DNA)。或者，还可以使用可从Dynal Biotech购买的M-280等。
[0038] 具有亲水性表面的磁珠可用于捕捉增殖期的细菌细胞、核酸以及其它成分。作为 该磁珠的例子，可以列举出Poly