时间表可采用每天一次、每天两次、每天三次、每周一次、每周两次、每周三次 或本领域技术人员已知的任何其他施用时间表。
[0260] 可以将本发明的方法与以上描述的紊乱/疾病的一种或更多种已知的治疗组合。
[0261] 在一些实施方案中，本发明提供了如本文描述的缀合物在制备用于治疗与代谢综 合征相关的医疗状况的药物中的用途。
[0262] 展示了以下实施例，以更充分地例证本发明的某些实施方案。但是，它们绝不应该 被解释为限制本发明的广泛的范围。本领域技术人员可以容易地想出本文公开的原理的多 种变化和修改，而不偏离本发明的范围。 实施例
[0263] 实施例1-鹅脱氣阳基-精氨酸-乙醅（⑶CArg)的合成
[0265] 合成稈序:
[0266] L在1000 ml圆底烧瓶中将鹅脱氧胆酸（78. 5gm，0. 2mol)溶解在DMF(250mL)和三 丁胺（95.3mL)中。
[0267] 2.在0°C下将氯甲酸乙酯（20. 16mL)缓慢地加入到混合物中。
[0268] 3.在0 °C下搅动混合物，持续30分钟。
[0269] 4.在500ml圆底烧瓶中，制备精氨酸乙酯二盐酸盐（60. 28gm，0. 22mol)和三丁胺 (95. 3mL)在 DMF(200mL)中的混合物。
[0270] 5.在0°C下将其转移到滴液漏斗并缓慢地加入到由鹅脱氧胆酸和氯甲酸乙酯制 备而来的混合酸酐的混合物中（步骤1)。
[0271] 6.在室温下搅动混合物过夜。
[0272] 7.在冰上倒出混合物，并通过从水分离来收集分离出的粘性残留物（77gm)。
[0273] 8.将来自步骤5的水在旋转式蒸发器上浓缩。
[0274] 9.将浓缩后获得的残留物上样到二氧化硅凝胶床（300gm)上并用二氯甲烷随后 甲醇-二氯甲烷（1:4)洗脱。
[0275] 10.将带有100%的二氯甲烷的较早的级分丢弃，因为它们大部分地包含杂质和 溶剂（即，DMF和三丁胺）。
[0276] 11.浓缩较晚的级分并提供粘性残留物（45gm)。
[0277] 12.将来自步骤7 (77gm)和步骤11 (45gm)的粗产物溶解在甲醇中并混合。
[0278] 13.随后在Teledyne Isco 330gm二氧化娃凝胶柱上用10-15%的甲醇-二氯甲 烷将其纯化。纯化在Combi-Flash上使用ELSD检测器执行。
[0279] 14.进行三个独立的运行。将纯的级分收集并在旋转式蒸发器上浓缩，以给出鹅脱 氧胆基-精氨酸-乙酯（⑶CArg) (50. 8gm)。
[0280] 按照以上程序重复反应。
[0281] LC-ELSD和MS数据指示化合物的纯度是97 %或更高。
[0282] 实施例2-在小鼠的高脂肪饮畲（HFD)樽铟中测试CDCArg
[0283] 实验设计
[0284] HFD :60 %卡路里来自脂肪（主要是棕榈硬脂）。
[0285] 对照饮食：低脂肪饮食（LFD) 16 %卡路里来自脂肪（植物油、常规动物饮食）。
[0286] C57BL雄性小鼠，每组8只小鼠。
[0287] 处理组:
[0288] 1)用对照LFD补饲的动物（"LFD"或"对照"）。
[0289] 2)用 HFD 补饲的动物（"HFD"）。
[0290] 3)用等于0. 5%的食物的量的HFD和CDCArg补饲的动物（"HFD+CDCArg"）。
[0291] 4)用等于0. 5%的食物的量的HFD和胆酸补饲的动物（"HFD+CA"）。
[0292] 5)用HFD和饮用水中的L 25% L-精氨酸补饲的动物（"HFD+Arg"）。
[0293] 不同组中的动物用不同饮食喂食5周，在其期间测量它们的食物消耗和多种生理 参数。使用化学分析仪和商业试剂盒进行化学（胆固醇和甘油三酯，电解质和肌酸酐）和 酶促血液测量。使用luminex assay试剂盒（Millipore, Israel)检测瘦素和胰岛素水平。 通过Optium Xceed?(Abbott)血糖仪测量血液葡萄糖。
[0294] 对于肝脏组织，处死动物并将肝脏组织移出并在室温下在4%的福尔马林中 固定。使肝脏切片经受苏木精-曙红（H&E)染色（PathoVet VeterinaryPathology Services, Rehovot, Israel) 〇
[0295] 对具有多个组的实验使用单因素 ANOVA和事后检验费舍尔最小显著差异检验进 行统计分析。在P〈〇. 05时认为差异是显著的。当被使用时，其它类型的统计检测在附图图 例中示出。
[0296] MM.
[0297] -平均食物消耗：在实验期间对动物食物称量,并在每周开始时计算食物消耗。结 果被归纳于图1中。结果展示了第2、3、4和5周的食物的平均日消耗。带有不同字母的平 均值在统计上是有差异的，P〈〇. 05。（单因素 ANOVA，LSD事后检验）。如可在图中看出的， 与喂食对照饮食、HFD和HFD+Arg的小鼠相比，在喂食HFD+CA的小鼠组中观察到显著的食 物消耗量的增加，且在喂食HFD+⑶CArg的小鼠组中甚至增加更多。
[0298] -平均体重：在实验期间在每周开始时测量动物的体重。结果被归纳于图2中。用 不同字母指示的体重的重复测量在统计上有差异，P〈〇. 05 (单因素 ANOVA，LSD事后检验）。 如可在图中看出的，在实验期间所有的组都显示出体重的增加。如预期的，在喂食对照、低 脂肪饮食的小鼠组中观察到最低的体重增加。在消耗高脂肪饮食的小鼠组之中，出乎意料 地发现喂食HFD+⑶CArg的小鼠显示出最低的体重增加，尽管食物消耗显著地增加。
[0299] -脂肪组织（睾丸脂肪）的平抝重量：在第5周结束时进行测量。结果被归纳于 图3中。带有不同字母的平均值在统计上是有差异的，P〈0. 05 (单因素 ANOVA，LSD事后检 验）。如可在图中看出的，与消耗对照饮食的小鼠相比，在消耗该饮食的所有小鼠组中HFD 导致睾丸脂肪的重量增加。但是，与消耗单独的HFD或HFD+Arg相比，消耗HFD+CDCArg和 HFD+CA显示出显著较低的睾丸脂肪重量增加。
[0300] 总而言之，图1-3中示出的结果证明了⑶CA的抗肥胖性质。
[0301] -血浆脂质谱:
[0302] 血液中的平抝总阳固醇:在第5周结束时进行测量。结果被归纳于图4中。带有 不同字母的平均值在统计上是有差异的，P〈〇. 05(单因素 ANOVA，LSD事后检验）。如可在图 中看出的，尽管消耗HFD，补饲CDCArg的小鼠显示出与喂食对照、低脂肪饮食的小鼠的总血 液胆固醇水平相似的总血液胆固醇水平。对于喂食HFD+CA的小鼠观察到相似的结果。这 与喂食单独的HFD和HFD+Arg的小鼠形成对比，所述喂食单独的HFD和HFD+Arg的小鼠与 对照相比在五周的实验结束时显示出总血液胆固醇水平显著地增加。
[0303] 血液中的平抝甘油三醅:在第5周结束时进行测量。结果被归纳于图5a中。用星 号*标记的平均值在统计上是有差异的，P〈〇. 05 (单因素 ANOVA，LSD事后检验）。如可在图 中看出的，除了与HFD+CDCArg组相比显示出较高的血液甘油三酯水平的HFD+Arg组之外， 在所有的小鼠组中观察到在血液中相似的甘油三酯水平。
[0304] 由电解质平衡指示的一般毒性和通过血浆肌酸酐、钠、钾和氯化物水平测量的肾 功能在多个组之间没有显著差异，指出饮食处理没有急性毒性（图5b)。
[0305] 总而言之，图4-5中示出的结果证明了⑶CArg的抗血脂异常性质，且没有毒性影 响。
[0306] -平抝血液肝酶活件（SG0T、SGPT、碱件磷酸酶）：在第5周结東时讲行测量。结果 被归纳于图6a-b中。用星号*标记的平均值在统计上是有差异的，P〈0. 05(单因素 AN0VA， LSD事后检验）。如可在图6a中看出的，在喂食补充CA的HDF的小鼠组中与所有其他组相 比观察到在血液中肝酶SGOT和SGPT的水平显著增加。不像CA，⑶CArg不增强饱和脂肪引 起的肝损伤。血液中的碱性磷酸酶水平在任何处理中不显著升高，表明CA主要对肝细胞有 毒性而对肝脏中的胆管细胞毒性较小（图6b)。
[0307] -平均肝脏重量：肝肿大(扩大的肝脏）可由若干原因导致，包括感染/炎症和代 谢紊乱。例如，肝脏中脂质的积累可导致肝脏重量增加。在第5周结束时进行测量。结果 被归纳于图7中。用星号*标记的平均值在统计上是有差异的，P〈0. 05(单因素 AN0VA，LSD 事后检验）。如可在图中看出的，发现在消耗HFD和HFD+CArg后与消耗对照饮食相比肝脏 重量显著增加。相比之下，HFD+⑶CArg与对照相比肝脏重量显示出无差异。因此，在图7中 示出的结果支持在非酒精性脂肪肝病的治疗中使用CDCArg。
[0308] -血液葡萄糖：在第5周结東时讲行测量。结果被归纳于图8a中。带有不同字母 的平均值在统计上是有差异的，P〈〇. 05 (单因素 ANOVA，LSD事后检验）。如可在图中看出 的，在消耗HFD的小鼠组中观察到在血液中葡萄糖的水平显著增加。相比之下，喂食补充 CDCArg的HFD的小鼠显示出与喂食对照饮食的小鼠的血液葡萄糖水平相似的血液葡萄糖 水平。对于喂养HFD+CA的小鼠观察到相似的结果。因此，在图8中示出的结果支持在糖尿 病、特别地II型糖尿病的治疗中使用CDCArg。
[0309] -血浆腠岛素和痺素 ：如在图8b_c中看出的，胰岛素和瘦素的血浆水平在 HFD+CDCArg组中与HFD组相比显著降低。对于HFD+CA观察到相似的结果。
[0310] -通讨组织学评价肝损伤：在第5周结束时通过H&E染色进行肝脏的组织学评价。 在图9中显示了从用不同饮食喂食的小鼠获得的肝脏切片的示例性染色。在图中，箭头指 示小泡性和大泡性脂肪变性，且箭头头部指示肝细胞膨大。如可在图中看出的，从喂食补充 ⑶CArg的HFD的小鼠获取的肝脏的染色与消耗对照饮食的小鼠的肝脏的染色相似。相比之 下，在从喂食单独的HFD和HFD+CA/Arg的小鼠获取的肝脏中检测到肝损伤增加。CA的组织 学特征与⑶CArg的相比在这些处理之间在由肝损伤和肝细胞受损所影响到的参数上显示 出重要差异。在HFD+CA处理组中，观察到大量肝细胞坏死。该组织学观察与以上描述的血 液肝酶SGOT和SGPT的水平升高相关联。
[0311] 表1归纳了肝脏切片的评分，所述评分根据取自Huang等人，Am J Gastroenterol 2005 ; 100:1072-1081的分期和分级NAFLD (非酒精性脂肪肝病）的改良的Brunt标准 (Modified Brunt Criteria of Staging and Grading NAFLD)进行，如在以下表2 中描述。
[0312] 表1-肝脏切片的评分
[0315] *且巨核的（megakarya)
[0316] w卵圆细胞增殖
[0317] C =对照，HFD =高脂肪，CA =胆酸，CDCArg =鹳脱氧胆酸-精氨酸乙酯
[0318] 表2-分期和分级NAFLD的改自的Brunt标准
[0319]
[0321] 实施例3-在喂畲高脂肪饮畲（HFD)的小鼠中，在肝脏脂肪夺件发作后⑶CArg的 作用
[0322] 实验设计
[0323] 将小鼠随机的分成两个饮食组：
[0324] 1)对照饮食：低脂肪饮食（LFD)，16 %卡路里来自脂肪（η = 5);
[0325] 2)高脂肪饮食（HFD) :60%卡路里来自脂肪（主要是棕榈硬脂）（η = 16)。
[0326] 为了确定在肝脏脂肪变性发作后CDCArg的作用，首先将小鼠用HFD处理10周以 发展肝脏脂肪积累。随后，将喂食HFD的小鼠分成两个相等的组（在每个组中n = 8) :(a) 继续之前的HFD处理，及（b)HFD+⑶CArg 0.5% w/w。在实验的该部分，小鼠是成对喂食的 (15. 5kCal/天每鼠）。LFD对照组每天每鼠平均消耗相同量的卡路里。用⑶CArg处理的时 间段是四（4)周。评估食物消耗和增重。
[0327] MM.
[0328] -重量和代谢：如预期的，消耗HFD 10周导致总体重增加。然而，虽然在继续消 耗HFD持续另外4周的小鼠中体重进一步增加，但是将CDCArg补充到HFD防止了该增重 (图IOa)。在HFD+⑶CArg组中，与HFD组相比，脂肪组织重量也实质性地降低（图IOb)。 为了评价CDCArg对睾丸吸收的影响，在CDCArg消耗之前和之后测量粪便脂质含量。在 第9-10和12-13周期间在收集粪便后，使用Folch' s方法（Folch等人，1957, J Biol