h去除碱溶性木质素，过滤得预处理后的莲纤维；取5g预处理后的莲纤维装入锥形瓶，加入100mL蒸馏水，用玻璃棒搅拌均匀使莲纤维完全分散，再加入0.5g溴化钠和lg次氯酸钠，并用质量浓度为30%的羟甲基壳聚糖溶液调节pH至9，于常温下反应80min，过滤后将滤渣放入恒温干燥器干燥后得到纳米莲纤维；称取5g纳米莲纤维和10g氧化海藻酸钠倒入500mL去离子水中，放置在磁力搅拌器上，先以500r/min的转速搅拌30s，再降低转速至300r/min，在搅拌状态下加入20mL质量浓度为10%的氯化钙溶液作交联剂，持续搅拌lh后经真空冻干机于-10°C下干燥得到一种组织工程多孔支架材料。
[0011]本发明的具体应用方法:用本发明制得的组织工程多孔支架材料制成仿真皮肤，并将其置于模拟体液环境中，观察其失重情况，经检验，2周后多孔材料的降解率达到60%，测其断裂伸长率为8.5%，与人体皮肤断裂伸长率的9.5%类似，且与细胞具有良好的相容性。
[0012]实例2
取10?15g海藻酸钠粉末放入500mL烧杯中，加入250mL去离子水，放置在磁力搅拌机上，以350r/min的转速搅拌15min，使海藻酸钠完全溶解，得到海藻酸钠溶液；向上述海藻酸钠溶液中缓慢滴加55mL质量浓度为30%的高碘酸钠溶液，控制滴加速度使其25min内滴加完毕，再用质量浓度为10%的乙酸溶液调节pH至4，放置在避光处摇床振荡反应4h ;待避光完成后，向上述烧杯中继续加入15mL乙二醇终止氧化反应，并加入13g氯化钠，直至无沉淀物产生，过滤得到沉淀物后，分别用无水乙醇和去离子水冲洗4次，放置在烘箱中以108°C干燥lh得氧化海藻酸钠；称取6g亚氯酸钠倒入600mL去离子水中，继续加入13g莲纤维，放置在磁力搅拌机上，以300r/min的转速搅拌35min后移入水浴锅中，升温至65°C，并将5mL质量浓度为80%的乙酸分5次滴入，以去除酸性木质素，过滤后将滤渣用去离子水冲洗6次，干燥；取8g上述洗涤后的滤渣倒入质量浓度为10%的氢氧化钾溶液中，于常温下静置反应8h后，油浴升温至80°C保温反应3h去除碱溶性木质素，过滤得预处理后的莲纤维；取7g预处理后的莲纤维装入锥形瓶，加入150mL蒸馏水，用玻璃棒搅拌均匀使莲纤维完全分散，再加入0.7g溴化钠和lg次氯酸钠，并用质量浓度为30%的羟甲基壳聚糖溶液调节pH至9，于常温下反应85min，过滤后将滤渣放入恒温干燥器干燥后得到纳米莲纤维；称取5g纳米莲纤维和llg氧化海藻酸钠倒入500mL去离子水中，放置在磁力搅拌器上，先以550r/min的转速搅拌40s，再降低转速至350r/min，在搅拌状态下加入25mL质量浓度为10%的氯化钙溶液作交联剂，持续搅拌lh后经真空冻干机于-10°C下干燥得到一种组织工程多孔支架材料。
[0013]本发明的具体应用方法:用本发明制得的组织工程多孔支架材料制成仿真皮肤，并将其置于模拟体液环境中，观察其失重情况，经检验，2周后多孔材料的降解率达到65%，测其断裂伸长率为8.8%，与人体皮肤断裂伸长率的9.5%类似，且与细胞具有良好的相容性。
[0014]实例3
取15g海藻酸钠粉末放入500mL烧杯中，加入300mL去离子水，放置在磁力搅拌机上，以400r/min的转速搅拌20min，使海藻酸钠完全溶解，得到海藻酸钠溶液；向上述海藻酸钠溶液中缓慢滴加60mL质量浓度为30%的高碘酸钠溶液，控制滴加速度使其30min内滴加完毕，再用质量浓度为10%的乙酸溶液调节pH至5，放置在避光处摇床振荡反应5h ;待避光完成后，向上述烧杯中继续加入20mL乙二醇终止氧化反应，并加入15g氯化钠，直至无沉淀物产生，过滤得到沉淀物后，分别用无水乙醇和去离子水冲洗5次，放置在烘箱中以110°C干燥2h得氧化海藻酸钠；称取7g亚氯酸钠倒入600mL去离子水中，继续加入15g莲纤维，放置在磁力搅拌机上，以400r/min的转速搅拌40min后移入水浴锅中，升温至70°C，并将6mL质量浓度为80%的乙酸分6次滴入，以去除酸性木质素，过滤后将滤渣用去离子水冲洗7次，干燥；取10g上述洗涤后的滤渣倒入质量浓度为10%的氢氧化钾溶液中，于常温下静置反应9h后，油浴升温至85°C保温反应4h去除碱溶性木质素，过滤得预处理后的莲纤维；取8g预处理后的莲纤维装入锥形瓶，加入200mL蒸馏水，用玻璃棒搅拌均匀使莲纤维完全分散，再加入lg溴化钠和2g次氯酸钠，并用质量浓度为30%的羟甲基壳聚糖溶液调节pH至10，于常温下反应90min，过滤后将滤渣放入恒温干燥器干燥后得到纳米莲纤维；称取6g纳米莲纤维和12g氧化海藻酸钠倒入500mL去离子水中，放置在磁力搅拌器上，先以600r/min的转速搅拌50s，再降低转速至400r/min，在搅拌状态下加入30mL质量浓度为10%的氯化钙溶液作交联剂，持续搅拌2h后经真空冻干机于-10°C下干燥得到一种组织工程多孔支架材料。
[0015]本发明的具体应用方法:用本发明制得的组织工程多孔支架材料制成仿真皮肤，并将其置于模拟体液环境中，观察其失重情况，经检验，3周后多孔材料的降解率达到70%，测其断裂伸长率为9.0%，与人体皮肤断裂伸长率的9.5%类似，且与细胞具有良好的相容性。
【主权项】
1.一种组织工程多孔支架材料的制备方法，其特征在于具体制备步骤为: (1)取10?15g海藻酸钠粉末放入500mL烧杯中，加入200?300mL去离子水，放置在磁力搅拌机上，以300?400r/min的转速搅拌10?20min，使海藻酸钠完全溶解，得到海藻酸钠溶液； (2)向上述海藻酸钠溶液中缓慢滴加50?60mL质量浓度为30%的高碘酸钠溶液，控制滴加速度使其20?30min内滴加完毕，再用质量浓度为10%的乙酸溶液调节pH至4?5，放置在避光处摇床振荡反应3?5h ; (3)待避光完成后，向上述烧杯中继续加入10?20mL乙二醇终止氧化反应，并加入10?15g氯化钠，直至无沉淀物产生，过滤得到沉淀物后，分别用无水乙醇和去离子水冲洗3?5次，放置在烘箱中以105?110°C干燥1?2h得氧化海藻酸钠； (4)称取6?7g亚氯酸钠倒入600mL去离子水中，继续加入10?15g莲纤维，放置在磁力搅拌机上，以200?400r/min的转速搅拌30?40min后移入水浴锅中，升温至60?70°C，并将3?6mL质量浓度为80%的乙酸分3?6次滴入，以去除酸性木质素，过滤后将滤渣用去离子水冲洗5?7次，干燥； (5)取5?10g上述洗涤后的滤渣倒入质量浓度为10%的氢氧化钾溶液中，于常温下静置反应7?9h后，油浴升温至75?85°C保温反应3?4h去除碱溶性木质素，过滤得预处理后的莲纤维； (6)取5?8g预处理后的莲纤维装入锥形瓶，加入100?200mL蒸馏水，用玻璃棒搅拌均匀使莲纤维完全分散，再加入0.5?lg溴化钠和1?2g次氯酸钠，并用质量浓度为30%的羟甲基壳聚糖溶液中和pH至9?10，于常温下反应80?90min，过滤后将滤渣放入恒温干燥器干燥后得到纳米莲纤维； (7)称取5?6g纳米莲纤维和10?12g氧化海藻酸钠倒入500mL去离子水中，放置在磁力搅拌器上，先以500?600r/min的转速搅拌30?50s，再降低转速至300?400r/min，在搅拌状态下加入20?30mL质量浓度为10%的氯化钙溶液作交联剂，持续搅拌1?2h后经真空冻干机于-10°C下干燥得到一种组织工程多孔支架材料。
【专利摘要】本发明涉及一种组织工程多孔支架材料的制备方法，属于医疗材料制备领域。该方法以生物相容性良好的海藻酸钠和莲纤维为原料，将海藻酸钠氧化并使莲纤维纳米化，经羟甲基壳聚糖交联，真空冻干制得多孔支架材料，既解决了高分子生物材料生物相容性差的缺陷，也弥补了纯海藻酸钠作为组织材料力学性能差，降解缓慢的不足。本发明制的多孔材料具有良好的生物可降解性，在细胞生长繁殖的同时多孔支架材料同步降解，且降解产物无毒无害；具有较高的孔隙率和比表面积，以适于细胞的點附和生长、细胞间的信号传导、养分传送、以及降解产物和新陈代谢产物的排出。
【IPC分类】A61L27/58, A61L27/36, C08J3/24, C08B37/04, C08J9/28, A61L27/56, A61L27/20, A61L27/60
【公开号】CN105418961
【申请号】CN201510877237
【发明人】丁玉琴, 林大伟
【申请人】丁玉琴
【公开日】2016年3月23日
【申请日】2015年12月3日