量107CFU、脂肪酶酶活性5100U/ml、花生油植物油含量以重量计0.1 %的发酵液中加入为发酵液体积35 %的正丙醇，搅拌均勾，接着使用由S igma台式离心机，在室温与离心力6200g的条件下进行离心分离5min，分离成固相、重相与轻相。所述的固相与轻液弃去。从加入正丙醇起至离心分离止的时间是0.9h。
[0046]将其重相转移到一种容器中，按照以克计载体重量与以毫升计重相的比是7:100，往所述重相中加入80目花生壳粉载体，同时加入为载体重量42%的磷酸钙pH调节剂，以达至IJpH 6.5，然后使用由无锡市现代喷雾干燥设备有限公司公司销售的喷雾干燥设备在其进出口温度分别为140°C与100°C的条件下进行干燥，于是得到酶活性为21653U/g的脂肪酶粉末，酶活性损失率=(理论酶活-喷雾干燥后酶活性)/理论酶活，本实施例中脂肪酶的酶活损失率为15.08%(理论酶活计算为51001]/1111 X 1000^200 = 25500U/g)。
[0047]实施例3:从含植物油的微生物发酵液中提取脂肪酶
[0048]该实施例的实施步骤如下:
[0049]往解脂亚罗酵母含量107CFU、脂肪酶酶活性5100U/ml、菜籽油植物油含量以重量计1.0 %的发酵液中加入为发酵液体积50 %的正丙醇，搅拌均勾，接着使用由S igma台式离心机，在室温与离心力6500g的条件下进行离心分离5min，分离成固相、重相与轻相。所述的固相与轻液弃去。从加入正丙醇起至离心分离止的时间是1.0h。
[0050]将其重相转移到一种容器中，按照以克计载体重量与以毫升计重相的比是8:100，往所述重相中加入60目玉米芯粉载体，同时加入为载体重量30%的磷酸钙pH调节剂，以达到PH 6.8，然后使用无锡市现代喷雾干燥设备有限公司公司以商品名销售的喷雾干燥设备在其进出口温度分别为140°C与100°C的条件下进行干燥，于是得到酶活性为22582U/g的脂肪酶粉末，酶活性损失率=(理论酶活-喷雾干燥后酶活性)/理论酶活，本实施例中脂肪酶的酶活损失率为11.4% (理论酶活计算为5100U/ml X 1000 +200 = 25500U/g)。
[0051 ]实施例4:从含植物油的微生物发酵液中提取脂肪酶
[0052]该实施例的实施步骤如下:
[0053]往解脂亚罗酵母含量106CFU、脂肪酶酶活性5100U/ml、豆油植物油含量以重量计
0.7%的发酵液中加入为发酵液体积45%的正丙醇，搅拌均匀，接着使用sigma台式离心机，在室温与离心力7000g的条件下进行离心分离5min，分离成固相、重相与轻相。所述的固相与轻液弃去。从加入正丙醇起至离心分离止的时间是0.8h。
[0054]将其重相转移到一种容器中，按照以克计载体重量与以毫升计重相的比是9:100，往所述重相中加入80目玉米芯粉载体，同时加入为载体重量45%的磷酸钙pH调节剂，以达到PH 7.5，然后使用无锡市现代喷雾干燥设备有限公司公司以商品名销售的喷雾干燥设备在其进出口温度分别为140°C与100°C的条件下进行干燥，于是得到酶活性为22521U/g的脂肪酶粉末，酶活性损失率=(理论酶活-喷雾干燥后酶活性)/理论酶活，本实施例中脂肪酶的酶活损失率为11.68%(理论酶活计算为51001]/1111 X 1000 +200 = 25500U/g)。
[0055]实施例5:从含植物油的微生物发酵液中提取脂肪酶
[0056]该实施例的实施步骤如下:
[0057]往解脂亚罗酵母含量107CFU、脂肪酶酶活性5100U/ml、花生油植物油含量以重量计0.5 %的发酵液中加入为发酵液体积38 %的正丙醇，搅拌均勾，接着使用sigma台式离心机，在室温与离心力6800g的条件下进行离心分离5min，分离成固相、重相与轻相。所述的固相与轻液弃去。从加入正丙醇起至离心分离止的时间是0.9h。
[0058]将其重相转移到一种容器中，按照以克计载体重量与以毫升计重相的比是8:100，往所述重相中加入70目花生壳粉载体，同时加入为载体重量35%的磷酸钙pH调节剂，以达至IJpH 7.0，然后使用由无锡市现代喷雾干燥设备有限公司公司以商品名销售的喷雾干燥设备在其进出口温度分别为140°C与100°C的条件下进行干燥，于是得到酶活性为21573U/g的脂肪酶粉末，酶活性损失率=(理论酶活-喷雾干燥后酶活性)/理论酶活，本实施例中脂肪酶的酶活损失率为15.6%(理论酶活计算为51001]/1111\1000 + 200 = 255001]/8)。
[0059]实施例6:从含植物油的微生物发酵液中提取脂肪酶
[0060]该实施例的实施步骤如下:
[0061]往解脂亚罗酵母含量106CFU、脂肪酶酶活性5100U/ml、豆油与花生油混合物(重量比I: I)植物油含量以重量计0.8%的发酵液中加入为发酵液体积48%的正丙醇，搅拌均匀，接着使用sigma台式高速离心机，在室温与离心力6900g的条件下进行离心分离5min，分离成固相、重相与轻相。所述的固相与轻液弃去。从加入正丙醇起至离心分离止的时间是
0.3h0
[0062]将其重相转移到一种容器中，按照以克计载体重量与以毫升计重相的比是8:100，往所述重相中加入70目玉米芯粉载体，同时加入为载体重量40%的磷酸钙pH调节剂，以达到PH 7.4，然后使用无锡市现代喷雾干燥设备有限公司公司以商品名销售的喷雾干燥设备在其进出口温度分别为140°C与100°C的条件下进行干燥，于是得到酶活性为25499U/g的脂肪酶粉末，与理论酶活性相比无差异，因此本实施例脂肪酶提取干燥过程无酶活损失。
[0063]对比实施例1:现有技术乙醇-丙酮提取脂肪酶
[0064]取250ml脂肪酶活性为5100U/ml的解脂亚罗酵母发酵液，在3000转/min下离心I Omin，得到182ml上清液。往上清液中加入其体积3倍的浓度以体积计95 %乙醇溶液(548ml，-18°C)，加完全部乙醇后，在冰箱冷冻室在温度_18°C下冷却I小时，然后在2000转/min条件下离心5min，倾出500ml上清液，得到的沉淀用浓度以体积计95 %冷乙醇溶液洗涤，乙醇溶液用量是上述上清液体积的50%，加入约250ml乙醇，再离心并重复3次，直到倾出的上清成浅黄色，然后用温度_18°C冰冻的丙酮洗涤，丙酮用量为乙醇体积的50%(125ml)，再离心并重复2次，直到丙酮上清液无色，真空脱丙酮得到脂肪酶粉末78克，测得脂肪酶粉末的酶活性为32000U/g，酶活性损失率=(理论总酶活-喷雾干燥后酶活性)/理论总酶活，本对比实施例中酶活损失率为(5100 X 1000-32000 X 78)+5100 X 1000 = 51 %。
【主权项】
1.一种从含植物油的微生物发酵液中提取脂肪酶的方法，其特征在于该方法的步骤如下: 往含植物油的微生物发酵液中加入为发酵液体积35?50%的正丙醇，搅拌均匀，接着米用尚心分尚法分尚成固相、重相与轻相;所述的固相与轻液弃去； 所述的重相转移到一种容器中，按照以克计载体重量与以毫升计重相的比是7?10:100，往所述重相中加入玉米芯粉或花生壳粉载体，同时加入磷酸钙pH调节剂以达到pH6.5?7.5，然后进行喷雾干燥，得到脂肪酶粉末。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的微生物发酵液是采用常规发酵方法获得的解脂亚罗酵母含量为16?17CFU的发酵液。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于在所述微生物发酵液中的脂肪酶酶活性是5100U/ml 以上。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的植物油是豆油、花生油或菜籽油；所述植物油的含量是以微生物发酵液重量计0.1?1.0%。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于从加入正丙醇起至离心分离止的时间是小于Ih06.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述离心分离是在室温与离心力6000g以上的条件下进行的。7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于在重相中的脂肪酶活性是所述微生物发酵液活性的86?92 %。8.根据权利要求1所述的脂肪酶，其特征在于磷酸钙pH调节剂的添加量是载体重量的30 ?45%。9.根据权利要求1所述的脂肪酶，其特征在于所述载体的粒度是60?80目。10.根据权利要求1-9中任一项权利要求所述方法得到的脂肪酶，其特征在于它的酶活性为 20400 ?25500U/g。
【专利摘要】本发明涉及一种从含植物油的微生物发酵液中提取脂肪酶的方法，该方法包括往含植物油的微生物发酵液中加入正丙醇，搅拌，离心分离，往得到的重相中加入玉米芯粉或花生壳粉载体，同时加入磷酸钙pH调节剂，然后进行喷雾干燥，得到脂肪酶粉末。本发明从含油发酵液中提取脂肪酶的方法操作简单，脂肪酶酶活损失低于20％，较现有乙醇-丙醇提取相比活性损失降低30％。
【IPC分类】C12N9/20
【公开号】CN105543194
【申请号】CN201610045862
【发明人】朱瑞艳, 葛振宇, 杨娜, 徐志文
【申请人】领先生物农业股份有限公司
【公开日】2016年5月4日
【申请日】2016年1月22日