适体的细胞结合是神经胶质或神经元细胞特异 性的。如所显示的，该适体不标记组织样品中的化rkinje细胞(A图中未标记的）、内皮细胞 (B图）或脑膜瘤细胞(C图）。
[0114] 实验结果3
[0115] 如下调查了被本发明的适体结合的配体。
[0116] 两种人神经胶质瘤细胞系（1321N1:II级星形细胞瘤；及U87MG:IV级胶质母细胞 瘤)的细胞如之前提及的来培养，并然后裂解W获得它们表达的蛋白的提取物。
[0117] 然后将运些提取物的样品与SEQ ID NO: 2的适体或SEQ ID NO: 1的适体一起在允 许适体与其相应的配体结合的条件下解育。然后将能够与适体结合的经标记的珠加入至该 解育混合物中。
[0118] 然后允许珠、适体和与适体结合的配体沉淀并被收集(被称为"免疫沉淀""IP")。 包含提取物的未结合蛋白的上清液(被称为"输入物"）也被保留。
[0119] 然后将免疫沉淀物和输入物单独地处理，并通过SDS聚丙締酷胺凝胶电泳（SDS- PAGE)分离蛋白。使用考马斯蓝对凝胶染色W允许蛋白条带可视化。示例性的染色凝胶的图 像在图7和8中示出。
[0120] 然后将包含条带的凝胶的部分切割并处理，W允许通过质谱法对存在的蛋白进一 步分析，所述条带包含已通过免疫沉淀从提取物分离的蛋白。被移除用于另外的调查的区 域的示例性实例在图7和图8中示出。
[0121] 在该图7中/'SA44I护和"SA43I护分别指示包含与沈Q ID N0:1和沈Q ID N0:2的 适体一起解育后产生的免疫沉淀物的泳道。标记"输入物Γ和"输入物2"的泳道包含来自在 免疫沉淀之后剩余的相应上清液的蛋白。
[0122] 通过质谱分析产生的结果在图11和12中示出。在此，具体提供了在通过质谱法进 一步分析的凝胶的区域的每个中鉴定出的前五个显著蛋白。已知鉴定的蛋白形成Ku异二聚 体或与Ku异二聚体缔合，因此将该异二聚体的成员化U70和/或Ku80)鉴定为适体SA43(SEQ ID NO:2)的配体。
[0123] 被适体SA44(SEQ ID N0:1)结合的配体的相应分析的数据未示出。
[0124] 结论及另外的研究
[01巧]本发明的适体，特别是SA44适体和SA43适体（也被称为化44和化43)在与U87Mg细 胞的结合选择性上与SVGpl2细胞相比显示出显著的差异(p<0.05)。
[01%] SA43(GL43)适体在对Ι、ΙΠ 和IV级神经胶质瘤组织的结合选择性上与非癌性脑组 织相比显示出显著的差异(ρ<〇. 05)。
[0127] 另外的研究将包括SA43(GL43)适体与不同的生物标志物诸如GFAP和CD31的共定 位，W证实它们在组织切片中的定位。
[01%]另外的研究还将包括产生针对II级神经胶质瘤的适体。
[0129] 将研究与适体缀合的药物，W探索在将药物祀向递送至癌细胞中的可能的应用。
[0130] 序列信息
[0131]
[0132] 对于术语使用的注释：SEQ ID NO: 1、2和3的本发明的适体初始分别被称为化44、 GL43和化56。然后发明人确定运些相同的命名之前已被其他人应用于不同的适体（即不共 有W上列出的序列的适体），并且因此SEQ ID N0:l、2和3适体随后(且优选地)分别被称为 SA44、SA43和SA56，W避免混淆。
【主权项】
1. 一种适体或该适体的配体结合片段，所述适体包含选自由以下组成的组的核酸序 列：SEQ ID N0:6、SEQ ID N0:7、SEQ ID N0:8、SEQ ID N0:9、SEQ ID N0:10、SEQ ID N0:11、 SEQIDN0:1、SEQIDN0:2和SEQIDN0:3。2. 根据权利要求1所述的适体或其配体结合片段，所述适体或其配体结合片段与抗癌 剂缔合。3. 根据权利要求2所述的适体或其配体结合片段，其中所述适体或配体结合片段和所 述抗癌剂彼此缀合。4. 根据权利要求2所述的适体，其中所述适体和所述抗癌剂彼此间接地缔合。5. 根据权利要求4所述的适体，其中所述抗癌剂与选自由以下组成的组的载体缔合:纳 米颗粒(诸如纳米壳)和树枝状聚合物。6. 根据权利要求2至5中任一项所述的适体或其配体结合片段，其中所述抗癌剂选自由 以下组成的组:放射性核素;纳米颗粒，诸如纳米壳;纳米笼;基因沉默剂；以及细胞毒性的 化学物质。7. 根据权利要求6所述的适体，其中所述基因沉默剂选自由以下组成的组:siRNA分子、 核酶和反义寡核苷酸。8. 根据权利要求7所述的适体，其中所述基因沉默剂阻止或抑制Ku70和/或Ku80的表 达。9. 根据前述权利要求中任一项所述的适体或其配体结合片段，所述适体或其配体结合 片段与检测部分缔合。10. 根据权利要求9所述的适体或其配体结合片段，其中所述检测部分选自由以下组成 的组:放射性核素、染料、荧光团、纳米颗粒(诸如纳米壳）、纳米笼和显色剂。11. 根据前述权利要求中任一项所述的适体，所述适体由选自由以下组成的组的核酸 序列组成：SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID N0:10、SEQ ID NO:ll、SEQIDNO:l、SEQIDNO:2和SEQIDNO:3。12. -种适体或该适体的配体结合片段，所述适体包含SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 1或 SEQ ID NO:3,所述适体或该适体的配体结合片段与阻止或抑制Ku70和/或Ku80的基因表达 的基因沉默剂缔合。13. 根据权利要求12所述的适体，其中所述基因沉默剂选自由以下组成的组：siRNA分 子、核酶和反义寡核苷酸。14. 根据前述权利要求中任一项所述的适体或其配体结合片段，用于在预防和/或治疗 癌症中使用。15. 根据权利要求14所述的用于使用的适体，或根据权利要求14所述的用于使用的适 体的配体结合片段，其中待预防和/或治疗的癌症是脑癌。16. 根据权利要求15所述的用于使用的适体，或根据权利要求15所述的用于使用的适 体的配体结合片段，其中待预防和/或治疗的所述脑癌选自由以下组成的组:神经胶质瘤、 脑膜瘤、垂体腺瘤和神经鞘肿瘤。17. 根据权利要求16所述的用于使用的适体，或根据权利要求16所述的用于使用的适 体的配体结合片段，其中待预防和/或治疗的所述脑癌是神经胶质瘤。18. 根据权利要求1至17中任一项所述的适体的配体结合片段，其中所述片段保留结合 与癌细胞相关的配体的能力。19. 一种药物组合物，所述药物组合物包含根据权利要求1至17中任一项所述的适体或 其配体结合片段、和药学上可接受的赋形剂。20. 根据权利要求19所述的药物组合物，用于在预防和/或治疗癌症中使用。21. 根据权利要求20所述的用于使用的药物组合物，其中待预防和/或治疗的所述癌症 是脑癌。22. 根据权利要求21所述的用于使用的药物组合物，其中待预防和/或治疗的所述脑癌 选自由以下组成的组:神经胶质瘤、脑膜瘤、垂体腺瘤和神经鞘肿瘤。23. 根据权利要求22所述的用于使用的药物组合物，其中待预防和/或治疗的所述脑癌 是神经胶质瘤。24. 根据权利要求19至23中任一项所述的药物组合物，所述药物组合物被配制为以所 述药物组合物的剂量单位提供治疗有效量的所述适体。25. 根据权利要求19至24中任一项所述的药物组合物，所述药物组合物被配制为提供 治疗有效量的与所述适体缔合的抗癌剂。26. -种预防和/或治疗受试者中的癌症的方法，所述方法包括将治疗有效量的根据权 利要求19至25中任一项所述的药物组合物施用至需要其的受试者。27. -种预防和/或治疗受试者中的癌症的方法，所述方法包括将治疗有效量的根据权 利要求1至18中任一项所述的适体或其配体结合片段施用至需要其的受试者。28. -种寡核苷酸，所述寡核苷酸与SEQ ID NO: 1至3或6至11中的任一个共有至少75% 的序列同一性，其中所述寡核苷酸保留与SEQ ID NO: 1至3或6至11的适体相同的结合特性。29. 根据权利要求28所述的寡核苷酸，所述寡核苷酸与SEQ ID NO: 1至3或6至11中的任 一个共有至少95%的序列同一性，其中所述寡核苷酸保留与SEQ ID NO: 1至3或6至11的适 体相同的结合特性。
【专利摘要】提供了能够结合与癌细胞相关的配体的适体。所述配体可特别地与脑癌，诸如神经胶质瘤相关。所述适体可在治疗上用于预防和/或治疗此类癌症。适体可与抗癌剂或与检测部分缔合。还提供了采用此类适体的药物组合物和治疗方法。
【IPC分类】C12N15/115
【公开号】CN105555956
【申请号】CN201480039093
【发明人】丽莎·肖, 克莱尔·劳伦斯, 简·阿尔德
【申请人】中央兰开夏大学
【公开日】2016年5月4日
【申请日】2014年7月9日
【公告号】CA2916974A1, EP3019613A1, US20160152982, WO2015004412A1