醇复溶后，加入无水碳酸钠15g，醋酸锌10g，75°C反应8h;用氨水调节pH至9,静置沉淀20小 时，收集沉淀用乙醇洗涤后，60 °C真空干燥5小时，制得45g的黄酮苷元并茶皂苷元锌配合 物。
[0047] 产物同实施例1同样检测，结果与实施例1 一致。
[0048] 实施例6
[0049]将脱脂油茶籽柏1kg，加入18L的体积分数70 %的乙醇水溶液，80 °C回流提取2.5小 时，过滤，滤液加入盐酸至HC1的终浓度4.5mol/L，75°C水解时间8小时;65°C和0.03大气压 下减压浓缩至滤液体积的1/3,加入浓缩液体积5倍水沉淀，沉淀物用其等倍质量的无水乙 醇复溶后，加入无水碳酸钠17g，醋酸锌14g，80°C反应9h，用氨水调节pH至9,静置沉淀12小 时，收集沉淀用乙醇洗涤后，80°C真空干燥3.5小时，制得34g的黄酮苷元并茶皂苷元锌配合 物。
[0050]产物同实施例1同样检测，结果与实施例1 一致。
[0051 ] 实施例7
[0052] 取实施例1~6的黄酮苷元并茶皂苷元锌配合物10g，与乳糖、结晶纤维素按3: 7混 合物30g、l%硬脂酸镁混合均匀，经压片机制成每片200mg的片剂。
[0053] 实施例8
[0054] 称取实施例1~6制得的黄酮苷元并茶皂苷元锌配合物10g，加入药用微晶纤维素 30g，混合均匀，湿法制粒，用乙醇调节，制得颗粒松散过20目筛，晾干。干燥后填充胶囊，即 得黄酮苷元并茶阜苷元锌配合物的胶囊剂。
[0055] 实施例9
[0056] 取实施例1~6的黄酮苷元并茶皂苷元锌配合物10g，用多乙氧基醚1000mL溶解后， 灌入小瓶，制成注射针剂。
[0057] 实施例10
[0058] 称取实施例1~6制得的黄酮苷元并茶皂苷元锌配合物10g，加入50g PEG6000,加 热至60°C熔化后混合均匀，置于滴丸机内，用液体石蜡致冷，滴丸。冷却即得黄酮苷元并茶 皂苷元锌配合物的滴丸剂。
[0059] 本发明的黄酮苷元并茶皂苷元锌配合物具有显著神经保护作用，通过以下实验得 以证实。
[0060] (1)对谷氨酸(Glu)损伤大鼠海马组织的保护性实验
[0061 ] 方法:取4~5月龄雄性Wistar大鼠40只，体重(200±20)g，随机分为假手术组、Glu 损伤组、黄酮苷元并茶皂苷元锌配合物组、山萘酚组、茶皂素组每组8只。给药组预先灌胃给 药l〇d，其余组灌胃等量生理盐水。鼠经尾静脉注射硫喷妥钠麻醉后，固定于脑立体定位仪， 切开颜顶正中皮肤及骨膜，清晰暴露前肉，在前肉后〇.8mm，矢状缝右侧旁1.5mm处钻开卢页 骨，用微量注射器行侧脑室注射Glu4yL( lmg/kg)，进针深度3.8mm，留针5min。取针后观察大 鼠行为学改变，以出现癫痫样发作的表现为模型成功。注射Glu溶液2h后，将大鼠断头处死， 迅速取全脑，分离出海马，称重后加入生理盐水配制成1:10(重量体积比）的海马组织匀浆。 取各组海马组织匀浆，严格按照试剂盒说明书操作，用多功能酶标仪检测其中MDA含量、S0D 和GSH-Px活性。结果见表1。
[0062] 结果:侦_室注射Glu可引起大鼠海马组织中MDA含量升高，S0D和GSH-Px的活性降 低(p〈0.05);与Glu损伤组比较，药物组MDA含量均降低，S0D和GSH-Px的活性均升高，黄酮苷 元并茶皂苷元锌配合物组变化最大，达显著水平(P〈〇. 01 )，表明黄酮苷元并茶皂苷元锌配 合物可提高脑内抗氧化酶的活性而拮抗Glu的神经毒性，具有神经保护作用，其效果优于山 萘酚和茶皂素组。
[0063] 表1黄酮苷元并茶皂苷元锌配合物对海马组织中抗氧化酶活性影响彳:SD )
[0064]
[0065] (2)对MPTP所致小鼠多巴胺神经元损伤的保护实验
[0066] 方法:取5~6月龄雄性小鼠50只，体重(20 ± 2)g，随机分为正常对照组、MPTP组、黄 酮苷元并茶皂苷元锌配合物、山萘酚组、茶皂素组，每组10只。给药组预先腹腔注射给药3d， 每天1次，其余组腹腔注射等量生理盐水。第4d除正常组外，其它均注射MPTP溶液4mg/k g(37d 后，将小鼠断头处死，迅速取全脑，分离出纹状体，称重后加入PE缓冲液配制成1:10(重量体 积比）的组织匀浆。匀浆液离心后，经HPLC测定多巴胺(DA)含量。结果见表2。
[0067] 结果:MPTP组DA含量较正常组显著降低(p〈0.05)，表明MPTP造成了多巴胺神经元 的损伤。黄酮苷元并茶皂苷元锌配合物给药组DA含量与MPTP照组比显著提高(p〈0.05)，说 明黄酮苷元并茶皂苷元锌配合物对MPTP所致多巴胺神经元的损伤有较好的保护作用。
[0068] 表2黄酮苷元并茶皂苷元锌配合物对纹状体DA含量的影响(I±SD )
[0069]
【主权项】
1. 一种茶巧黄酬巧元并茶皂巧元锋配合物，其特征在于:其结构式如下式所示：2. 根据权利要求1所述茶巧黄酬巧元并茶皂巧元锋配合物的制备方法，其特征在于:具 体包括W下步骤:将脱脂茶巧巧用乙醇水溶液提取，过滤，向滤液中加酸水解，浓缩，得到浓 缩液；向浓缩液中加入沉淀剂进行沉淀，得到沉淀物;将沉淀物溶解，加入无水碳酸钢和锋 盐，回流反应，调节抑至8~10，静置沉淀，洗涂，干燥，即得茶巧黄酬巧元并茶皂巧元锋配合 物。3. 根据权利要求2所述茶巧黄酬巧元并茶皂巧元锋配合物的制备方法，其特征在于:所 述乙醇水溶液的体积分数为70~85% ;所述提取溫度为60~80°C，提取时间1~3小时;所述 水解溫度70~80°C，水解时间5~8小时;所述回流反应溫度70~80°C，反应时间为5~lOh。4. 根据权利要求2所述茶巧黄酬巧元并茶皂巧元锋配合物的制备方法，其特征在于:所 述乙醇水溶液的加入量与脱脂茶巧巧原料的液固比为（10~20)mL:lg;所述酸为盐酸;所述 盐酸加入滤液后肥1的终浓度为2~5mol/L。5. 根据权利要求2所述茶巧黄酬巧元并茶皂巧元锋配合物的制备方法，其特征在于:所 述无水碳酸钢加入量为脱脂茶巧质量的0.5~2%，所述锋盐加入量为脱脂茶巧质量的0.5 ~2 %;所述锋盐为醋酸锋。6. 根据权利要求2所述茶巧黄酬巧元并茶皂巧元锋配合物的制备方法，其特征在于:所 述沉淀物溶解是指向沉淀物中加入无水乙醇进行溶解，乙醇的用量与沉淀物质量相同。7. 根据权利要求2所述茶巧黄酬巧元并茶皂巧元锋配合物的制备方法，其特征在于:所 述浓缩的条件为于50~80°C和0.01~0.1个大气压下减压浓缩，所述浓缩液体积为滤液体 积的1/3;所述干燥的条件为50~80°C干燥3~6小时。8. 根据权利要求2所述茶巧黄酬巧元并茶皂巧元锋配合物的制备方法，其特征在于:所 述沉淀剂为水，沉淀剂的用量为浓缩液体积3~5倍;所述调节抑的物质为氨水;所述洗涂是 指采用乙醇进行洗涂;所述脱脂茶巧巧为脱脂茶叶巧巧或脱脂油茶巧巧的中一种。9. 根据权利要求1所述茶巧黄酬巧元并茶皂巧元锋配合物的应用，其特征在于:所述茶 巧黄酬巧元并茶皂巧元锋配合物用于制备具有神经保护作用药物制剂。10. 根据权利要求9所述茶皂巧元锋配合物的应用，其特征在于:所述药物制剂的剂型 为外用、口服或注射用药剂型的一种。
【专利摘要】本发明属于医药领域，公开了一种茶籽黄酮苷元并茶皂苷元锌配合物及其制法和用途。所述方法，具体包括以下步骤：将脱脂茶籽粕用乙醇水溶液提取，过滤，将滤液用酸水解，浓缩，将浓缩液沉淀，将沉淀物用乙醇复溶，加入无水碳酸钠、锌盐，回流反应，调节pH至8～10，静置沉淀，洗涤，真空干燥，即得茶籽黄酮苷元并茶皂苷元锌配合物。所述配合物具有显著保护神经细胞、防神经退化的效果，可作为新型抗神经退行性疾病药物的应用开发。
【IPC分类】C07J63/00, A61P25/28, C07F3/06, A61P25/00
【公开号】CN105566436
【申请号】CN201510962057
【发明人】叶勇, 杨谦
【申请人】华南理工大学
【公开日】2016年5月11日
【申请日】2015年12月17日