植酸钠或黄腐酸钾0. 2% (w/w); 余下量为碳酸钙和硅藻土载体，其中碳酸钙：硅藻土的重量份数比为1:5。
[0051] 实施例11 : 深绿木霉和解淀粉芽孢杆菌菌剂对番茄病毒病的盆栽防病试验。
[0052] 对所研制的深绿木霉和解淀粉芽孢杆菌菌剂进行预防番茄病毒病（CMV)的试验， 试验结果见表1。试验结果显示，深绿木霉和解淀粉芽孢杆菌菌剂对番茄病毒病的发生具有 较好的预防作用，深绿木霉和解淀粉芽孢杆菌复合菌剂及其单剂施用后接种CMV对CMV 有明显的预防作用，深绿木霉和解淀粉芽孢杆菌复合菌剂及深绿木霉、解淀粉芽孢杆单剂 预防效果分别为55. 66%，49. 75%，44. 83%。
[0053] 表1、深绿木霉和解淀粉芽孢杆菌菌剂预防番茄病毒病试验 Λ、」/7ΓΗ7Τ巾JP、J休卜母彳u/Β千收初才了巴个丁困
困7门疋!；1J A、J，由·刀母？ra y P、J'丨平7|'1^化防病 试验，试验结果见表2。试验结果显示，深绿木霉和解淀粉芽孢杆菌复合菌剂及其单剂处理 对CMV病毒有明显的钝化作用，深绿木霉和解淀粉芽孢杆菌复合菌剂及深绿木霉、解淀粉 芽孢杆单剂钝化防病效果分别为63. 16%，51. 88%，76. 77%。
[0054] 表2、深绿木霉和解淀粉芽孢杆菌菌剂对番茄病毒病的钝化作用试验
深绿木霉和解淀粉芽孢杆菌菌剂对番茄、辣椒病毒病田间防病试验。
[0055] 对所研制的深绿木霉和解淀粉芽孢杆菌菌剂进行番茄病毒病（TMV、CMV、TYLCV)和 辣椒病毒病（CMV)的田间防病试验，试验结果表明，深绿木霉和解淀粉芽孢杆菌菌剂500倍 液、750倍液和1000倍液，对番茄和辣椒病毒病的发生具有较好的防控作用，其田间防控病 毒病效果分别在52. 5%~85. 5%之间。
[0056] 实施例12 : 通过对番茄种子萌发试验，结果显示深绿木霉和解淀粉芽孢杆菌菌剂对番茄种子均有 较好的促进作用。在4d后清水对照番茄种子未见萌发，而由深绿木霉和解淀粉芽孢杆菌菌 剂、木霉菌剂和芽孢杆菌菌剂处理的番茄种子萌发率有显著提高，4d不同处理的萌发率分 别在 6. 67~43· 33%，20. 00~36· 67%，13. 33~40· 00%。
[0057] 经过5d后调查番茄种子的发芽率较对照亦有显著提高，清水对照种子萌发率 仅为33. 33%，而由深绿木霉和解淀粉芽孢杆菌菌剂、木霉菌剂和芽孢杆菌菌剂处理的番 茄种子萌发率有显著提高，5d不同处理的萌发率分别在56. 67~73. 33%，66. 67~80. 00%， 56. 67~73. 33%。其稀释10000倍液后，对番茄种子萌发有显著促进作用，深绿木霉和解淀粉 芽孢杆菌菌剂、木霉菌剂和芽孢杆菌菌剂处理的胚根分别为4. 77mm、5. 00mm和5. 03mm，而 清水对照胚根仅为2. 40mm。试验表明，木霉和芽孢杆菌菌剂对番茄等有很好的促进生长作 用。
[0058] 表3、木霉和芽孢杆菌菌剂对番茄种子萌发等的试验
【主权项】
1. 一株具有体外钝化、抑制侵染和诱导抗性作用的深绿木霉菌株，其特征在于该菌株 为深绿木霉Trl208( airoKiriofe)，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会 普通微生物中心，保藏号为CGMCCNo. 6828。2. -株具有体外钝化、抑制侵染和诱导抗性作用的解淀粉芽孢杆菌菌株，其特征在于 该菌株为解淀粉芽孢杆菌B1126 a野ioJi识/e/'acieft?)，保藏于中国微生物菌种 保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCCNo. 6827。3. -种深绿木霉和解淀粉芽孢杆菌菌剂，是以深绿木霉Trl208和解淀粉芽孢杆菌 B1126菌体为有效活性成分，其特征在于它是由保藏号为CGMCCNo. 6828的深绿木霉Trl208 (airoKiriofe)和保藏号为 CGMCCNo. 6827 的解淀粉芽抱杆菌 aazjio)的菌体和它的次生代谢物为有效活性成分，配以农业上可以接受的载 体以及菌体保护剂组成；其中有效活性成分为5X 109cfu/g ~2X lOlfu/g，菌体保护剂含 量为 0· 1~1% (w/w)。4. 权利要求3所述的深绿木霉和解淀粉芽孢杆菌菌剂，其中所述的菌体为深绿木霉的 分生孢子、菌丝和厚垣孢子的混合，以及解淀粉芽孢杆菌的菌体和芽孢；农业上可接受的载 体为：硅藻土、碳酸钙、水、小麦粉、木屑、高岭土、不饱和烃类一种或几种的混合物；所述的 菌体保护剂为黄原胶、蔗糖、腐植酸钠、黄腐酸钾、苯甲酸钠、丙酸钙、山梨酸钾一种或几种 的混合物。5. 权利要求2-4任一项所述的深绿木霉和解淀粉芽孢杆菌菌剂，其特征在于它是由下 述成分组成： 深绿木霉Trl208和解淀粉芽孢杆菌B1126含菌量为5X 109cfu/g ~2X 101Qcfu/g ; 黄原胶 〇· 02~0· 1% (w/w); 鹿糖 0· 05~0· 5% (w/w); 腐植酸钠或黄腐酸钾〇. 〇2~0. 2% (w/w); 苯甲酸钠或丙酸钙或山梨酸钾〇. 〇l~〇. 2% (w/w)。6. 余下量为碳酸钙和硅藻土或水载体，其中碳酸钙：硅藻土的重量份数比为1:2~5。7. 权利要求2-4任一项所述深绿木霉和解淀粉芽孢杆菌菌剂的制备方法，其特征在于 按如下的步骤进行： 1) 菌种活化和菌液制备：保藏号为CGMCCNo. 6828的深绿木霉Trl208 ( rricAoi/eiwa a iiwinVe )的菌株，在23~28 °C下，在PDA培养基中活化72h，备用；在23~28 °C下，在TO培 养液中震荡培养72~96h，培养后得到深绿木霉Trl208种子液； 保藏号为CGMCCNo.6827的解淀粉芽抱杆菌B1126 a野ioJi识/e/aciefts·) 的菌株，30~37°C下，在ΝΑ培养基中活化24h，备用；在30~37°C下，在ΝΑ培养液中震荡培养 24~48h，培养后得到解淀粉芽孢杆菌Β1126菌液； 所述的PDA培养基(或培养液）组成为：马铃薯200克、葡萄糖20克、琼脂15~20克 (培养液不添加)、蒸馏水1000毫升，自然pH ; 所述的ΝΑ培养基(或ΝΑ培养液）组成为：牛肉浸膏3g、蛋白胨5g、葡萄糖2. 5g、15~20 克(培养液不添加)、蒸馏水1000毫升，pH7±0. 5 ; 2) 固体发酵培养及菌粉的获得：在固体发酵培养基料中加入水20~45% (w/w)，初始pH 为6. 5~7. 5之间，高温灭菌，然后待温度降到30°C以下，接入步骤2)的深绿木霉Trl208种 子液，再在温度为20~30°C，间隔24~30h，定期搅拌的条件下发酵培养96~148h ;测定发酵培 养基料中菌体的数量，待发酵基料中孢子量达到109 cfu/g以上后停止发酵培养，培养物料 经常温干燥，采用万能粉碎机粉碎、过筛后成深绿木霉菌粉； 所述的固体发酵培养基料（w/w)的组成为：麦粉2~4%，麦麸12~18%，食用菌废料渣或/ 和木屑77. 1~84%，过磷酸钙0. 5~1%，尿素0. 2~0. 5%，蔗糖0. 2~0. 5%，润水后灭菌备用； 解淀粉芽孢杆菌B1126菌液经过喷雾干燥，获得解淀粉芽孢杆菌菌粉。8. 制备深绿木霉和解淀粉芽孢杆菌菌剂：深绿木霉Trl208和解淀粉芽孢杆菌B1126 菌粉；黄原胶〇. 〇2~0. 1% (w/w);蔗糖0. 05~0. 5% (w/w);腐植酸钠或黄腐酸钾0. 02~0. 2% (w/w);苯甲酸钠或丙酸f丐或山梨酸钾0. 01~0. 2% (w/w)。9. 余下量为碳酸钙和硅藻土或水载体，其中碳酸钙：硅藻土的重量份数比为1:2~5。10. 混合制备深绿木霉和解淀粉芽孢杆菌菌剂含菌量5X 10 9cfu/g ~2X K^cfu/g。11. 权利要求1、2所述深绿木霉Trl208和解淀粉芽孢杆菌B1126菌株作为制备防控茄 果类蔬菜病毒病菌剂应用。12. 权利要求1、2所述深绿木霉Trl208和解淀粉芽孢杆菌B1126菌株制备作为防控茄 果类蔬菜病毒病（TMV、CMV、TYLCV)菌剂中的应用。13. 权利要求1所述深绿木霉Tr 1208和解淀粉芽孢杆菌B1126菌株在制备作为促进植 物生长菌剂中的应用。
【专利摘要】本发明涉及一种防控茄果类蔬菜病毒病的木霉、芽孢杆菌复合微生物菌剂及其制备方法。该木霉菌株为深绿木霉Tr1208（<i>Trichoderma？atroviride</i>），保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC？No.6828；芽孢杆菌菌株为解淀粉芽孢杆菌B1126（<i>Bacillus？amyloliquefaciens</i>），保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC？No.6827。深绿木霉和解淀粉芽孢杆菌复合微生物菌剂是以深绿木霉Tr1208和解淀粉芽孢杆菌B1126菌体为有效活性成分，配以农业上可以接受的载体及保护剂制成；其中有效活性成分含菌量为5×109cfu/g？～2×1010cfu/g；菌体保护剂含量为0.1～1%（w/w）。菌剂可有效防控茄果类蔬菜病毒病（TMV、CMV、TYLCV等）的为害，并对植物有促进生长作用，具有高效、使用简单、成本低、无环境污染、改善植株微生态环境的特点。CGMCC No.682720121115
【IPC分类】A01P1/00, C12R1/07, A01N63/00, C12R1/885, C12N1/20, A01N63/04, C12N1/14, A01P21/00
【公开号】CN105567568
【申请号】CN201410529097
【发明人】王勇, 高苇, 张春祥, 王万立, 郝永娟, 刘春艳, 霍建飞
【申请人】天津市植物保护研究所
【公开日】2016年5月11日
【申请日】2014年10月10日